甘松挥发油对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(Transient outward potassium current,Ito)的影响,探讨甘松挥发油抗心律失常作用的离子机制.方法 用急性酶解分离法获得单个大鼠心室肌细胞,采用标准的全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞膜瞬时外向钾电流(Ito).结果 甘松挥发油可呈浓度依赖性和电压依赖性抑制Ito.在+70mV时,3 μg/g,6 μg/g,10 μg/g和20μg/g甘松挥发油分别抑制Ito峰值电流的抑制率为 (27.01±6.93)%(n=5),(51.13±9.82)%(n=5),(80.86±4.63)%(n=5)和(94.81±4.30)%(n=5).甘松挥发油对Ito的电流密度-电压关系曲线(current density-voltage curve,I-V曲线)的影响:在+70 mV时,6μg/g甘松挥发油使Ito峰电流从(23.081±0.74)pA/pF减少到(11.232±1.47) pA/pF (n=5,P<0.05),给药后电流密度减少约50%,给药前后电流密度变化有统计学意义.甘松挥发油对Ito激活和失活曲线的影响:在甘松挥发油6 μg/g灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压(V1/2)为:(36.063 ±1.792)mV vs (34.788±3.029)mV(P> 0.05,n=5);斜率因子(S) 为:(22.972±1.491)mV vs (30.791±2.899)mV(P<0.05,n=5).给药前后半数激活电压变化无显著差异.失活曲线显示甘松挥发油使失活曲线明显左移,差异有显著统计学意义:给药前后半数失活电压(V1/2)为(-33.738±0.476)mV vs (-40.536±0.696)mV (n=5, P<0.01);斜率因子(S)为:(5.001±0.396) mV vs (8.420±0.620) mV (n=5, P<0.01) .结论 甘松挥发油可呈浓度和电压依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ito,使I-V曲线下移,但对激活曲线无明显影响,同时,使失活曲线明显左移,使心室肌细胞复极化减慢,这可能是其抗心律失常作用的重要机制之一.     

中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对L型钙通道的影响.结果 浓度为3,5,10,20,50 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流,在浓度为10μg/g时,给药后电流密度抑制约为(45.7±3.5)%(n=5,P＜0.01), 可使心肌细胞L型钙电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从(-5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P＜0.05);使失活曲线向负电位方向变化, V1/2从(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P＜0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜L型钙通道电流,使I-V曲线上移;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响.结果 ①浓度为1,3,5,10,20,100 μg /g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流;②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;③使激活曲线向正电位方向变化,V_(1/2)从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6,P<0.05);④使失活曲线向负电位方向变化, V_(1/2)从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6,P<0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流,在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

清心安神方含药血清对离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）的影响

目的：观察清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）。方法：分离豚鼠的心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术电流钳模式记录动作电位,观察含40%的空白血清及含药血清的细胞外液灌流对 Ik1的影响。结果：清心安神方含药血清对豚鼠心室肌细胞内向钾电流（Ik1）影响：40%含药血清组对IKl内向电流成分影响为：40%含药血清组从（-30.68±10.39）pA/pF抑制为（-21.03±3.47）pA/pF（n=7 P〈0.05）。结论：清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞IKl内向成份有抑制作用,呈浓度依赖性。     

益气升陷复方注射液对大鼠及豚鼠心室肌细胞钠、钾电流的作用

目的:观察益气升陷法对单个心室肌细胞钠电流和钾电流的作用.方法:采用膜片钳技术观察益气升陷法对豚鼠及大鼠单个心室肌细胞钠和钾电流的影响.结果:益气升陷法能够减少内向整流钾电流(Ik1) 、瞬时外向钾电流(Ito)和钠电流(INa)峰值,对延迟整流钾电流没有影响(Ik).结论:益气升陷法抗心律失常的作用可能是通过对INa、Ik1和Ito的抑制而延长动作电位时程来实现的.     

