肿瘤干细胞的分离培养及生物学特性

背景：肿瘤干细胞是一类具有自我更新能力、不定分化潜能的种子细胞,可以形成不同分化程度的肿瘤细胞, 是恶性肿瘤不断生长、复发转移、无法被传统的放化疗方法彻底杀死的根源。 目的：总结肿瘤干细胞的分离培养及其生物学特性。 方法：由作者采用电子检索的方式,在万方数据库中检索以“肿瘤干细胞,分离培养,生物学特性” 为中文关键词,计算机检索1990-01/2010-12有关肿瘤干细胞的分离培养及生物学特性的文章,经检索共查到相关文献45篇。经阅读标题、摘要、全文后,排除内容重复、普通综述、Meta分析类文章后,筛选纳入22篇文献进行评价。 结果与结论：在肺癌、胰腺癌、结肠癌、肝细胞癌、神经系统肿瘤等多种脏器肿瘤中,CD133被作为鉴定肿瘤干细胞的特异性标记物之一。巢蛋白、波形蛋白和CD117在神经系统肿瘤干细胞中有表达。CD44及内皮素转化酶在肺癌肿瘤干细胞中的表达具有意义。CD44和CD24可作为分选人胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的表面标志。而CD166在大肠癌肿瘤干细胞中高表达。     

小鼠髓母细胞瘤干细胞分离培养及干细胞标记物的分析

目的 旨在建立自发髓母细胞瘤模型小鼠肿瘤干细胞分离培养方法,观察其在体外形成克隆的能力,对可能的肿瘤干细胞标志分子CD44、CD133和CD15进行流式细胞术分析鉴定.方法 将小鼠髓母细胞瘤组织通过温和消化液消化分离成单细胞悬液,于干细胞培养基中培养.计算其细胞球形成率.于含血清培养基中培养观察分化能力.利用流式细胞术对其表面可能的干细胞表面标记分子进行分析鉴定.结果 从模型小鼠髓母细胞瘤组织中成功分离培养髓母细胞瘤原代细胞,原代细胞可形成具有高度的自我更新和增殖能力的细胞球;细胞球可在含血清培养基中贴壁分化成为神经元样细胞;干细胞表面标记分子流式细胞术分析表明髓母细胞瘤干细胞中CD44表达较高,CD133及CD15的表达无差异或者降低.结论 髓母细胞瘤肿瘤细胞中存在一定量的具有自我更新增殖能力、高表达CD44的肿瘤干细胞,并能在体外将其分离培养、连续传代及诱导发生分化.     

人乳腺肿瘤干细胞分离培养及鉴定

目的:体外分离、培养乳腺肿瘤干细胞,并鉴定其生物学特性.方法:收集临床术后乳腺癌患者的肿瘤组织,经机械剪切联合酶消化法获得肿瘤细胞并培养,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,MTT比色法检测细胞生长曲线,实时定量PCR(qPCR)鉴定细胞Sox2、Nanog等基因表达,免疫荧光检测细胞特异性蛋白Bcl-2、孕激素受体(PR)的表达.结果:所获得的细胞呈克隆球样形态生长,鉴定结果发现其具有CD44+/CD24-表型,该细胞高表达Sox2、Nanog基因,且Bcl-2、PR蛋白均阳性表达.结论:人乳腺肿瘤组织中存在具有自我更新和增殖能力、表达CD44 +/CD24-的乳腺肿瘤干细胞,并能在体外长期培养.     

肿瘤干细胞与肿瘤靶向治疗

肿瘤干细胞(TSC)理论认为,肿瘤内部存在的一小部分具有干细胞特性的细胞,是肿瘤形成、生长、转移和复发的根源,只有靶向肿瘤干细胞的治疗才能使恶性肿瘤治愈.目前肿瘤的治疗只能杀死大部分已分化的肿瘤细胞,不能杀死肿瘤干细胞,造成了肿瘤治疗效果的不理想.扰乱维持肿瘤干细胞自我更新的信号通路和微环境;或诱导肿瘤干细胞的分化;或针对肿瘤干细胞所表达的区别于正常干细胞的表面标志的靶向治疗都是可行的策略.     

