单克隆抗体可变区DNA序列的测定

采用聚合酶链反应方法获得单克隆抗体重，轻链的可变区基因，并进行了ＰＣＲ产物直接ＤＮＡ序列测定，或将扩增产物分别插入ｐＵＶ１８质粒，筛选出阳性克隆，用未端终止法进行ＤＮＡ序列测定，得到大约３５０ｂｐ可变区基因，符合Ｉｇ可变区基因编码。     

免疫组化选择性DNA序列测定技术探讨

为进一步提高ＤＮＡ序列分析方法的敏感性，用免疫组化选择性ＤＮＡ序列测定技术（ＩＨＳＳ），对食管癌前病变组织中肿瘤抑制基因Ｐ５３免疫阳性细胞进行测定。结果：ＩＨＳＳ法可分离和提高Ｐ５３免疫阳性细胞的数量，并可对发生极少量Ｐ５３蛋白聚集阳性细胞的病变组织进行ＤＮＡ序列测定。这一新方法还可应用于其它分子生物学的研究。     

免疫组化选择性DNA序列测定技术探讨

为进一步提高ＤＮＡ序列分析方法的敏感性，用免疫组化选择性ＤＮＡ序列测定技术（ＩＨＳＳ），对食管癌前病变组织中肿瘤抑制基因Ｐ５３免疫阳性细胞进行测定。结果：ＩＨＳＳ法可分离和提高Ｐ５３免疫阳性细胞的数量，并可对发生极少量Ｐ５３蛋白聚集阳性细胞的病变组织进行ＤＮＡ序列测定。这一新方法还可应用于其它分子生物学的研究。     

单克隆抗体可变区DNA序列的测定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法获得单克隆抗体重、轻链的可变区基因，并进行了ＰＣＲ产物直接ＤＮＡ序列测定，或将扩增产物分别插入ｐＵＣ１８质粒，筛选出阳性克隆，用末端终止法进行ＤＮＡ序列测定。得到大约３５０ｂｐ可变区基因，符合Ｉｇ可变区基因编码。直接法简便可靠，节省时间和试剂；而克隆法带有酶切位点，有利于基因工程抗体的构建和表达。     

短片段重复序列复合扩增技术在亲子鉴定中的运用

多位点复合扩增短片段重复序列（Short Tandem Repeat,STR）技术是运用最为广泛的人类遗传认定系统,其原因有以下几个方面：（1）可以对部分降解的或陈旧性生物标本中的DNA进行特异性扩增;（2）与DNA指纹技术、AMP-PLP技术和RFLP技术相比,STR技术仅需要1～5 ng的模板DNA;（3）可在同一PCR扩增管中加入3对以上的STR引物,在同一条件下进行扩增;（4）扩增结果易于分析,不需要放射性标记;（5）结果分析时,由于采用了等位基因Ladder,简化了结果的分析步骤,实现了结果分析的标准化,使得不同实验室的认定结果有了可比性,同时也为结果分析的自动化奠定了基础.于1998年初开始把这项技术运用于实际案例中,现将运用情况报告如下.     

图像测定分析DNA含量中影响测定精度的因素

应用图像分析仪进行细胞ＤＮＡ含量测定和统计分析，能显示２倍体或多倍体及非整倍体ＤＮＡ的百分含量，可反映染色体的畸变及程度。对肿瘤的早期诊断、组织学分级、预后判断和治疗方案的选择有较大的临床参考价值，从而成为肿瘤病理诊断和研究中的１个重要手段。目前这一...     

λ噬菌体DNA的快速提取法

从ｃＤＮＡ文库中筛选目的片段是获得新基因的常用和可靠手段。由于具有能扩增和长期保存不失活的优点，目前一般用λ噬菌体ＤＮＡ来作为ｃＤＮＡ文库载体。因此提取λ噬菌体ＤＮＡ便成为鉴定ｃＤＮＡ文库重组效率和获得目的片段的必由之路。通常提取λ噬菌体ＤＮＡ采用２...     

人瘦素基因克隆与序列测定

目的 构建人瘦素基因ｃＤＮＡ克隆，并进行序列分析。方法 用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因ｃＤＮＡ获得片段（６４０ｂｐ）连接至ｐＵＣ１９载体，并转化大肠杆菌ＤＨ５α。以末端终止法进行序列测定。结果 所克隆的人瘦素ｃＤＮＡ含全长的人瘦素基因编码区，仅２８７位的腺苷酸被鸟苷酸代谢，导致９６位编码谷氨酰胺的密码子ＣＡＡ改变为编码精氨酸的ＣＧＡ，其意义尚待阐明。结论 以逆转录聚合酶链反应方法成功地构建了人     

白念珠菌特异DNA片段与核酸杂交研究

用EcoRI对白念珠菌标准株Cli DNA做酶切分析,获得2.5kb片段,经~(32)P标记后分别与各种念珠菌、隐球菌和细菌进行核酸杂交。结果该片段与所有白念珠菌杂交强阳性,与近平滑念珠菌和1株热带念珠菌出现微弱杂交信号,与其它菌无杂交。提示该片段含有白念珠菌种特异性碱基序列,可望进一步制备成白念珠菌基因探针。     

牛雄性DNA特异的限制性片段研究

牛基因组DNA经PstI酶解后,以与性别有关的雌性蛇的小卫星DNA组份一BKm序列(p184)为探针进行分子杂交,回收4.4kb牛雄性DNA片段,以pUC_(19)为载体亚克隆,重组质粒经菌落原位杂交和Southern blot分子杂交鉴定。将此雄性DNA片段检测牛基因组DNA,观察到由于性别的不同而出现不一样的杂交模式。实验结果表明,用来自牛雄性DNA特异的限制性片段的重组质粒作探针,Southern blot分子杂交方法可以鉴定牛的性别。     

