凉血通瘀方对H_2O_2损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的:观察凉血通瘀方对H2O2损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡及P21和P53基因表达的影响。方法:100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况;荧光定量PCR法检测细胞中P21和P53基因表达情况。结果:凉血通瘀方可促进血管内皮细胞增殖,抑制其凋亡;降低P21和P53基因的表达;全面拮抗H2O2对血管内皮细胞的损伤,这可能是凉血通瘀方治疗出血性中风机理所在。     

大黄酸对过氧化氢诱导损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的:观察大黄酸对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡、NO、NOS及SOD表达的影响,探讨大黄酸保护血管内皮细胞氧化损伤的可能机理。方法:100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,采用倒置显微镜观察细胞形态,Hochest染色观察细胞凋亡情况;MTT法和试剂盒测定各组细胞增殖、NO、NOS的及SOD的表达情况。结果:100μmol/LH2O2可损伤血管内皮细胞、抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、降低NO、NOS含量和SOD的活力;而大黄酸则能改善H2O2诱导损伤的血管内皮细胞形态,促进其增殖,抑制其凋亡,提升NO、NOS的含量和SOD的活力,显示大黄酸对血管内皮细胞有一定的保护作用。     

凉血通淤方对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 通过离体细胞实验观察凉血通淤方对H2O2氧化损伤的血管内皮细胞(VEC)的保护作用.方法 建立体外H2O2氧化损伤模型,采用MTT法观察凉血通淤方对VEC增殖的影响,流式细胞仪检测凉血通淤方对VEC的影响,并通过光镜和电镜进行形态学观察.结果 MTT结果显示凉血通淤方大剂量组OD值比H2O2组明显增高(P<0.01);光镜结果显示凉血通淤方大剂量组的细胞形态基本正常;电镜结果显示凉血通淤方大剂量组的细胞空泡明显减少.流式细胞仪检测结果显示凉血通淤方组的细胞碎片率较H2O2模型组明显降低.结论 凉血通淤方可一定程度保护氧化损伤的血管内皮细胞.     

银杏内酯B对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤模型组(300μmol/L)、银杏内酯B(1、5、10μmol/L)预处理2 h加H2O2损伤组。用MTT比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS),流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH含量显著增加、NO含量及NOS活性显著下降、细胞凋亡率显著,提示H2O2明显造成HUVECs损伤和死亡。银杏内酯B使内皮细胞增殖活力显著增加、MDA和LDH含量显著减少、NO含量及SOD、GSH、NOS活性显著增加、细胞凋亡率显著降低,提示银杏内酯B可干扰H2O2对内皮细胞的损伤作用。结论:银杏内酯B具有抗氧化作用,能抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用。     

原花青素对过氧化氢损伤内皮细胞SOD、GSH-PX活性的影响

目的 观察原花青素对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组、H2O2损伤组、H2O2+VitC组、H2O2+原花青素5、25、50μmol/L组.将750μmol/L H202作用于加入Vit C及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测原花青素对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用;用流式细胞仪分析-AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;定量检测各实验组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力.结果 内皮细胞H2O2损伤后吸光度(OD)低于空白对照组,原花青素预处理后OD值增加且呈剂量依赖性;H2O2损伤可引起细胞SOD及GSH-PX活性明显降低,原花青素能维持SOD、GSH-PX活性,且呈剂量依赖性,各指标差异有显著性,并且呈剂量依赖性抑制H2O2诱导的内皮细胞的凋亡.结论 原花青素能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤及凋亡,其作用可能与维持SOD、GSH-PX活性有关.     

次乌头碱对H_2O_2致大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨次乌头碱对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤所致细胞凋亡的保护作用及其可能的分子机制。方法:采用250ng/ml的次乌头碱预处理心肌细胞,之后加入100μmol/L的H2O2,应用MTS方法检测细胞的增殖活力,流式细胞术AnnexinV/PI检测细胞凋亡率,Western Blot检测凋亡蛋白Caspase3和9的表达。结果:100μmol/LH2O2可引起心肌细胞凋亡增加,而次乌头碱预处理后,心肌细胞增殖活力及凋亡率可明显改善,并显著减少了Caspase3和9蛋白的表达。且次乌头碱单独处理组与正常对照组相比心肌细胞增殖活力、凋亡率及Caspase3和9的蛋白表达均未见明显变化。结论:适宜浓度的次乌头碱对H2O2所致的心肌细胞凋亡有明显的改善作用;其机理可能与其降低凋亡蛋白的表达,增加细胞的增殖活力相关。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究白藜芦醇(Res)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤及凋亡的保护作用及机制.方法体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤组(300μmoL)、Res低浓度(5 μmoL/L)、中浓度(10 μmoL/L)、高浓度(20 μmoL/L)预处理1 h加H2O2损伤组.用噻唑蓝比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)量、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性,流式细胞仪分析细胞凋亡率,western blot检测caspase-3的表达.结果 与空白对照组比较,H2O2损伤模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH量显著增加、SOD和GSH活性显著下降、细胞凋亡率和caspase-3表达显著增加(P＜0.01).结论 Res通过降低与凋亡过程直接相关的caspase-3表达,抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用.     

