TNF-α体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.     

肿瘤坏死因子—α诱导体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用

目的 了解肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用。方法 在半乳糖胺（ＧａＩＮ）或放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）致敏情况下,加入ＴＮＦ－α,通过光镜、电镜及ＤＮＡ电泳等方法,观察ＴＮＦ－α对体外培养肝细胞凋亡的作用。结果 在大鼠注射ＧａｌＮ后分离肝细胞加入ＴＮＦ－α,ＡＬＴ上升,电镜下可见细胞坏死及凋亡;给正常鼠肝细胞ＡｃｔＤ加入ＴＮＦ－α,光镜下出现典型凋亡细胞,ＤＮＡ电泳出现凋亡的     

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因转染对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

TNFα能诱导肝细胞凋亡,其过度表达是肝衰竭发生发展过程中的一个重要因素。可溶性TNFα受体1（sTNFR1）可中和TNFα的部分毒性作用。为有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡以及治疗肝衰竭,我们拟构建sTNFR1的真核表达载体,并将重组质粒pcDNA3-1（-）sTNFR 1瞬时转染QSG7701细胞,研究其对TNFα诱导细胞凋亡的抑制作用。[第一段]     

抗肿瘤坏死因子-α 单克隆抗体对肝细胞凋亡和坏死的影响

目的：为了研究抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体在肝细胞凋亡和坏死中的作用，方法：我们采用酶联免疫吸附法测定了抗鼠肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、赖氏法测定谷丙转氨酶（ＡＬＴ）及肝组织病理。结果：模型组血浆ＴＮＦα及ＡＬＴ明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而抗ＴＮＦα单抗组血浆ＡＬＴ活性及ＴＮＦα含量较模型组明显降低（Ｐ＜０．０１），肝组织病理检查未发现有肝细胞凋亡和坏死发生。结论：上述结果提示ＴＮＦα单克隆抗体可以阻断实验性肝细胞凋亡和坏死的发生。     

肿瘤坏死因子-α诱导肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用

目的 研究肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）诱导肝细胞凋亡细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用机制。方法 分别注射脂多糖（ｌｉｐｏｐ ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和ＴＮＦ－α于Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｅ ｅｎｄ ｌａｂｅ     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝细胞凋亡的相关性

肿瘤坏死因子相关的调亡诱导配体是TNF家族成员之一,通过其死亡受体诱导凋亡.研究显示TRAIL/死亡受体途径参与多种肝脏病理过程,本文就TRAIL/死亡受体途径的特性、致凋亡的机制及与肝细胞凋亡关系的最新进展作一综述.     

大鼠肝纤维化模型肝细胞凋亡及肝细胞坏死的动态分析

目的　观察肝细胞凋亡和肝细胞坏死在肝纤维化形成过程中的变化 ,探讨其在肝纤维化发病机制中的作用。方法　雄性Wistar大鼠 32只 ( 85～ 95克 )随机分为 4组。A ,B ,C为实验组 ,采用腹腔注射CCl4 的方法造模 ;D为对照组 ,代之以生理盐水。于 2 ,4,6周末分别处死A ,B ,C三组大鼠 ,D组同期处理。取肝脏石蜡包埋 ,连续切片做病理学检查、细胞凋亡原位检测。测定血清ALT。结果　病理学检查A ,B ,C ,D四组分别符合肝纤维化的S1,S3 ,S4 ,S0 期。各实验组 (A ,B ,C)的肝细胞坏死记分值均高于对照组 (D) ( 1 6 7± 0 82 ) ,( 2 83± 0 75 ) ,( 2 5 0± 1 0 5 )vs( 0 16± 0 4 1) ,(P <0 0 1) ,肝细胞凋亡级数也均高于对照组 (D) ( 2 5 0± 0 5 5 ) ,( 2 83± 0 4 1) ,( 2 0 0± 0 6 3)vs( 0 33± 0 5 2 ) ,(P <0 0 1)。各实验组 (A ,B ,C)的ALT均高于对照组 (D) ( 76 83± 2 1 87) ,( 117 0 0±15 94) ,( 10 3 6 7± 36 6 8)vs( 39 16± 2 32 ) ,(P <0 0 5 )。结论　肝细胞凋亡和肝细胞坏死在肝纤维化发生过程中存在动态变化 ,二者在其不同时期发挥的作用不同。     

