左归丸对6.0 Gyγ射线损伤大鼠卵巢组织凋亡和p53蛋白表达的影响

目的 探讨6.0 Gyγ射线对性成熟期大鼠血清性激素水平、卵巢组织凋亡的影响,以及左归丸的干预效应.方法 将60只8周龄雌性SD大鼠,随机分成正常对照组、辐射组、补佳乐组、左归丸高剂量组、左归丸低剂量组和左归丸高剂量+补佳乐组,每组10只.γ射线一次性照射(6.0 Gy,LD40)24小时后给予补佳乐、左归丸高剂量、低...     

左归丸针对性调节MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达

目的:研究左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达谱的影响,探讨左归丸调节MSG-肝再生-大鼠再生肝的分子机制.方法:复制MSG-肝再生-大鼠模型,给予左归丸5g/kg灌胃治疗2周后,观察再生肝组织基因表达谱的变化规律.结果:左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达具有针对性调节作用的有12条.其中,模型组相对于对照组上调、治疗后下调的基因有5条.模型组相对于对照组下调、治疗后上调的基因有7条.结论:左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织的部分基因表达具有针对性调节作用,这可能是左归丸滋养肝肾调节肝再生的重要分子机制之一.     

左归丸母代干预对妊娠糖尿病模型大鼠子代胎鼠胰腺发育调控因子PDX-1、HNF-6的影响

目的 探讨左归丸母代干预对妊娠糖尿病(GDM)模型大鼠子代胎鼠的影响及机制.方法 通过雌雄同笼制备孕鼠90只,随机分为正常组,模型组,门冬胰岛素组,左归丸低、中、高剂量组,每组15只.除正常组外,其余孕鼠通过腹腔注射链脲佐菌素的方法复制GDM孕鼠模型.造模成功后左归丸低、中、高剂量组给予左归丸灌胃剂量分别为2.5、5....     

左归丸对大鼠卵泡发育与卵巢血管生成的影响

目的:探讨左归丸对大鼠卵巢卵泡发育与血管生成的影响.方法:将SD大鼠(160～170 g)随机分为空白对照组(A组)、结合雌激素组(B组)、左归丸成药低(C组)、高剂量组(D组)、左归丸浸膏低(E组)、高剂量组(F组),各组n=10.分别灌服蒸馏水20 g·kg-1、结合雌激素混悬液65μg·kg-1、左归丸混悬液1.875,5.625 g·kg-1、左归丸浸膏相当于生药11,33 g·kg-1,每日1次,连续15d.计数大鼠卵巢各级卵泡及黄体;计算生殖器官(卵巢、子宫及阴道)脏器指数;采取酶免疫分析法测定血清雌二醇(E2)水平.将大鼠随机分为空白对照组、结合雌激素组(65μg·kg-1)、左归丸成药组(5.625 g·kg-1)、左归丸浸膏组(相当于生药33 g·kg-1),各组n=6.应用墨汁灌注法观察卵巢血管.结果:D,F,B组均可增加大鼠窦状卵泡数(21.70±10.40,15.60±2.22,15.60±8.04)个及卵泡总数(32.10±11.57,25.30±5.06,29.10±18.62)个,B～F组均可增加大鼠卵巢指数(0.68±0.11,0.55±0.05,0.68±0.08,0.61±0.10,0.68±0.03),D～F,B组均可提高大鼠血清E2水平(86.92±5.05,68.98±9.19,87.16±10.37,87.39±12.81)ng·L-1,均P＜0.01或P＜0.05.结合雌激素组、左归丸成药组、左归丸浸膏组的卵巢血管密度和管腔明显增大.结合雌激素组、左归丸浸膏组组可增加卵巢小血管数(13.33±2.50,13.17±3.87)个,结合雌激素组、左归丸成药组、左归丸浸膏组均可增加大鼠卵巢大血管数(33.00±5.44,34.33±8.59,35.83±7.63)个及血管总数(46.33±7.82,45.00±10.84,49.33±11.11)个,P＜0.05或P＜0.01.结论:左归丸可促进160～170 g大鼠卵泡发育和卵巢血管生成,其促卵泡发育作用与提高雌激素水平、增加雌激素样效应及增加卵巢血管数有关.左归丸浸膏较成药丸剂作用更明显.     