五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(I_(Na))的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上I_(Na)的影响。结果五味子乙素(3μmol/L)对I_(Na)可产生显著抑制作用(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性。五味子乙素(10、30μmol/L)可使钠通道的I-V曲线显著上移,但I-V曲线的激活电位、峰电位及形态未发生改变,使I_(Na)的激活曲线向去极化方向迁移(P0.01),半数激活电位由给药前(-53.90±5.21) mV变为(-43.69±5.34) mV和(-40.80±3.23) mV。五味子乙素能使I_(Na)失活曲线向超级化方向移动(P0.01),半数失活电压(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(-57.80±6.21) mV、(-71.16±6.45) mV和(-81.03±7.53) mV。此外,五味子乙素还能显著延长I_(Na)失活后恢复时间(P0.01),τ(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(16.68±1.72) ms、(25.73±2.93) ms和(43.79±3.87) ms。结论五味子乙素能浓度依赖性阻滞大鼠心室肌细胞I_(Na),对其激活、失活和失活后恢复动力学特征均有影响。     

中药甘松挥发油对HEK细胞Nav1．5电流电压及电导电压的影响

目的 应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1．5电流电压依赖性Na^＋电流失活与激活曲线，甘松挥发油对电流-电压关系（I-V），电导-电压关系（G—V）曲线的影响，以及对快Na^＋通道失活（H—I）的影响。方法应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1．5电压依赖性Na^＋电流失活曲线，I-V和H—I曲线。结果正常自然依赖性失活曲线向超极化移位，移动速度10min内是4mV。甘松挥发油能降低I～V曲线Na电流的峰电位，但不能改变其Na电位（ENa）从内流向外流的反转电位的方向。G—V曲线明显向超极化方面移动，Vg1/2=（-59．8&#177;4．22）mV是对照自然失活曲线；Vg1／2=（-58．8&#177;5．69）mV是10PPM甘松挥发油；Vg1/2=（-68．0&#177;4．36）mV是药物被洗脱后失活曲线（P〈0．01，n=6）。在除去自然移动值后10PPM甘松挥发油的Na电位失活作用明显。甘松挥发油应用前，应用10PPM甘松挥发油以及药物洗脱后H—I曲线与自然失活曲线比较，校正自然失活因素后10PPM甘松挥发油实际移动Vg1/2是（18．0&#177;4．50）mV（P〈0．01，n=5），洗脱40min后接近对照状态。结论甘松挥发油对I—V，G—V曲线有向超极化移位的影响。对快Na^＋通道有加速失活与抑制激活的作用，然而电压依赖性Na失活是可逆性的。这一作用奠定了甘松挥发油抗心律失常的作用机制。     

异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

探究异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流的影响。该实验采用MTT检测法探究异牡荆素的安全范围,结果显示该药物的IC5010~30μmol·L~(-1),而膜片钳实验所选用的药物浓度1~3μmol·L~(-1)均在该安全范围之内。此外,采用主动脉逆行灌流单酶解法得到单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术引导、记录大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)并分析在给予异牡荆素(IV)前后该电流特征的变化。当IV终浓度低于0.1μmol·L~(-1)时,其对Ito无明显影响,但随着浓度的升高(≥0.3μmol·L~(-1)),Ito峰值逐渐降低[由给药前的(32.32±2.9)p A/p F分别降为(25.83±4.3)p A/p F,1μmol·L~(-1)IV和(19.51±3.5)p A/p F,3μmol·L~(-1)IV],呈现出浓度依赖性抑制现象。在1~3μmol·L~(-1)浓度内,IV使Ito的I-V曲线明显下移。激活曲线结果显示,IV可使最大半数激活电位(V1/2)向正值方向移动[给药前V1/2为(19.59±1.6)m V,给药后V1/2分别升高(22.81±1.7)m V,1μmol·L~(-1)IV;(28.86±1.4)m V,3μmol·L~(-1)IV],同时激活曲线右移。Ito稳态失活曲线的最大半数失活电位(V1/2):给药组(-61.81±1.3)m V,1μmol·L~(-1)和(-71.50±1.4)m V,3μmol·L~(-1)较给药前(-51.43±0.99)m V显著降低。而就失活后恢复曲线的失活时间常数(τ)而言,给药后的τ较给药前明显升高[给药前(94.89±0.73)ms;给药后(118.5±1.5)ms,1μmol·L~(-1);(162.4±1.4)ms,3μmol·L~(-1)],IV使Ito的失活后恢复曲线右移,提示其能延长瞬时外向钾通道的失活后恢复时间。异牡荆素对大鼠心室肌细胞的Ito具有明显的抑制作用。     