库普弗细胞功能状态对肠缺血再灌注小鼠肝细胞凋亡和血清肿瘤坏死因子的影响

目的 研究库普弗细胞功能状态对肠缺血再灌注小鼠肝细胞凋亡和血清肿瘤坏死因子的影响。方法 封闭和不封闭BALB／c小鼠库普弗细胞(从尾静脉注射GdCl3或生理盐水27ml／kg体重)48h后，夹闭肠系膜上动脉1h后松夹，复制肠缺血再灌注模型。运用流式细胞术和酶联免疫法，分别检测缺血前、缺血60min、再灌注30min、60min肝细胞凋亡情况和血清肿瘤坏死因子的变化。结果 结果表明，肠缺血60min、再灌注30min、60min时，肝细胞凋亡数增多，血清肿瘤坏死因子水平逐渐升高；封闭库普弗细胞后，肝细胞凋亡数增多更显著，血清肿瘤坏死因子水平在同时间点上无显著差异。结论 库普弗细胞功能状态的变化对肠缺血再灌注时肝损伤有重要影响。     

氧化苦参碱对肿瘤坏死因子诱导的人L02肝细胞凋亡的影响

观察氧化苦碱（Oxy）对rhTNF-a诱导的L02肝细胞凋亡的影响。体外培养人L02肝细胞,采用H^3-TdR法、台盼蓝染色及流式细胞仪观察Oxy对rhTNF-a引起的L02肝细胞的毒性作用影响。以rhTNF-a15ng/ml作用于细胞24h,细胞出现细胞核固缩,染色体凝集等凋亡样改变,台盼蓝染色阴性率在95%以上,应用流式细胞仪检测分析细胞周期,出现亚G1期峰（凋亡AP峰）,G2-M期细胞明显减少。同时加入Oxy时,细胞生长率明显高于rhTNF-a处理组,并呈剂量相关性,在细胞周期图上未出现明显亚G1期峰。Oxy对rhTNF-a诱导的细胞凋亡有抑制作用。     

肿瘤坏死因子-α介导肝细胞凋亡其相关死亡区蛋白及mRNA的表达

目的：研究凋亡调节基因Fas相关死亡区蛋白（FADD)mRNA及蛋白在肿瘤坏死因子α（TNFα）介导的凋亡肝细胞中的表达及意义,方法：尾静脉注射TNFα于D－氨基半乳糖（Ga1N）致敏的BALB／c小鼠,赞成暴发性肝衰模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术,电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA Ladder观察肝细胞凋亡,分别用免疫组织化学和RT－PCR方法检测FADDmRNA和蛋白的表达情况,结果：TNFα可介导GalN致敏小鼠肝细胞凋亡,坏死,最终肝功能衰竭死亡,细胞凋亡率分别为0（1．5）h,0.3%(3.5h),3.15%(6h)和3．19％（9h),肝组织中FADD蛋白表达阳性率分别为0．2％（1．5h),3.3%(3.5h),14.2%(6h)和16．7％（6h)（9h),各时间点FADDmRNAg表达的相对单位（FADD积分值／β－actin积分值）不同,分别为0．48（正常对照组）,0．64（3．5h),(0.59(6h)和0.65(9h),结论：TNFa可通过上调FADD达引发肝细胞凋亡的级联过程。     

肿瘤坏死因子受体和Fas在乙型肝炎肝细胞凋亡中的意义

目的研究肿瘤坏死因子1型受体(TNFR1)和Fas在乙型肝炎肝细胞凋亡中的意义.方法用免疫组织化学方法和原位末端标记技术(TUNEL试验)检测70例各型乙型肝炎患者肝组织TNFR1、Fas的表达和肝细胞凋亡情况.结果不同类型乙型肝炎肝细胞均有TNFR1和Fas表达,其表达程度与组织学类型相关(P＜0.05).TNFR1在细胞浆和细胞膜的分布相似,而Fas主要在细胞浆分布,TNFR1与Fas在肝细胞上的表达无明显关系(P＞0.05).不同类型肝炎肝细胞凋亡与病变程度密切相关,Fas的表达与肝细胞凋亡也有密切关系(P＜0.005),但TNFR1的表达强弱与肝细胞凋亡程度不呈正比(P＞0.05).在46例中度以上肝细胞凋亡患者中,同时伴有单纯TNFR1中度以上阳性者有4例(8.7%),同时伴有单纯Fas抗原中度以上阳性者有12例(26.1%),而同时伴有TNFR1和Fas抗原均为中度以上阳性者有28例(60.9%),另有2例患者TNFR1和Fas在肝细胞均无明显表达(4.35%).结论在乙型肝炎肝细胞凋亡中,Fas似较TNFR1的作用更重要;TNFR1和Fas在肝细胞的同时表达可能对肝细胞凋亡有相加作用.     

