酸枣仁汤对失眠大鼠中脑中缝背核神经胶质细胞的影响

目的:研究酸枣仁汤对失眠大鼠中脑中缝背核星形胶质细胞和小胶质细胞的作用.方法:采用连续2 dip对氯苯丙氨酸(PCPA) 350 mg·kg-1的方法建立失眠大鼠模型.动物随机分为空白对照组,模型组,酸枣仁汤治疗组和西药对照组.酸枣仁汤治疗组按15,7.5,3.75 g·kg-1ig7 d,西药对照组按2 mg· kg-1给予艾司唑仑2 mg·kg-1 ig7 d.取脑组织,用HE染色观察中脑中缝背核区神经细胞损伤情况,采用免疫组织化学染色法对中脑胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞OX42进行染色,观察与睡眠和觉醒密切相关的中脑中缝背核GFAP和OX42表达的变化.结果:PCPA失眠模型组神经损伤评分与空白对照组相比具有显著性差异(P＜0.01),PCPA失眠模型组大鼠中脑中缝背核GFAP与OX42表达增强,阳性缅胞数增多,与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);酸枣仁汤高剂量组(15 g·kg-1) GFAP与OX42表达与模型组相比具有显著性差异(P＜0.01),酸枣仁汤高剂量组GFAP与OX42表达与西药对照组相比无显著性差异.结论:PCPA所致失眠能导致大鼠中脑中缝背核组织损伤,PCPA所致失眠能激活大鼠中脑中缝背核星形胶质细胞积小胶质细胞,酸枣仁汤能减少失眠大鼠中脑中缝背核星形胶质细胞和小胶质细胞的激活,改善神经细胞损伤程度,这可能是酸枣仁汤治疗失眠症的作用环节之一.     

酸枣仁汤对PCPA致失眠大鼠大脑皮质代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2的影响

目的:观察对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠大脑皮质中代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2表达的改变情况,以及酸枣仁汤(SZRD)对PCPA所致失眠大鼠脑皮质中代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2表达的影响,探讨酸枣仁汤治疗失眠可能的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、SZRD对照组、SZRD高剂量组15g/(kg·d)、SZRD中剂量组7.5g/(kg·d)、SZRD低剂量组3.75g/(kg·d),每组6只。采取腹腔注射PCPA的方法建立失眠大鼠模型,各组灌胃相应药物7天后,取大脑皮质,采用免疫组织化学染色法检测mGluR1、mGluR2表达情况。结果:PCPA模型组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达明显增高,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P0.01)。SRZD高、中、低剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2表达均降低,SZRD高剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与PCPA模型组比较差异具有统计学意义(P0.01)。SZRD中剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与PCPA模型组比较差异具有统计学意义(P0.01)。SZRD低剂量组大鼠mGluR1的表达与PCPA模型组比较差异无统计学意义(P0.05),而两组mGluR2表达比较差异具有统计学意义(P0.01)。SZRD对照组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:PCPA致失眠大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达量升高,酸枣仁汤能调节PCPA所致失眠大鼠脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达,提示酸枣仁汤治疗失眠的机制可能与激活大鼠脑皮质内谷氨酸受体的表达有关。     

酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠大脑皮质代谢型谷氨酸受体和受体后cAMP、PKA的干预作用

目的:探讨PCPA失眠大鼠皮质代谢型谷氨酸受体(mGluRs)和受体后cAMP、PKAmRNA表达的变化及酸枣仁汤(SZRD)的干预作用。方法:采用连续3d腹腔注射氯苯丙氨酸350 mg·kg~(-1)的方法建立失眠大鼠模型,动物按随机数字表法分为空白对照组、模型组、SZRD大、中、小剂量组、SZRD对照组、5-HTP组,采用实时荧光定量PCR法检测皮质组织mGluR1、2、7及cAMP、PKAmRNA表达的变化。结果:模型组mGluR1、2、7 mRNA表达量显著增加,PKA、cAMP mRNA表达量明显下降。SZRD大剂量组和中剂量组的mGluR1、2、7mRNA表达量下降,SZRD大剂量组的PKA、cAMP mRNA表达量明显上升。SZRD本身并不改变正常大鼠皮质mGluR1、2、7、cAMP及PKAmRNA的表达,5-HTP组能导致皮质mGluR1、2 mRNA表达量增加,cAMP、PKAmRNA表达量明显下降。结论:PCPA引致皮质组织mGluR1、2、7mRNA表达量增加,PKA、cAMP mRNA表达量下降,SZRD能对上述变化发生干预作用。     