肿瘤干细胞表面标记物CD44在胃癌浸润和淋巴结转移中的作用

背景：肿瘤干细胞不仅能启动肿瘤发生,还参与肿瘤细胞的侵袭和转移。对肿瘤干细胞来说,识别其特异性细胞表面标志物已成为研究热点。 目的：探讨肿瘤干细胞表面标记物CD44在胃癌浸润和淋巴结转移中的临床意义。 方法：采用免疫组化 SABC法检测胃癌组织标本CD44蛋白表达,应用Pearsonχ2检验和Cox回归多因素分析,确定CD44表达与胃癌生物学特性及其预后的相关性。 结果与结论：100例胃癌标本中,59例(59.0%)标本CD44蛋白呈阳性表达。CD44蛋白在距胃癌原发灶边缘5 cm以上的正常胃黏膜组织中呈阴性表达。胃癌组织中CD44蛋白广泛表达,主要表达于细胞膜,少量表达于细胞浆。胃癌组织中 CD44蛋白的表达和患者性别、年龄无关(P > 0.05),但与肿瘤分期和淋巴管浸润、组织学分级、肿瘤大小等有关(P < 0.05),其中,肿瘤浸润越深、组织学分级越高、肿瘤直径越大、有淋巴结转移,则CD44蛋白表达阳性率越高,CD44阳性表达是影响患者术后生存的独立预后因素(P < 0.05)。以上结果表明肿瘤干细胞表面标记物CD44在胃癌组织中的表达与胃癌的浸润和淋巴结转移密切相关,表达越高患者预后越差。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人骨肉瘤细胞株MG-63中肿瘤干细胞的生物学特性

背景：骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。 目的：从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞特异性标志物CD105的表达。 方法：无血清悬浮培养法从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出骨肉瘤细胞球,应用流式细胞术检测细胞球中CD73、CD90、CD105的表达,免疫荧光法检测骨肉瘤细胞株及骨肉瘤细胞球中CD105的阳性率,免疫磁珠法分选出CD105⁺和CD105^-的细胞,传代后分别接种于NOD/SCID小鼠评估其致瘤性。 结果与结论：CD105在球体细胞中高表达,此类肿瘤细胞具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植1 000个细胞即可形成肿瘤,这些细胞具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养,CD105⁺骨肉瘤细胞显示了干细胞的生物学特性,CD105可能成为骨肉瘤干细胞的表面标志之一。     

人肺癌NCI-H446细胞生成肿瘤干细胞球

目的 探索人肺癌NCI-H446细胞系干细胞球体的培养,并鉴定其生物学特性.方法 用无血清培养基培养人肺癌NCI-H446细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的增殖能力,并将肿瘤球和普通NCI-H446细胞分别植入裸鼠皮下,观察肿瘤形成;Transwell侵袭实验检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的侵袭能力的不同;流式细胞术检测CD133、CD44在肿瘤球和普通NCI-H446细胞中的表达,并筛选细胞表面标志物.结果 在无血清培养基中,人肺癌NCI-H446细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,在含血清环境中能够诱导肿瘤球分化而贴壁生长;在动物实验中,接种5×105个细胞时,肿瘤球细胞较普通NCI-H446细胞显示更强的致瘤能力;在侵袭实验中,肿瘤球细胞的侵袭能力高于普通NCI-H446细胞;干细胞标志物CD133及CD44在肿瘤球细胞的表达较普通NCI-H446细胞明显增高.结论 人肺癌细胞NCI-H446中存在癌干细胞,且可以通过无血清培养、分离和富集.     

胃癌干细胞的分离、鉴定及其特性

背景：近年来随着肿瘤干细胞的深入研究,越来越多的证据表明肿瘤干细胞是恶性肿瘤转移复发的原因,因此分离鉴定出肿瘤干细胞对阐明肿瘤发病机制和研发抗肿瘤药物具有重要意义。 目的：分离培养胃癌干细胞,并检测胃癌干细胞的生物学特性。 方法：收集16例胃癌患者术中切除肿瘤组织,采用组织块贴壁培养法和酶消化培养法从肿瘤组织中分离胃癌干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线,并观察成骨成脂诱导分化能力。 结果与结论：两种方法均能够分离出胃癌干细胞,在显微镜下可以发现细胞形态为长梭形或多角样,细胞增殖生长达到融合时,呈漩涡状、放射状排列。从细胞生长曲线可以看出,1-3 d为潜伏期,4-9 d为对数增殖期,10 d后进入生长平台期。流式细胞仪检测结果显示：第3代胃癌干细胞高表达细胞表面标志物CD90、CD29、CD44,而低表达CD34、CD45、HLA-DR。第3代胃癌干细胞经成骨诱导后可见钙化结节,成脂诱导后细胞胞浆开始出现微小明亮的脂肪滴。结果表明胃肿瘤组织内存在肿瘤干细胞,且与正常细胞有相似的形态、生物特性以及多向分化能力,可能参与胃癌的发生、发展。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