重视肝细胞凋亡的研究

肝细胞死亡是造成肝脏损伤和肝脏病最基本的中心环节,在此基础上可导致炎症、纤维化或增殖。细胞死亡有坏死和凋亡两种形式,两者的发生机制和生物学意义不同。肝细胞坏死是指细胞膜的完整性被破坏,胞质膜破裂,最后导致细胞溶解,细胞内细胞器死亡,胞质液中酶类释出（如：ＡＬＴ、ＡＳＴ）。由于细胞内成分释到细胞外,激起炎症反应。炎性细胞、细胞因子和毒性氧基团的作用,使邻近的组织进一步损伤,病变加重,发展下去使更多的细胞死亡,造成疾病和器官功能不全。在组织学上,很容易认出坏死的病灶,因为在病变部位的坏死残余可持续较…     

一氧化氮介导内毒素所致体外培养肝细胞凋亡

目的 研究一氧化氮（NO）介导内毒素（LPS）所致的肝细胞损伤的细胞死亡类型。方法 采用体外肝细胞／库普弗细胞混合培养,以光镜、电镜及抽提细胞DNA电泳观察受LPS刺激后NO产生增多所致肝细胞损伤的形态学及生物化学改变情况。结果 受LPS刺激后,培养基中NO产物水平显著升高,肝细胞变小、变圆。细胞表达出泡,核染色质致密、结块,结块,核膜皱折变形等,DNA电泳呈明显“云梯形式”。而同时加用诱导型一氧化氮合酶抑制基胍后,培养基中NO产物水平显著降低,,光镜、电镜及DNA电泳分析肝细胞均上述改变。结论 NO介导LPS所致的混合培养肝细胞损伤主要为肝细胞凋亡,提示LPS通过刺激NO大量产生而诱导肝细胞凋亡可能是其致肝损害机制之一。     

体外循环肺肿瘤坏死因子表达与细胞凋亡的研究

目的：探讨肺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）在体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法：选取健康新西兰大白兔20只,随机分为CPB组和Sham组（单纯开胸）。测定各组围CPB期左心房、右心房血液中中性粒细胞计数、TNF-α含量;取肺组织样本,动态观察肺组织TNF-αmRNA表达、细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Fasl的表达和Bcl-2/Bax及凋亡指数变化情况。结果：CPB后,中性粒细胞在肺内明显聚集,肺源性TNF-α的表达及释放显著增加。同时,肺组织细胞凋亡指数明显提高,肺泡上皮细胞Fasl、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。结论：CPB可引起肺源性TNF-α表达增高并诱发细胞凋亡,从而导致肺损伤。     

内毒素／肿瘤坏死因子在肝细胞损害中的作用

对Ｗｉｓｔａｒ大鼠体外肝细胞进行了内毒素（ＬＰＳ）及其介质肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等的肝细胞损害机理研究，主要发现是：ＬＰＳ，ＴＮＦα，白细胞介素－１（ＩＬ－１），ＩＬ－６等加入后肝细胞ＬＤＨ漏出及噻唑蓝染色（ＭＴＴ）均无显著变化，仅在肝细胞－Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞混合培养组用于加ＬｐＳ，ＬＰＳ／ＴＮＦα后有所变化，经半乳糖胺（ＧａｌＮ）／ＬＰＳ体内作用后分离的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞与正常肝细胞进行混合培养     

Bcl—2腺病毒载体抗肿瘤坏死因子α及氨基半乳糖诱导小鼠肝细胞凋亡

目的　探讨Bcl-2家族蛋白在TNFα致肝损伤及肝细胞凋亡中的作用。方法　以TNFα联合D-氨基半乳糖诱发小鼠肝损伤,以免疫组织化学法检测Bax、Bak蛋白在鼠肝组织中的表达情况;并以Bcl-2腺病毒载体感染肝细胞,观察其抗肝细胞凋亡作用。结果　TNFα可引起严重的肝损伤并有广泛的肝细胞凋亡,伴Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强;Bcl-2腺病毒感染可使肝损伤小鼠ALT水平由（1372.9±251.4）U/L下降至（796.5±78.7）U/L,统计分析差异有显著意义（P＜0.0005）。结论　TNFα诱导肝细胞凋亡可能与其诱导Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强有关;Bcl-2腺病毒载体可在小鼠肝细胞中持续表达至少一个月并可部分抵抗TNFα诱发的肝细胞凋亡。     