PCPA失眠后大鼠不同时间大脑皮质钠-钾ATP酶和钙-镁ATP酶活性变化及酸枣仁汤的干预作用

目的研究PCPA失眠后大鼠大脑皮质不同时间大脑皮质钠-钾ATP酶和钙-镁ATP酶活性变化及酸枣仁汤的干预作用。方法采用连续3天ip对氯苯丙氨酸(PCPA)350mg·kg-1的方法建立失眠大鼠模型。动物随机分为空白对照组、模型组、5-羟色氨酸(5-HTP)组、酸枣仁汤(SZRD)治疗组、5-HTP+SZRD组、SZRD对照组和正常对照组。SZRD治疗组按15g·kg~(-1)ig 7d。各组分别在实验第4、5、6、8、10天取皮质组织,采用无机磷法同时测定钠-钾三磷酸腺苷酶(Na+/K+-ATPase)和钙-镁三磷酸腺苷酶(Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase)活性。结果实验第4、5、6、8、10天PCPA失眠模型组Na~+/K~+-ATPase和Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase活性均明显下降,与空白对照组相比具有显著性差异(P0.01),实验第8天和第10天SZRD治疗组Na~+/K~+-ATPase活性明显升高,与模型组相比具有显著性差异(P0.01);实验第8天和第10天SZRD治疗组Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase的活性明显升高,与模型组相比具有显著性差异(P0.05)。结论 PCPA所致失眠能导致大鼠皮质组织Na~+/K~+-ATPase和Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase的活性明显下降,酸枣仁汤能调节PCPA失眠大鼠皮质Na~+/K~+-ATPase和Ca~(2+)/Mg~(2+)-ATPase的活性,这可能是酸枣仁汤治疗失眠症的中枢机制之一。     

PCPA对大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2基因表达的影响及酸枣仁汤的干预作用研究

目的:研究PCPA对大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2mRNA表达的影响,探讨酸枣仁汤治疗失眠的潜在机制。方法:SPF级SD大鼠50只,随机分为正常组、对照组、PCPA组、酸枣仁汤组、PCPA+酸枣仁汤组,每组10只。根据实验动物分组采取相应处理,RT-PCR检测大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2mRNA的表达情况。结果:与对照组相比,PCPA组P450scc mRNA表达增加(P0.05),CB1RmRNA表达下降(P0.01),MAP2mRNA表达降低(P0.05),差异具有统计学意义。与PCPA组比较,PCPA+SZRD组P450scc mRNA表达降低(P0.05),CB1R mRNA表达增加(P0.05),MAP2mRNA表达增加(P0.01),差异具有统计学意义。对照组与正常组、对照组与SZRD组比较,P450scc、CB1R、MAP2mRNA表达均无统计学差异(P0.05)。结论:PCPA能导致大鼠大脑皮质P450scc mRNA表达增加,CB1R、MAP2mRNA表达下降,酸枣仁汤能降低P450scc mRNA表达,增加CB1R、MAP2mRNA表达,提示酸枣仁汤治疗失眠的机制可能与中枢神经甾体及其受体有关。     

PCPA失眠大鼠脑干NG2细胞和NMDA受体的表达及酸枣仁汤的干预作用

目的:观察对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠脑干NG2细胞和NMDA受体mRNA的表达,探讨酸枣仁汤治疗失眠的可能机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、对照组、PCPA组、酸枣仁汤组、PCPA+酸枣仁汤组,每组10只,采用腹腔注射PCPA制作失眠大鼠模型,灌胃不同药物后取材,采用RT-PCR检测NG2和NMDA受体mRNA的表达情况。结果:PCPA组NG2细胞、NMDA受体mRNA表达升高,NG2表达量与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),NMDA受体表达量与对照组比较差异有显著统计学意义(P0.01);与PCPA组比较,PCPA+酸枣仁汤组NG2、NMDA受体mRNA表达下降(P0.05),差异有统计学意义。正常组和对照组NG2、NMDA受体表达量比较无统计学意义(P0.05)。结论:PCPA诱导的失眠大鼠NG2细胞和NMDA受体表达升高,而酸枣仁汤可以下调二者表达量,提示酸枣仁汤干预失眠的机制可能与调节NG2细胞和NMDA受体的表达有关。     

酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠焦虑样行为的影响

目的 研究酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠焦虑样行为的影响。方法 腹腔注射PCPA建立失眠大鼠模型，72只大鼠随机分为对照组，模型组，酸枣仁汤低、中、高剂量组，舒乐安定组。采用行为学实验观察入睡潜伏期、睡眠持续时间、开放臂进入次数、开放臂停留时间，HE染色观察病理变化，RT-qPCR法、Western blot法、免疫组化法检测BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达及GFAP蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠入睡潜伏期延长(P<0.01),睡眠时间缩短(P<0.01),并出现焦虑样行为，前额叶出现病理损伤，BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),GFAP蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较，酸枣仁汤各剂量组大鼠入睡潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01),睡眠时间延长(P<0.05,P<0.01),焦虑缓解，前额叶病理损伤改善，BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),GFAP蛋白表达降低(P<0.05,P&l...     

和胃安神方对失眠模型大鼠血清Th1/Th2平衡及中缝背核GFAP、BDNF表达的影响

目的探讨和胃安神方对失眠模型大鼠血清Th1/Th2平衡及中缝背核胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法 32只雄性Wistar大鼠完全随机法分组。采用对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine,PCPA)法进行造模,造模成功后,对各组大鼠进行相应方式的灌胃处理,7天后进行腹主动脉采血和冰上取脑组织保存待测。采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4及IL-10,采用免疫组化观察GFAP、BDNF在中缝背核的表达情况。结果与模型组比较,和胃安神方组IFN-γ和TNF-α含量均显著升高(P0.01)、IL-10含量显著降低(P0.01)、IL-4含量无明显差异(P0. 05),IFN-γ/IL-4比值显著升高(P0.01);与模型组比较,地西泮组、和胃安神方组大鼠中脑中缝背核GFAP和BDNF平均光密度(mean optical density, MOD)值均显著升高(P0. 05,P0. 01;P0. 01,P0.05)。结论 GFAP、BDNF的表达增强和Th1/Th2平衡向Th1方向偏移可能是和胃安神方治疗失眠的疗效机制之一。     

PCPA失眠大鼠大脑皮质星形胶质细胞GFAP和P2X7受体表达的变化及酸枣仁汤的干预作用

目的:研究PCPA诱导大鼠失眠后大脑皮质星形胶质细胞GFAP和P2X7R表达的变化及SZRD的干预作用。方法:采用连续3 d腹腔注射PCPA的方法复制失眠模型,大鼠随机分为对照组,模型组,中药治疗组和中药对照组,中药治疗组和中药对照组给予SZRD灌胃7 d。各实验组分别在第4、5、6、8、10天取大鼠大脑皮质前额叶,采用免疫荧光双染法检测各组大鼠不同时间大脑皮质GFAP和P2X7R蛋白表达,用实时荧光定量PCR法测定各组大鼠不同时间大脑皮质P2X7R基因mRNA表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠不同时间大脑皮质GFAP、P2X7R蛋白及mRNA表达均明显上调(P0.01);与模型组比较,第5、6、8、10天中药治疗组GFAP表达逐渐下降(P0.05,P0.01),第6、8、10天中药治疗组P2X7R蛋白表达逐渐降低(P0.05,P0.01),第8、10天中药治疗组P2X7R mRNA表达水平逐渐下调(P0.05,P0.01)。结论:SZRD干预PCPA所致失眠的机制可能与调控大鼠大脑皮质星形胶质细胞GFAP和P2X7R的表达有关。     

和胃安神方对失眠模型大鼠血清IL-2、IL-13和中缝背核Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察和胃安神方对失眠模型大鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-13(IL-13)和中缝背核区域B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、细胞凋亡促进基因Bax表达的影响。方法将32只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地西泮组、和胃安神方组,每组8只,除正常组外,其余组均采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)法建立失眠大鼠模型。建模第3天开始,正常组和模型组给予生理盐水10 mL/kg灌胃,地西泮组给予相同体积92 mg/L地西泮水溶液灌胃,和胃安神方组给予和胃安神方水煎液17.5 g/mL灌胃,均1次/d,连续7 d。观察各组大鼠实验期间行为学和体质量变化;末次灌胃24 h后取血检测各组大鼠血清IL-2、IL-13水平,计算IL-2/IL-13比值;取大鼠脑组织,采用免疫组化法检测中脑中缝背核区域Bcl-2及Bax表达情况,计算Bcl-2/Bax比值。结果灌胃7 d后,模型组大鼠体质量及血清IL-2水平、IL-2/IL-13比值均明显低于正常组(P均0.05),血清IL-13水平明显高于正常组(P0.05);地西泮组与和胃安神方组大鼠体质量及血清IL-2、IL-2/IL-13比值均明显高于模型组(P均0.05),血清IL-13水平明显低于模型组(P均0.05);且和胃安神方组大鼠睡眠昼夜节律基本恢复正常。与模型组比较,地西泮组Bcl-2、Bax表达光密度值与和胃安神方组Bcl-2表达光密度值均明显升高(P均0.05);与地西泮组比较,和胃安神方组Bax表达光密度值明显降低(P0.05)。结论和胃安神方可有效调节失眠模型大鼠IL-2、IL-13合成分泌,增强Bcl-2和Bax表达,这可能是该方治疗失眠的重要机制。     