胃癌干细胞表面标记物的研究与最新进展

背景:最近人们研究发现,肿瘤的复发与肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞理论为研究胃癌的发病机制以及诊治开辟了新的途径,确定的表型有利于锁定胃癌干细胞,这有助于探讨胃癌干细胞在自我更新和分化过程中的作用,并为治疗胃癌提供新思路,但其表型仍存在争议。目的:综述胃癌干细胞表面标志物的研究进展。方法:由第一作者分别以"Gastric Cancer Stem Cells"为英文关键词检索PubM ed英文数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed)中1965年1月至2015年10月的文献,共保留68篇文献进行综述。结果与结论:通过分析整理,传统上的肿瘤干细胞表型不适合于标记胃癌干细胞。研究发现CD90在胃癌原发性肿瘤中有表达,分离后经无血清肿瘤球培养法培养可获得肿瘤球。CD24的表达有助于提高胃癌细胞的黏附、侵袭、迁移能力。此外研究证实CD44及CD54共表达的细胞会大量出现在胃癌复发早期患者的体内而不是晚期,表达CD44及CD54的肿瘤细胞很可能是导致胃癌发生以及复发的重要原因。综上所述,CD44^+CD24^+CD90^+CD54^+很可能是胃癌干细胞的表型。     

肿瘤细胞的糖代谢调控与肿瘤治疗

肿瘤细胞具有独特的糖代谢特征,即高糖吸收、有氧糖酵解与高乳酸生成,具体表现为肿瘤细胞参与氧化代谢的相关蛋白表达下调、葡萄糖转运蛋白及单羧酸转运蛋白表达上调。研究表明,靶向肿瘤细胞糖代谢的药物具有杀死肿瘤细胞的能力,为肿瘤治疗带来了新希望。此外,肿瘤干细胞被认为是肿瘤复发、转移及预后不良的根源,其能量代谢特征目前尚不清楚。有研究表明,逆转肿瘤干细胞的能量代谢可以增加其化疗敏感性。本文综述近年来肿瘤细胞及肿瘤干细胞糖代谢方面的研究进展,以及通过靶向糖代谢进行肿瘤治疗面临的机遇与挑战,期望可为临床上肿瘤治疗提供新的思路与契机。     

兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及原代培养

背景：兔来源的骨髓间充质干细胞是具有较强的体外增殖和多系统分化潜能的成体干细胞,在组织工程及生物治疗领域蕴藏着巨大的潜能。 目的：体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察骨髓间充质干细胞的生物学特征。 方法：无菌条件下抽取兔骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和Percoll密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。在显微镜下观察细胞形态特征及生长规律,流式细胞技术检测细胞表面抗原标记物的表达。 结果与结论：兔骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经过细胞传代后能够获得进一步纯化的细胞,杂质细胞减少。原代细胞形态即呈现三角形、长梭形、纺锤形的贴壁细胞特征。第 5代骨髓间充质干细胞呈典型的极性漩涡状生长,形态单一均匀,不具有表达造血前体细胞表面标志抗原CD34和白细胞表面标志抗原CD45的表面标记物功能,但是具有能够表达出整合素家族的成员 CD29 及黏附分子CD44的特点。说明经全骨髓贴壁法和Percoll密度梯度离心法体体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经流式细胞分析鉴定为兔骨髓间充质干细胞。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

来源于乳腺癌正常组织乳腺干细胞的安全性北大核心

背景:乳腺干细胞的培养对研究乳腺的发育及乳腺癌具有重要的意义。目的:找到一种易操作的体外分离培养乳腺干细胞的方法,并验证其安全性。方法:分离培养乳腺癌旁正常组织中乳腺上皮细胞,流式细胞仪分选CD49f和EPCAM阳性细胞进行干细胞表面标记分析及细胞集落形成能力分析,然后在乳腺干细胞、乳腺癌组织和乳腺癌旁正常组织中提取mR NA,实时荧光定量PCR检测C-erbB-2和Maspin基因的表达。结果与结论:(1)成功培养出人乳腺干细胞,并且细胞表面特异性标志物CD49f,EPCAM高表达;(2)集落形成能力分析可见混合集落、腔上皮细胞集落、肌上皮细胞集落;(3)乳腺干细胞C-erbB-2低表达,而Maspin高表达,证明来源于乳腺癌正常组织的乳腺干细胞具有生物安全性。     