左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究

目的 探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响.方法 选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平;孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性;孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01);与左归丸组比较,左归丸加 SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14d的矿化结节的促进作用(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路.     

左归丸含药血清对成骨细胞增殖功能的影响

左归丸出自明代名家张景岳的<景岳全书·新方八阵>.我们以往的研究显示,左归丸对卵巢切除大鼠所致骨质疏松具有明显的治疗作用[1].本实验拟采用体外成骨细胞培养的方法,进一步探讨左归丸治疗骨质疏松症的机理.     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

左归丸对骨髓抑制小鼠造血调控的影响

目的 观察左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能的造血调控机制.方法 将48只大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组和左归丸低、中、高剂量组,各8只,除正常对照组外,其余各组采用60Coγ射线和环磷酰胺联合制作骨髓抑制大鼠模型,于造模结束后第2 d开始给药,模型组、正常对照组予0.9%氯化钠注射液,左归丸低、中、高剂量组予相应浓度左归丸,阳性对照组予重组人粒细胞集落刺激因子注射液.各组均给药7 d.用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术分别检测左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和调亡的影响.结果 左归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞(P＜0.05,P＜0.01),左归丸中剂量对血小板和左归丸高剂量对白细胞有明显升高作用(P＜0.05).左归丸中剂量组和阳性对照组能提高体外培养各系造血祖细胞的集落数(P＜0.05,P＜0.01),左归丸高剂量组粒单系细胞集落生成单位、红系细胞集落生成单位和爆增型红细胞集落生成单位数提高显著(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组均能促进骨髓G0/G1 期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,从而导致G2/M期细胞比例和增殖指数(PI)明显升高(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组的骨髓细胞凋亡比例与模型组比较均显著下降(P＜0.01),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过G1/S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复.     

左归丸、右归丸汤剂对辐照后骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

目的：探讨左归丸汤剂和右归丸汤剂对辐照后骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用及可能机制,分析辐照后的骨髓抑制的肾虚类型,为临床优化选用补肾助阳法、滋阴补肾法提供一定的理论依据.方法：对比左归丸、右归丸汤剂对辐照后骨髓抑制小鼠外周血象、血清GM-CSF、EPO、TPO含量的影响.结果：与模型组比较,左归丸组、右归丸组的RBC含量明显升高（P＜0.05）,左归丸组的HGB显著增加（P＜0.05）,右归丸组的WBC明显增高（P＜0.05）;与模型组比较,左归丸组、右归丸组血清中的EPO、GM-CSF的含量均明显升高（P＜0.05）,TPO的含量明显降低（P＜0.05）;两方在对EPO、GM-CSF的影响方面,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：左归丸、右归丸汤剂对辐照后骨髓抑制小鼠的外周血象均有修复作用,并能有效调节血清中TPO、EPO、GM-CSF的表达,从而促进辐照后骨髓抑制小鼠造血功能的恢复.右归丸在提升EPO、GM-CSF方面优于左归丸,两方在降低血清中异常升高的TPO水平方面均有显著作用,但疗效无显著差别（P＞0.05）.     