整合代谢组学与肠道菌群分析酸枣仁汤改善失眠大鼠的作用机制

为探讨酸枣仁汤(SZRD)改善对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠模型的作用机制,通过腹腔注射PCPA溶液(400 mg·kg^-1)制备失眠大鼠模型。利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对大鼠海马样本进行代谢产物轮廓分析,并结合多元统计分析结合筛选差异代谢物,借助MetaboAnalyst 5.0构建相关代谢通路。利用16S rRNA基因V3～V4区高通量测序,通过LEfSe、OPLS-DA、PICRUSt2预测功能分析肠道菌群的结构及相对丰度变化。在海马中共鉴定出22个差异代谢物,包括氨基酸类、脂肪酸类、核苷类、有机酸类、维生素类、其他类等;共涉及8条代谢通路,主要为丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,精氨酸生物合成等。16S rRNA基因测序显示,瘤胃球菌属Ruminococcus、真杆菌属Eubacterium是SZRD组与模型组的差异菌群;PICRUSt2与LEfSe整合分析表明瘤胃球菌属Ruminococcus可能是SZRD改善PCPA失眠大鼠的标志性菌属。进一步采用Spearman相关性分析,...     

酸枣仁汤防治睡眠剥夺性大鼠学习记忆功能变化及其对NLRP3通路的影响

目的:基于Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体通路探讨酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆功能的作用机制.方法:将实验大鼠随机分为正常组,模型组,艾司唑仑组(5.4×10-4g·kg1·d-1),酸枣仁汤低剂量组(4.59g·kg-1·d-1),酸枣仁汤高剂量组(18.36 g·kg-1·d-1).除正常组外,其他组构...     

吴茱萸敷贴涌泉穴干预失眠机制实验研究

目的:观察吴茱萸敷贴涌泉穴对腹腔注射对氯苯基丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠单胺类神经递质的影响,探讨其治疗失眠可能的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、吴茱萸敷贴组、艾司唑仑组、吴茱萸敷贴+艾司唑仑组、生理盐水对照组,每组10只。通过腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,造模成功后,分别给予艾司唑仑灌胃及吴茱萸敷贴大鼠涌泉穴,1次/d,连续5天。采用Western Blot法、ELISA法检测大鼠下丘脑内5-HT、5-HIAA、NE的含量。结果:艾司唑仑组、吴茱萸贴治疗组、吴茱萸贴+艾司唑仑组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA含量较模型组含量上升,NE含量下降,且吴茱萸贴治疗组较艾司唑仑组中5-HT、5-HIAA含量升高明显,NE含量下降明显。结论:吴茱萸敷贴涌泉穴治疗失眠的效果优于艾司唑仑,且二者合用具有协同效应,作用机制可能是兴奋五羟色胺能神经元,抑制蓝斑从而改善失眠。     

脾阳虚证失眠大鼠模型的建立和附子理中汤的干预效应

目的:探讨附子理中汤对脾阳虚证失眠大鼠下丘脑增食素(orexin) mRNA表达及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA axis)的影响及机制.方法:100只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、附子理中汤低剂量组,中剂量组和高剂量组5组,每组20只.模型组按400 mg· kg-1 ip对氯苯丙氨酸(PCPA)每天1次,连续2d,建立脾阳虚证失眠模型.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别以附子理中汤10,20,40 g·kg-1 ig,每日1次,连续7d.疗程结束后对各组大鼠用ELISA法检测下丘脑5-羟色胺(5-HT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,RT-PCR法检测下丘脑orexin mRNA表达.结果:与正常组相比,模型组orexin mRNA表达量显著升高(P＜0.01),5-HT含量显著降低(P＜0.01);CRH,ACTH含量显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,附子理中汤高剂量组orexin mRNA表达量显著降低(P＜0.01),附子理中汤高、中剂量组5-HT含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05);高剂量组CRH,ACTH含量显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:附子理中汤下调orexin mRNA表达,抑制HPA轴激活,降低应激反应性,可能是其治疗失眠的机制之一.     