海葵素对大鼠和豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

目的:研究海葵素-Q(AP-Q)对心室肌细胞钾电流的作用。方法:采用酶解法制备豚鼠和大鼠单个心室肌单细胞,应用全细胞膜片钳记录方法记录心室肌细胞钾电流(Ito、IK和IK1)。结果:AP-Q3-100nmol/L浓度依赖性地阻滞Ito,EC50分别为10.5nmol/L,去极化至 50mV时,AP-Q10nmol/L使Ito从给药前的(13.3 -3.4)pA/pF升至(19.46 -4.3)pA/pF。AP-Q0.1-100nmol/L浓度依赖性地增大IK和尾电流(IK tail),EC50分别为4.7nmol/L和5.0nmol/L。AP-Q1pmol/L-100nmol/L浓度依赖性地增大IK1,EC50值为0.2nmol/L。结论:AP-Q增大IK,Ito和IK1的作用可能是其缩短心室肌动作电位时程(APD),增大静息电位(RP)的原因。     

大蒜素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的:探讨大蒜素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用.方法:用急性酶解法获得大鼠的单个心肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流.结果:5、50、250和500μmol/L大蒜素分别抑制钙电流4.4%、26.91%、38.06%、72.90%.250μmol/L大蒜素能使心肌细胞钙电流-电压曲线明显上移,峰电流密度从(7.17±0.65)pA/pF减少至(4.44±0.52)pA/pF(n=15,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变(P>0.05).大蒜素能使钙电流失活曲线明显左移(P<0.05).大蒜素对钙电流激活曲线、失活再复活曲线和频率依赖性无明显影响(P>0.05).结论:大蒜素呈浓度依赖性地抑制心肌细胞L-型钙通道.     

甲磺酸酚妥拉明抗心律失常的初步研究

目的:通过观察甲磺酸酚妥拉明(PM)对正常大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,以探讨其抗心律失常的作用机制。方法:采用膜片钳全细胞记录技术记录了PM对单个大鼠心室肌细胞钠电流的影响。结果:动物实验表明PM降低正常心室肌细胞INa电流密度峰值,钠离子通道失活加速,失活后再恢复时间延迟。结论:PM对心室肌细胞0相动作电位快钠电流有抑制作用,能使快速性室性心律失常的发生率降低。     

人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞钠、钾离子通道的影响

目的：观察人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞电压依赖性的钠、钾离子通道的影响,揭示其抗心律失常的作用机制。方法：采用酶分法获得单个大鼠心室肌细胞,在全细胞膜片钳技术模式下,记录电压依赖性钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流,并观察不同浓度的人参皂苷Re对电流幅度的影响。结果：给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后钠通道电流幅度呈现减小的趋势,对通道电流幅度的抑制率分别为（25.5±5.7）%（n=3）和（46.2±18）%（n=4）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）对瞬时外向钾电流幅度略有抑制,洗脱后电流恢复,其中100μmol·L-1人参皂苷对电流的抑制率为（13±9）%（n=3）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后内向整流钾电流幅度呈现逐渐减小的趋势,药物洗脱后电流完全恢复,（10,100μmol·L-1）对通道电流幅度的抑制率分别为（16.3±8.7）%（n=5）和（35.4±11.2）%（n=5）。结论：人参皂苷Re能够抑制心室肌细胞电压依赖性的钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流发挥抗心律失常的作用。     

葛根素对豚鼠乳头肌动作电位及延迟整流钾电流的影响

 目的观察葛根素提取液对豚鼠乳头肌动作电位及延迟整流钾电流的影响。方法用常规微电极方法记录豚鼠乳头肌动作电位,用全细胞膜片钳技术记录游离心室肌细胞钾离子流。结果①不同浓度的葛根素均能延长豚鼠乳头肌细胞动作电位时程(APD)。②不同浓度的葛根素均能抑制延迟整流钾电流。结论葛根素明显延长APD,抑制延迟整流钾电流,具有明显的浓度依赖关系,可能是其抗心律失常的电生理机制。     