蛇毒三肽pENW对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究蛇毒三肽pENW对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:用体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,H2O2(300μmol/L,12h)模拟氧化损伤模型;药物处理组分别加入不同剂量的蛇毒三肽pENW(10-4mol/L,10-5mol/L,10-6mol/L)以及阳性对照药依达拉奉(10-5mol/L);用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH-Px)的含量;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:蛇毒三肽pENW(10-4mol/L,10-5mol/L)能够显著抑制H2O2对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用,降低H2O2诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡,降低LDH漏出率,提高人脐静脉内皮细胞中SOD、GSH-Px活性。结论:蛇毒三肽pENW可降低过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用,其保护作用可能与抗氧化及抑制细胞凋亡有关。     

蓬子菜含药血清对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察蓬子菜含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型细胞增殖与凋亡的影响,从分子生物学水平阐明蓬子菜保护血管内皮细胞的部分机制。方法:用不同浓度(0%,2%,5%,10%)的蓬子菜含药血清及通塞脉片含药血清与体外培养的经H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型共同孵育,以CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与对照组比较,蓬子菜含药血清能够明显减轻H2O2对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,促进HUVECs的增殖,并与浓度呈正相关;能显著降低细胞内活性氧的含量,减少H2O2诱导的HUVECs凋亡;且优于正常血清组及通塞脉片血清组(P0.05)。结论:蓬子菜能促进内皮细胞增殖,降低细胞内活性氧的含量,减少细胞凋亡,从而阻止ASO的发生,达到预防和治疗ASO的作用。     

调脂一号含药血清对H_2O_2诱导HUVECs炎症因子表达的影响

目的:探讨调脂一号(TZYH)含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性因子表达的影响。方法:采用100μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,TZYH含药血清倍比稀释后分为3个剂量干预组(体积分数10%),运用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验检测细胞分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的变化,进一步通过RT-PCR方法检测炎症因子相关基因白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的表达。结果:TZYH含药血清能明显提升H2O2损伤后的HUVECs存活率,流式细胞技术结果显示TZYHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;ELISA和RT-PCR结果提示TZYHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低IL-1β、TNF-αmRNA和蛋白的表达实现的。结论:TZYH含药血清可以抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,对血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

关于PD2、PA2、PD2＇计算方法的探讨

目的：叙述近年来关于PD2、PA2、PD2’各自含义、计算方法，以阐明其研究意义。方法：通过对药理实验方法学中有关内容的阐述，以及对近10年来相关文章的对比分析和总结，得到一些对今后的药物研究有帮助的参考性知识。结论：PD2、PA2、PD2’的测定基本上是首先通过某一药物的动物或计算机虚拟实验，然后用图解法、计算方法（包括软件计算）或者二者联用的方法三种思路求得各自具体数值。     

糖尿病肾病不同中医辨证分型患者中CDKN2A，CDKN2B，IGF2BP2和CDKAL1基因表达研究

目的：研究糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中CDKN2A,CDKN2B,IGF2BP2和CD—KAL1基因的表达量。方法：提取血液样本中的mRNA,并以此为模板进行反转录得到cDNA,以Real—TimePCR方法测定目的基因的表达量。结果：建立了这4个基因的定量方法,测定了50例正常人和53例糖尿病肾病患者中的基因表达量。结论：本研究在糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中测定了4个基因的表达量水平,对这些基因的表达量与糖尿病肾病中医辨证分型的关系进行了研究,为糖尿病肾病中医的临床诊断提供了量化指标,并同时指出基因研究对于中医中药的临床诊断和治疗具有深远的意义。     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中NOS与ET的影响。探讨冠心平治疗冠心病的可能机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用100umol/L H2O2损伤细胞,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组。用血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测NOS与ET。结果：100umol/L H2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著提高NOS的活性;显著减少H202诱导ECV304ET的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其提高NOS活性,增加NO合成,并且减少ET的合成,从而调节血管舒缩功能有关。     

糖尿病肾病不同中医辨证分型患者中CDKN2A，CDKN2B，IGF2BP2和CDKAL1基因表达研究

目的：研究糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中CDKN2A,CDKN2B,IGF2BP2和CDKAL1基因的表达量。方法：提取血液样本中的mRNA,并以此为模板进行反转录得到cDNA,以Real-Time PCR方法测定目的基因的表达量。结果：建立了这4个基因的定量方法,测定了50例正常人和53例糖尿病肾病患者中的基因表达量。结论：本研究在糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中测定了4个基因的表达量水平,对这些基因的表达量与糖尿病肾病中医辨证分型的关系进行了研究,为糖尿病肾病中医的临床诊断提供了量化指标,并同时指出基因研究对于中医中药的临床诊断和治疗具有深远的意义。     