PCPA致大鼠NG2细胞的变化,NG2与GABA的共存关系及酸枣仁汤的干预作用研究

目的:探讨大鼠脑内五羟色胺(5-HT)含量下降后皮质部分NG2细胞的变化,NG2细胞与星形胶质细胞(Ast)、γ-氨基丁酸(GABA)的共存关系及酸枣仁汤的干预作用.方法:根据随机数字表法将雄性SD大鼠分为7d正常组、7d对照组、7d对氯苯丙氨酸(PCPA)组、15 d正常组、15 d对照组、15 d PCPA组、酸枣仁汤(SZRD)组、PCPA+SZRD组,各组大鼠给予相应处理.取大脑皮质前额叶,采取免疫荧光双染法测定大鼠皮质NG2细胞、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GABA的表达量及NG2/GFAP、NG2/GABA共存定位情况.结果:与7d对照组比较,7 d PCPA组大鼠皮质NG2细胞、GFAP蛋白表达量增加(P＜0.01),GABA蛋白表达量下降(P＜0.05);与15 d PCPA组比较,PCPA+SZRD组大鼠皮质NG2细胞、GFAP蛋白表达量下降(P＜0.01),GABA表达量上升(P＜0.05);NG2细胞与GABA在同一区域表达较多,而与GFAP在同一区域表达较少.结论:5-HT系统的失调能激活皮质NG2细胞、Ast,抑制GABA的表达,NG2细胞可能与Ast、GABA共同影响大脑皮层兴奋性来调节睡眠,酸枣仁汤可能通过5-HT系统调控NG2细胞、Ast、GABA来参与皮层活动的神经调节.     

酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠学习记忆功能及海马突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的 观察酸枣仁汤对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学，海马突触神经生长相关蛋白-43（GAP-43）、突触后密度蛋白-95（PSD-95）、突触素Ⅰ（SynⅠ）的影响，探讨酸枣仁汤改善PCPA失眠大鼠行为学的机制。方法 取72只SD大鼠，每组12只随机分为6组，空白组（生理盐水），PCPA（0.35 g·kg^-1·d^-1）组，艾司唑仑（2.7×10^-4 g·kg^-1·d^-1）组，酸枣仁汤低、中、高剂量（3.25、7.5、15 g·kg^-1·d^-1）组。腹腔注射PCPA建立失眠大鼠模型，造模结束后各治疗组分别给与酸枣仁汤和艾司唑仑共7 d，采用Moriss水迷宫和Y迷宫检测学习记忆功能，旷场检测焦虑样行为。苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织病理变化，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化（IHC）检测海马GAP-43、PSD-95、SynⅠ mRNA和蛋白表达。结果 与空白组比较，PCPA组大鼠Moriss水迷宫逃避潜伏期时间显著延长，平台所在象限停留时间和穿越平台次数显著下降，Y迷宫交替正确率显著下降，旷场运动距离、平均速度和中心区停留时间显著提高（P<0.01），海马病理损伤明显，海马GAP-43、PSD-95、SynⅠ mRNA和蛋白表达显著下调（P<0.01）；与PCPA组比较，酸枣仁汤低、中、高剂量组及艾司唑仑组大鼠Moriss水迷宫逃避潜伏期时间降低，平台所在象限停留时间和穿越平台次数提高，Y迷宫交替正确率提高，旷场运动距离、平均速度和中心区停留时间明显降低（P<0.05，P<0.01），海马病理损伤有所改善，海马GAP-43、PSD-95、SynⅠ mRNA和蛋白表达提高（P<0.05，P<0.01）。结论 酸枣仁汤可能通过上调海马突触可塑性相关蛋白GAP-43、PSD-95、SynⅠ mRNA和蛋白表达改善PCPA失眠大鼠学习记忆障碍和焦虑水平。     