中药甘松对感觉神经损伤性盐敏感高血压大鼠心肌钠离子的影响

目的研究感觉神经损伤性盐敏感高血压(简称盐敏感高血压)大鼠心肌细胞钠离子内向电流(INa)以及中药甘松挥发油对其产生的影响。方法建立感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠模型,应用膜片钳记录每组大鼠心肌INa电流,并观察甘松挥发油对INa的影响。结果模型组第4周以后血压明显升高,10周、24周模型组心肌INa电流密度对比10周正常对照组大鼠,无明显变化(n=6,P0.05);34周模型组心肌INa电流密度升高,具有统计学意义。10ppm甘松挥发油干预各组34周大鼠心室肌细胞,可明显抑制INa电流。结论模型组从4周开始血压升高。34周以内INa电流密度无明显变化,34周后明显增加,而甘松挥发油可明显抑制INa,使I-V曲线上移。     

金雀花碱对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的研究金雀花碱(Cy)对大鼠心室肌细胞钠离子通道电流(I_(Na))的影响,探索Cy在离子通道水平抗心律失常的作用机制。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置,单酶解法分离SD大鼠心室肌细胞,将心室肌细胞分为对照组、100μmol/L Cy组和300μmol/L Cy组。应用全细胞膜片钳记录技术,观察Cy对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响。结果 Cy(≥100μmol/L)能显著抑制I_(Na),其作用呈浓度依赖性。与对照组比较,100μmol/L和300μmol/L Cy可使I_(Na)Ⅰ～Ⅴ曲线明显上移,I_(Na)峰值由(-32.81±3.93) pA/pF依次降为(-21.77±4.07) pA/pF和(-14.8±2.99) pA/pF (P0.01),但不改变其激活电位、峰电位和反转电位;使稳态失活曲线显著左移,半数失活电压V_(1/2)降低(P0.05,P0.01);失活后恢复曲线显著右移,恢复时间常数γ延长(P0.05,P0.01)。结论 Cy对大鼠心室肌细胞的I_(Na)呈浓度依赖性的抑制作用,并可改变其失活及失活后恢复动力学特征,可能是其抗心律失常的作用机制。     

薯蓣皂苷对大鼠心室肌细胞钙离子通道的影响

目的:研究薯蓣皂苷对正常大鼠心室肌细胞L-钙电流(ICa,L)的影响,旨在探讨薯蓣皂苷对心肌缺血再灌注(I/R)损伤保护作用的可能机制。方法:酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录薯蓣皂苷低(10μg/ml)、中(20μg/ml)、高(30μg/ml)三个剂量对大鼠单个心室肌细胞ICa,L的影响。结果:薯蓣皂苷10μg/ml不影响ICa,L峰值,而20μg/ml和30μg/ml能使ICa,L峰值降低,抑制呈剂量依赖性;20μg/ml和30μg/ml薯蓣皂苷使I-V曲线上移,内向电流减小,但基本不改变曲线的形状。30μg/ml薯蓣皂苷使失活曲线向负电位方向变化,曲线左移,各剂量均对激活曲线无影响。结论:薯蓣皂苷通过促进ICa,L失活的过程抑制正常大鼠心室肌细胞I,减小I峰值,这可能是其抗缺血再灌所致心律失常的作用机制之一。     

二乙酰基莲心碱对心室肌细胞电生理的影响

目的:探讨二乙酰基莲心碱(Diacetyl-linesinine)对兔心室肌细胞动作电位、L型钙电流以及延迟整流钾电流的影响。方法:选取10只体重1.5～2.0kg的健康新西兰白兔,酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察不同浓度的二乙酰基莲心碱对心室肌细胞动作电位、钙电流和延迟整流钾电流的作用。结果:①10、30μmol·L-1的二乙酰基莲心碱使复极50%的动作电位时程(action potential duration at50%repolarization,APD50)和复极90%的动作电位时程(action potential duration at90%repolarization,APD90)明显延长(P<0.05),而100μmol·L-1的二乙酰基莲心碱使APD50和APD90不再继续延长,反而缩短;②二乙酰基莲心碱浓度依赖性减少钙电流和延迟整流钾电流,10、30、100μmol·L-1的二乙酰基莲心碱可分别使峰值钙电流下降56.96%、65.91%及73.61%;使延迟整流钾电流下降17.46%、45.82%及51.06%。结论:二乙酰基莲心碱在低浓度时延长APD,高浓度时缩短APD;二乙酰基莲心碱可浓度依赖性阻滞兔心室肌细胞的钙电流和延迟整流钾电流。     

炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流及其动力学特征的影响

目的：研究炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流(I_Ca-L)及其动力学特征的影响。方法：选取24只大鼠随机分为空白对照组和炙甘草汤低剂量组(1.125 g/mL)、中剂量组(2.25 g/mL)、高剂量组(4.5 g/mL),每组6只。3组药物组大鼠分别按各自浓度给予相同体积的炙甘草汤药液灌胃,对照组大鼠予以等体积生理盐水灌胃。给药1周后利用酶解法对4组大鼠心房肌细胞进行急性分离,用全细胞膜片钳技术记录4组心房肌细胞I_Ca-L并比较I-V曲线,选取中剂量组与对照组的心房肌细胞比较I_Ca-L通道的动力学特征。结果：与对照组比较,炙甘草汤低、中、高剂量组的大鼠心房肌细胞I_Ca-L均发生不同程度的抑制效果,I-V曲线均上移。观察比较中剂量药物组与对照组的I_Ca-L通道动力学特征,发现2组细胞的激活曲线和半数激活电压,差异无统计学意义(P>0.05),但中剂量药物组细胞的稳态失活曲线发生向右偏移,半数失活电压V_1/2升高(P<0.05),失活后恢复曲线向...     

福辛普利对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位及其离子通道的影响

 目的观察福辛普利预处理对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙通道电流(ICa-L)和ATP敏感钾通道电流(I_K-ATP)的影响,探讨其抗再灌注性心律失常的电生理机制。方法采用全细胞电流钳和膜片钳技术分别记录AP和ICa-L,I_K-ATP。结果缺氧复氧使心室肌细胞AP时程(APD₅₀,APD₉₀)缩短;ICa-L峰值降低,I-V曲线上移,激活曲线右移,半数激活电压(V_1/2)增大,失活曲线左移,失活V_1/2减低;ATP敏感钾通道由正常关闭状态到完全开放。与缺氧复氧组相比,福辛普利预处理使APD₅₀,APD₉₀相对延长;ICa-L峰值增加,I-V曲线上移幅度减小,激活曲线左移,失活曲线右移,激活与失活V_1/2均接近正常,ATP敏感钾通道进一步开放,电流明显增加。结论福辛普利预处理能显著改善缺氧复氧状态下L-钙通道的抑制状态,促进动作电位参数的恢复,减少有效不应期的离散度及折返形成;通过药物预适应机制,进一步开放ATP敏感钾通道,增加ATP敏感钾电流,而发挥抗再灌注心律失常的作用。     

交泰丸含药血清对豚鼠心室肌细胞ICa-L的影响

[目的]观察交泰丸及其拆方含药血清对豚鼠心室肌细胞L-型钙离子通道(ICa-L)的影响。[方法]急性分离心室肌细胞,实验分为空白组、黄连组、肉桂组、黄连加肉桂组和交泰丸组,各组加入含药血清浓度为10%和15%,后放于37℃、5%CO_2的孵育箱中孵育24 h,运用膜片钳技术观察药物对ICa-L电流密度和动力学参数的影响。[结果]各组均不同程度抑制钙离子电流(P0.05),使ICa-L激活和失活时间常数及失活后恢复时间延长(P0.05)。其中交泰丸对ICa-L平均电流密度抑制率最高达57.5%,肉桂显著延长ICa-L激活时间常数和失活时间常数,黄连使ICa-L失活后恢复时间常数减小最显著。[结论]交泰丸及各拆方含药血清对钙离子通道有不同程度的抑制作用,交泰丸抑制率最大,抑制钙电流影响心肌细胞有效不应期,这可能是交泰丸在临床及实验中具有抗心律失常作用的机制。