脂多糖提高巨噬细胞可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的表达并诱导肝细胞凋亡

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释放试验测定可溶性TRAIL和膜性TRAIL 对HepG2细胞的毒性作用,并用Annexin V染色法验证凋亡细胞的产生。结果经100 ng/ml LPS刺激后, 只有9.8%的巨噬细胞有TRAIL的表达,而培养上清中可溶性TRAIL达(67.4±5.1)ng/ml,有明显增加。巨噬细胞培养上清液中可溶性TRAIL能溶解HepG2细胞,经Annexin V染色法证实为细胞凋亡,此作用可被特异性TRAIL抗体阻断。结论LPS能增加巨噬细胞可溶性TRAIL表达,并诱导肝细胞凋亡,提示TRAIL在病毒性肝炎发病机制中有重要作用。     

转化生长因子β1在肿瘤坏死因子α介导的小鼠暴发性肝衰竭肝组织中的表达及分布

目的　探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的暴发性肝衰竭动物模型肝组织中转化生长因子 β1(TGFβ1)的表达及分布。方法　尾静脉注射TNFα于D 氨基半乳糖 (GalN)致敏的BALB/c小鼠 ,造成暴发性肝衰竭模型 ,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记 (ISEL)技术、琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNALadder观察肝细胞凋亡 ,用免疫组化方法检测TGFβ1表达及分布情况。 结果　在TNFα介导的暴发性肝衰竭动物模型中 ,肝组织TGFβ1蛋白表达阳性率分别为 0 .0 % ( 1.5h)、1.4% ( 3.5h)、11.3% ( 6h)和 2 0 .6 % ( 9h)。结论　在TNFα介导的小鼠暴发性肝衰竭动物模型中 ,TGFβ1表达增加并引发肝细胞凋亡的级联过程     

内毒素性肝衰竭大鼠TLR4mRNA表达、血清肿瘤坏死因子-α及肝细胞凋亡的动态变化

目的 观察急性内毒素性肝衰竭大鼠肝组织中TLR4mRNA表达变化规律及其与血清肿瘤坏死因子-α水平、肝细胞凋亡的关系。方法雌性Wistar大鼠给予D氨基半乳糖／脂多糖同时腹腔注射，计算动物死亡率及生存时间，动态观察给药后4、8、12h肝功能、血清肿瘤坏死因子-α、肝组织TLR4mRNA表达及病理变化，以TUNEL法检测原位细胞凋亡，计算凋亡指数。结果80％大鼠死于急性肝衰竭，平均生存时间15．6h±1．8h，病理表现为肝脏大块或亚大块坏死。给药后4、8、12h血清TNF—α增高含量及肝细胞凋亡均增加，血清TNF—α变化早于肝细胞凋亡指数的增加，肝组织TLR4mRNA的表达与血清TNF—α含量呈正相关（r=0．709，P=0．000）。结论 内毒素通过单核吞噬系统TLR4介导TNF—α大量产生，激活炎症级联反应并诱导肝细胞凋亡是内毒素性肝衰竭的重要病理机制之一，阻断肝内外单核吞噬系统TLR4介导的的生理学作用，可能会对内毒素性肝衰竭起到一定防治作用。     

己酮可可碱对NF-κB介导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

为探讨己酮可可碱(PTX)对NF-κB介导的心肌细胞的影响,将大鼠心肌细胞体外培养后分为对照组、实验1组、实验2组和实验3组,分别予生理盐水及浓度为100、300、500g/m l的PTX处理。采用流式细胞技术观察细胞凋亡率;采用逆转录聚合酶链式(RT-PCR)测定各组NF-κB mRNA的含量。结果对照组、实验1~3组心肌细胞凋亡率分别为25.82%±1.98%、20.78%±1.29%、15.73%±1.29%、10.03%±2.13%,两两比较P均<0.01;NF-κB mRNA分别为0.9701±0.0295、0.8342±0.0089、0.7449±0.0373、0.5923±0.0290,两两比较P均<0.01。PTX可降低心肌细胞凋亡率,其机制可能是抑制NF-κB的活性;本研究为PTX治疗心力衰竭提供了理论基础及实验依据。