酸枣仁汤对DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠的药效学研究

目的:探讨酸枣仁汤治疗DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠大鼠的药理作用机制。方法:将50只大鼠随机分为正常对照组、模型组、地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组,每组10只,适应性喂养2 d,2 d后开始给药,并每天称体质量,大剂量组灌胃给予酸枣仁汤12 g·kg~(-1),小剂量组灌胃给予酸枣仁汤6 g·kg~(-1),地西泮组灌胃给予地西泮溶液1 mg·kg~(-1),正常对照组与模型组根据体质量灌胃等体积蒸馏水。建立DL-4-氯苯基丙氨酸(PCPA)大鼠失眠模型,观察酸枣仁汤对失眠大鼠自主活动次数的影响,Elisa法检测其脑内5-羟色胺(5-hydroxytvyptarmne,5-HT)、谷氨酸(glutamate,GLU)、伽马氨基丁酸(gamma amino butyric acid,GABA)、去甲肾上腺素(noradren dline,NE)及其代谢产物五羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。结果:与模型组比较,地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组大鼠自主活动次数高于模型组,但差异无统计学意义(P0.05);酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组5-HT、5-HIAA、GABA、GLU、NE的含量均有明显变化,与模型组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:酸枣仁汤小剂量组可以明显改善PCPA所致失眠对大鼠的影响,主要体现在大鼠自主活动次数的增加,以及5-HT、5-HIAA等指标的恢复。     

D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸致肾不藏志不寐大鼠下丘脑神经递质和凋亡基因的实验研究

目的:观察D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸(PCPA)致肾不藏志不寐大鼠下丘脑神经递质和凋亡基因的变化。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、老年组、失眠组、肾不藏志不寐组(模型组),每组10只。老年组大鼠给予D-半乳糖皮下注射,失眠组给予对PCPA腹腔注射,肾不藏志不寐组给予D-半乳糖皮下注射联合PCPA腹腔注射建立模型,对照组给予等剂量生理盐水注射。造模结束后测量各组大鼠体质量、采用水迷宫观察大鼠定位航行探索运动轨迹、采用RT-PCR法检测各组大鼠下丘脑GABAARα1、GABAARβ2、GABAARγ2、Bax、Bcl-2 mRNA的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组体质量显著降低(P<0.01);定位航行探索运动轨迹显著延长;模型组下丘脑GABAARα1、GABAARβ2、GABAARγ2、Bcl-2mRNA相对表达量均显著性降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.05);下丘脑Bax mRNA相对表达量显著性增加(P<0.05)。结论:D-半乳糖联合PCPA致肾不藏志不寐大鼠下丘脑睡眠相关的神经递质和凋亡基因表达发生改变。     

四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响

目的:观察四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响。方法:采用SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型,将复制成功的模型大鼠随机分为模型组、西药组、四逆散组、酸枣仁汤组、合方组,并设置空白对照组,各组给予相应药物连续7 d,模型组和正常组生理盐水连续灌胃7 d,并观察各组大鼠的一般活动状态和体质量增量。采用实时荧光定量PCR检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1mRNA的表达;采用Western Blot的方法检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1蛋白的表达。结果:四逆酸枣仁汤合方可以提高海马中GABAARα1、γ2mRNA和蛋白的表达,降低海马中NKCC1mRNA和蛋白的表达。结论:四逆酸枣仁汤合方可以通过调节失眠大鼠海马中GABAARα1、γ2和NKCC1mRNA和蛋白的表达量来改善大鼠的睡眠节律。     

基于cAMP/CREB信号通路探讨天王补心丹对复合失眠模型大鼠学习记忆水平及神经因子的影响

目的:探讨天王补心丹对复合失眠模型大鼠学习记忆水平及神经因子的影响。方法:50只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、天王补心丹低、高剂量组和艾司唑仑组。采用多平台水环境联合咖啡因、环磷酰胺腹腔注射制备失眠模型。造模完成后采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆水平;免疫组织化学法(IHC)检测大鼠海马BDNF、NGF阳性细胞的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马中BDNF、NGF的含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测海马中BDNF、NGF受体mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,天王补心丹低剂量、高剂量组在上平台潜伏期、游泳总路程、第1次抵达平台时间上明显缩短,跨越平台次数和目标区域运动时间增加;IHC显示天王补心丹高、低剂量组累计光密度值(IOD)较模型组升高;ELISA及Real-time PCR显示海马中BDNF、NGF的浓度较模型组升高,天王补心丹高、低组BDNF、NGF受体mRNA表达较模型组有不同程度的上调。结论:天王补心丹能够改善失眠大鼠的学习记忆水平,这可能与调控BDNF、NGF的表达具有关联性。