一种高效扩增小片段DNA方法的建立

目的建立一种高效扩增小片段DNA的方法。方法 本方法利用单链DNA连接酶(single strand DNA ligase,ssDNA ligase)可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29DNA聚合酶进行恒温的滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到了扩增后的小片段DNA。结果 单链DNA连接酶可以有效的将30bp的小片段DNA自连成环,phi29DNA聚合酶可以扩增出大于10kb的DNA片段,扩增产物经酶切后又可进行第二轮扩增,并且证明了其成环方式为自成环。结论 通过单链成环后滚环复制的这种方法可以有效的将小片段DNA进行扩增,解决了PCR无法扩增小片段DNA的问题,并有着广阔的应用前景。     

间日疟原虫深圳株红内期SSUrDNA基因片段的克隆与序列分析

目的 体外扩增间日疟原虫深圳株红内期小亚单位核糖体核糖核酸编码基因(SSUrDNA)片段，研究其结构与功能。方法 设计一对特异性引物，采用聚合酶链反应(PCR)从间日疟原虫患者血样中扩增出间日疟原虫SSUrDNA片段，以PUC19质粒T载体构建重组子导入大肠杆菌JM109；阳性克隆双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列。结果 间日疟原虫SSUrDNA扩增片段大小为341bp；阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；序列测定插入片段为341bp，与Sal I株顺序相比，仅在第151位处缺失一个碱基C。结论 成功克隆了间日疟原虫SSUrDNA片段．该序列在间日疟原虫虫株间高度保守。     

电子计算机在乙肝病毒DNA结构研究中的应用

以乙肝病毒DNA序列分析为例,较详细地介绍了电子计算机在分析DNA序列的同源性,寻找内切酶识别位点,开放读码框架,真核生物的特征顺序,发卡环,真核核糖体RNA结合位点等方面所进行的工作,这些工作是在我所VAX-11/730计算机上完成的。     

基金论文优先优惠发表

尊敬的作者：为了使优秀论文能够尽快发表，2006年起本刊将对基金论文采取优先优惠政策，各级基金项目的论文在同等条件下优先发表。国家级基金论文发表费优惠50％，省部级基金论文发表费优惠30％，厅局级基金论文发表费优惠15％。各级基金项目须附相应证明材料的复印件和加盖公章的单位证明。     

我国4个旋毛虫分离株DNA限制性酶切片断长度差异的比较研究

报告我国云南、河南、沈阳（猪）以及长春（犬）４个旋毛虫分离株，用１０种限制性内切酶分析比较其基因组ＤＮＡ酶切片断长度差异。结果表明：来自猪体与来自犬体的旋毛虫酶切图谱不同，显示宿主的不同比地理位置、气候条件差异在旋毛虫的分类上更有意义。     

犬腺病毒1型疫苗株DNA右末端序列分析

对ＣＬＬ（ｃａｎｎａｕｇｈｔｌａｂｏｒａｔｏｒｙｌｉｍｉｔｅｄ）ＤＮＡ的重要结构之一－－右末端序列进行检测分析,发现ＣＬＬ有一２３８ｂｌ１的末端倒置重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔｓ,ＩＴＲ）。在每一ＩＴＲ中含有３个拷贝的４０ｈｐ短重复序列,并认为４０ｂＰ短重复序列可能是病毒ＤＮＡ复制过程中病毒复制因子－－核素因子１（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ１,ＮＦ－１）结合位点,因而对病毒ＤＮＡ复制是必需结构。本实验结果对构建ＣＬＬ载体具有重要的指导意义。     

莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的DNA序列分析及其在大肠杆菌中的诱导表达

目的　为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法　采用 377型 DNA自动测序仪对莱姆病螺旋体重组质粒 p BX1的插入片段进行 DNA序列测定 ,并通过计算机软件对其进行限制性内切酶酶谱分析。然后将重组质粒 p BX1在大肠杆菌中进行诱导表达 ,并对其表达产物进行免疫印迹分析。结果　1重组质粒 p BX1插入片段大小为 477bp,其核苷酸序列与文献报道的 p83基因全序列相应区段相比较仅有一个碱基的变异 ,2成功绘制了该插入片段的限制性内切酶酶谱 ;3重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后获得了 2 9kd的融合蛋白 ;4Western- blotting分析表明该融合蛋白能与莱姆病多价抗血清呈强阳性印迹反应。结论　该研究成功地对莱姆病螺旋体 83kd抗原蛋白特异性区段进行了基因重组和表达 ,为进一步研究其在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础。     

应用PCR产物直接测序技术测定乙型肝炎病毒前C区基因序列

目的 :测定乙型重型肝炎和慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,探讨乙型肝炎病毒前C区基因变异的意义。方法 :采用PCR产物直接测序技术 ,测定 13例乙型重型肝炎和 10例慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,并与基因库中来自世界各地的不同基因型的毒株进行比较。结果 :患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,除发现乙型肝炎病毒前C区基因 1896位存在点变异外 ,还可见 184 6位点变异 ,且乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎 (P <0 .0 5 ) ,而 186 2位未检出变异。 1838位核苷酸全部为腺嘌呤核苷酸 (A) ,184 6位核苷酸大多为胸腺嘧啶核苷酸 (T) ,仅 4例发生了G→A点突变。经与不同基因型的毒株进行比较 ,提示沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株。结论 :乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎 ;沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株