肝癌干细胞分离及其细胞生物学特性

背景：正常干细胞和肿瘤干细胞在基因表达和依赖的细胞信号通路上应该存在不同,如何发现能选择性杀伤肿瘤干细胞的治疗手段是一个仍然需要大量研究的课题。 目的：分离人肝癌细胞系肿瘤干细胞MHCC97,分析其细胞生物学特性。 方法：采用流式细胞技术在人高转移肝癌细胞系MHCC97中筛选肿瘤干细胞,分离正常人肝脏干细胞CD133^-CD34^- MHCC97和人肝癌细胞系肿瘤干细胞CD133⁺CD34⁺ MHCC97,分别检测其表型、生长曲线、细胞周期和多系分化能力。 结果与结论：人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97肿瘤干细胞的表型为CD133⁺CD34⁺ ,人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97具有与CD133^-CD34^- MHCC97相似的细胞曲线和生长周期,可以向上皮和内皮细胞分化,并表达相应特异性的分子标志。提示人肝癌细胞系中CD133⁺CD34⁺MHCC97细胞具有肿瘤干细胞的特性,可以向内皮和上皮细胞分化,同时具有肿瘤干细胞的生物学特性,是肿瘤复发转移的根源,也是临床治疗的靶点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

胃癌肿瘤干细胞的分离与成脂分化

背景：肿瘤干细胞是否存在于所有肿瘤中仍有争议。 目的：从人胃癌细胞中分离并鉴定类肿瘤干细胞,对胃癌的发生机制进行探讨。 方法：原代培养胃癌细胞,并通过流式细胞术检测CD44和CD29等细胞因子的阳性表达率,分选阳性细胞进行成脂诱导。 结果与结论：胃癌细胞中CD44、CD29的阳性百分率分别为5.67%和5.53%,CD44和CD29阳性细胞具有成脂能力,证明胃癌肿瘤细胞中存在具有分化能力的类肿瘤干细胞。     

抑制IGF-1R可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体(type Ⅰ insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)是细胞生长分化的重要调节因子,可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤,并为一些细胞类型转化所必需.IGF-1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表达,并被认为是潜在的肿瘤治疗靶点.软琼脂克隆形成实验是体外检测细胞成瘤性的常规方法,可用于分离和纯化肿瘤细胞及抗肿瘤药物体外抑制肿瘤生长能力的评价,随着肿瘤干细胞研究的兴起,亦被用来检测具有干细胞性质的细胞.本实验拟构建非锚着依赖性细胞立体生长模型,使用IGF-1R抑制剂检测特异性抑制IGF-IR对细胞增殖和克隆形成的影响.     

骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景：以骨髓间充质干细胞构建组织工程气管尚缺乏理想的特异性表面标志物,对其鉴定主要依赖细胞形态学、细胞表型及诱导分化的功能进行分析。 目的：体外分离培养、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察在特定条件下向气管软骨细胞分化的潜能。 方法：无菌环境取兔骨髓,经全骨髓贴壁筛选法分离培养细胞至第2代,流式细胞术鉴定第1、第2代细胞表面抗原CD44、CD45的表达。无菌环境取气管,经酶消化法分离培养气管软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞蛋白聚糖的合成。在使用转化生长因子β1的基础上,将骨髓间充质干细胞与气管软骨细胞通过Transwell小室非接触式共培养,倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定蛋白聚糖的合成,荧光实时定量PCR鉴定Ⅱ型胶原和蛋白聚糖 mRNA的表达。 结果与结论：分离、培养的细胞呈长梭形、不规则形聚集生长,传代后细胞生长速度明显增快,呈鱼群状聚集生长。第1代有96.97%的细胞表达CD44、13.72%的细胞表达CD45,第2代有99.11%的细胞表达CD44、8.54%的细胞表达CD45。气管软骨细胞甲苯胺蓝染色阳性。在诱导后,骨髓间充质干细胞形态逐渐由长梭形变为三角形或不规则形,表达软骨细胞特异性Ⅱ型胶原和蛋白聚糖 mRNA基因,甲苯胺蓝染色示阳性。结果表明全骨髓贴壁筛选法可成功分离培养骨髓间充质干细胞,第2代纯度较高,且在特定诱导条件下具有分化为气管软骨细胞的潜能。     