瘰疬宁与细胞因子IL-2及IL-2R

淋巴结结核,是人体感染结核杆菌引起的一种常见的肺外结核。人体免疫功能低下时,容易感染结核杆菌。细胞免疫力的强弱在结核病发生、发展与转归中起着关键性作用,特别是T细胞的数量与功能更为重要。IL-2由Th1细胞产生,能刺激抗原特异的T细胞增殖,是抗结核免疫中重要的细胞因子。瘰疬宁可使IL-2分泌增加,增强患者细胞免疫力。     

改良保肾方Ⅱ号对糖尿病肾病大鼠肾脏病理和肾组织MMP-2/TIMP-2表达的影响

目的 观察改良保肾方Ⅱ号对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾组织MMP-2/TMP-2表达的影响,探讨本方治疗糖尿病肾病的机制.方法 以链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型.观察用药12周后不同剂量改良保肾方Ⅱ号对大鼠肾脏病理的改变.采用明胶酶谱法测定MMP-2活性,以Western Blot检测TIMP-2表达.结果 药物干预12周后,各药物干预组(盐酸贝那普利组、小剂量中药组、大剂量中药组)大鼠的BUN、SCr、UAER水平较未经药物治疗的空白模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),大剂量中药组BUN、SCr、UAER较盐酸贝那普利组降低,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),小剂量、大剂量中药组对Glu降低作用与空白模型组、盐酸贝那普利组比较,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01).大剂量改良保肾方Ⅱ号组在对大鼠肾脏病理及MMP-2/TIM-2表达方面,与盐酸贝那普利组比较差异均无统计学意义.Weatern Blot检测TIMP-2结果表示空白模型组、盐酸贝那普利组、小剂量中药组、大剂量中药组与空白对照组比较MMP-2表达均下降且有统计学意义(P<0.01).而TIMP-2上升或无差异.结论 改良保肾方Ⅱ号可以改善大鼠糖尿病肾病肾脏病理改变,并通过调节MMP-2/TIMP-2平衡,延缓糖尿病肾病的进展.     

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶HK2，PFK2，PKM2的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2),6-磷酸果糖激酶2(phosphofructokinase,PFK2),M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase isoform M2,PKM2)的表达及葡萄糖含量的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。所有小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组剂量分别为11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周,处死小鼠取瘤组织;氧化酶法检测葡萄糖含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HK2 mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测PFK2蛋白表达;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)检测PKM2活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞HK2 mRNA表达及PKM2活性显著降低,葡萄糖含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组肺癌细胞PFK2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清燥救肺汤可有效抑制荷Lewis肺癌细胞增殖,降低肺癌细胞葡萄糖摄取速率,糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2可能是其药效作用靶点。     

油茶皂苷对LO2和HK-2细胞的毒性作用研究

目的:观察油茶皂苷(SQS)对人正常肝细胞(LO2)和肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用,并初步探讨其毒性作用机制。方法:体外培养LO2和HK-2细胞,采用MTT法评价SQS对LO2和HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响,并检测细胞裂解上清液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组比较,各浓度的SQS均可明显抑制LO2和HK-2细胞增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。在50.0~200.0 mg/L范围内,SQS能明显提高LO2和HK-2细胞培养上清液中LDH活力(P<0.05或P<0.01),显著降低SOD的活力和增加MDA的含量(P<0.01)。结论:SQS对LO2和HK-2细胞有一定的细胞毒性作用,其作用机制可能是通过增加对细胞膜通透性的影响及氧化损伤而实现。     

菟丝子黄酮类组分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的：探讨菟丝子中黄酮类组分（CF）对氧化损伤的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（Pheochromocytoma，PC12）的保护作用及其可能的作用机制。方法：从菟丝子中提取纯化黄酮类活性成分（CF），采用MTT法检测细胞活力，DPPH测定CF在无细胞体系中对自由基的清除能力，利用Hoechst 33258染色和流式细胞仪技术对凋亡细胞进行形态观测和比例测定。结果：0．3～0．5mmol／L H2O2能够剂量与时间依赖性降低PC12细胞的存活率，诱导细胞凋亡。不同剂量CF预处理可提高PC12细胞存活率，明显抑制细胞的凋亡，降低细胞的凋亡比率；CF对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强。结论：CF对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用，其机制可能是通过清除自由基、提高抗氧化酶活性从而抑制细胞的凋亡。     

姜黄素对HepG2细胞固醇调控元件结合蛋白-2表达的影响

目的研究姜黄素对人肝癌细胞株(Human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)固醇调控元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)基因表达的影响,从信号调控通路水平进一步探讨姜黄素的降胆固醇作用机理。方法分别利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactionm,PCR)技术研究姜黄素对HepG2细胞SREBP-2核片段碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix protein,bHLH)表达及SREBP-2 mRNA的影响。结果20 mol/L姜黄素可以促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH增多,而对SREBP-2mRNA表达无影响。结论姜黄素可以通过促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH的增多,上调低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL-R)的表达,起到降低血清胆固醇的作用。