人鼻咽癌CD133+干细胞的生物学特性及意义**

背景：有研究表明肿瘤细胞株中存在肿瘤干细胞,是肿瘤复发、转移的根源,但人鼻咽癌细胞株CNE-2中肿瘤干细胞的表达及生物学特性至今少有报道。 目的：观察人鼻咽癌CD133+干细胞生物学特性及意义。 方法：采用流式细胞仪检测人鼻咽癌细胞株CNE-2中CD133的表达情况。免疫磁珠分选技术获得人鼻咽癌CD133+干细胞,分别采用无血清培养法、CCK-8法、平板克隆形成试验及裸鼠体内成瘤实验检测CD133+干细胞的体外增殖及体内成瘤能力,并将其与CD133-及未分选鼻咽癌细胞进行比较,以了解CD133+干细胞的生物学特性。 结果与结论：免疫磁珠富集的CD133+细胞在无血清培养基中呈悬浮生长,并可以形成肿瘤干细胞球。CD133+细胞与CD133-细胞比较具有较高的克隆形成能力(P < 0.01);CD133+细胞在裸鼠体内的成瘤率高于CD133-细胞(P < 0.05)。结果证实,鼻咽癌CD133+干细胞能在体外分离培养,形成干细胞球,增殖能力强,在裸鼠体内具有极强的成瘤能力。 关键词：鼻咽癌;肿瘤干细胞;增殖;生物学特性;干细胞培养 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.013     

星形胶质细胞瘤干细胞的体外分离、培养与鉴定

背景：肿瘤干细胞理论认为肿瘤中存在一小部分具有无限增殖潜能和自我更新能力,能够分化为成熟细胞表型的干细胞样细胞,对肿瘤发生、增殖、侵袭起关键作用。 目的：建立体外分离、培养与鉴定星形胶质细胞瘤干细胞的方法。 方法：采用直接培养法分离培养星形胶质细胞瘤干细胞。参照神经干细胞培养条件,进行体外培养。观察其增殖、分化并进行巢蛋白、CD133免疫细胞化学鉴定和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白及O4免疫细胞化学鉴定。 结果与结论：培养7-10 d,可形成大量悬浮生长巢蛋白及CD133免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白或O4免疫阳性。提示星形胶质细胞瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞。CD133和巢蛋白是星形胶质细胞瘤干细胞重要的表面标记,可以用于星形胶质细胞瘤干细胞的分离。     

大鼠视网膜干细胞的增殖和多向分化**

背景：国内对视网膜干细胞的体外分离培养及鉴定仍处于初步探索阶段。 目的：体外分离、培养及鉴定新生大鼠视网膜干细胞,探讨其多向分化潜能。 方法：用神经干细胞无血清培养方法分离和培养新生24 h的SD大鼠睫状体细胞,第6代视网膜干细胞经胎牛血清诱导分化,应用免疫细胞化学方法检测视网膜干细胞的分化特性。 结果与结论：体外培养的细胞球具有连续克隆能力,Nestin抗原阳性,BrdU 标记结果显示悬浮细胞团主要由分裂增殖的细胞组成,并表达胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10;诱导分化后的细胞表达星形胶质细胞特异性标志物GFAP、神经元特异性标志物NSE、感光细胞标志物Opsin、双极细胞特异性抗原PKC和节细胞特异性抗原β-tubulin,实验初步证实培养的视网膜干细胞具有神经干细胞特性,能自我更新和增殖分化成为感光细胞类型的细胞。 关键词：视网膜干细胞;细胞培养;无血清;细胞分化;大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.015     

CD133+胶质瘤干细胞在胶质瘤中的分布

恶性胶质瘤是人类最致命的肿瘤之一,因其血管丰富和弥漫浸润性生长,使得手术不能全部切除并极易复发,患者预后差.因胶质瘤干细胞(GSCs)是胶质瘤发生、发展的源头,因而越来越多的受到关注.干细胞标志物CD133广泛表达于人体多种肿瘤中,同时,它也足研究得最多且应用最广泛的胶质瘤干细胞表面标志物.了解CD133+胶质瘤干细胞在胶质瘤中的分布可为临床靶向治疗恶性胶质瘤提供依据.