基于ER/ERK信号通路研究左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响

目的:对比观察左归丸和左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响,从而部分阐明"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸、左归丸去补阳药含药血清,选用雌激素受体拮抗剂ICI182780共孵,阻断ER受体后检测左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。采用MTT法检测24 h、48 h、72 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖的影响,采用改良钙钴染色法和茜素红染色法分别观察48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞ALP活性和矿化结节的影响,采用Western-blot法检测48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对ERα、ERK、p-ERK和Osterix蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,左归丸组(9.68 g/kg)促进成骨细胞增殖,提高成骨细胞ALP活性和矿化结节数量,上调ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达。ICI 182780阻断ER受体后,左归丸含药血清促成骨细胞增殖、分化和矿化的特性明显下降,ERα和p-ERK蛋白表达降低,相关转录因子Osterix的表达也被部分抑制。与空白对照组比较,左归丸去补阳药组(7.47 g/kg)未呈现促MC3T3-E1细胞增殖作用,可促进成骨细胞ALP活性和矿化结节形成数量增多,左归丸组明显优于左归丸去补阳药组,对ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达影响不明显。结论:左归丸含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化和矿化,机制可能与其上调成骨细胞ER受体激活ERK信号通路调控转录因子osterix有关;全方效果较好,部分揭示左归丸"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制可能与其影响成骨细胞增殖和部分影响成骨细胞分化和矿化功能密切相关。     

左归丸联合阿仑膦酸钠治疗绝经后骨质疏松症临床观察

目的:观察左归丸联合阿仑膦酸钠治疗绝经后骨质疏松症的效果。方法:80例随机分为西药组和左归丸组各40例,两组均用阿仑膦酸钠治疗,左归丸组加用左归丸治疗。结果:左归丸组治疗后雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促间质细胞激素(LH)、黄体酮(P)与西药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。左归丸组中医症状总积分低于西药组(P<0.05),左归丸组总有效率高于西药组(P<0.05),左归丸组治疗后腰椎L2～L4、右侧股骨颈、双髋骨密度高于西药组(P<0.05)。结论:左归丸联合阿仑膦酸钠治疗绝经后骨质疏松症可有效改善临床症状,提高骨密度,疗效较好。     

基于"阳中求阴"理论研究左归丸对肾阴虚证能量代谢的影响

目的:通过观察左归丸及其拆方对肾阴虚大鼠肝线粒体能量代谢的影响,探讨左归丸"阳中求阴"治疗肾阴虚证的作用机理.方法:采用灌胃甲状腺素片与利血平混合悬浮液制备肾阴虚证模型,并随机分为模型组、左归丸组、滋阴组和补阳组.检测大鼠肝组织线粒体中SDH、Na+-K+-ATPase、CCO、LDH活性及ATP含量变化,电镜下观察肝...     

左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠骨密度、骨保护素mRNA及核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响

目的探讨左归丸联合温和灸治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法 40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组10只。模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组采用手术完整摘除双侧卵巢法制造骨质疏松症模型。造模3个月后左归丸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃+长强穴艾灸治疗,空白组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组均干预6周。干预前后测定大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度,干预后通过PCR法检测大鼠骨组织骨保护素(OPG)mRNA和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL降低,RANKL mRNA表达上升(P0.05或P0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均升高,RANKL mRNA表达降低(P0.05或P0.01),且左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均较左归丸组升高,RANKL mRNA表达较左归丸组降低(P0.05)。结论左归丸联合温和灸能明显升高骨质疏松症大鼠的骨密度,上调OPG mRNA表达、下调RANKL mRNA表达可能是其作用机制之一。     

左归丸联合激素替代治疗卵巢储备功能下降的经验总结

卵巢储备功能下降是临床常见的妇科生殖内分泌疾病,发病率呈逐年上升趋势,对育龄期妇女的生殖健康存在极大威胁.中医认为肾虚为其主要病机,左归丸为补肾填精之经典方.文章通过总结左归丸联合激素替代治疗卵巢储备功能下降,发现左归丸联合激素替代治疗卵巢储备功能下降性月经过少,可以取得很好的临床疗效.     

左归丸对雌性小鼠阴虚模型生殖内分泌的影响

目的　通过左归丸对实验性雌性阴虚小鼠生殖内分泌的影响探讨其滋补肾阴的作用机制。方法　采用甲状腺素片灌胃造成雌性小鼠阴虚模型 ,造模前 2d起给予中药灌胃。采用放射免疫测定法测定小鼠外周血FSH及E2 含量。电子天平称取胸腺及卵巢的质量。结果左归丸组及左归丸去温阳药组E2 含量较模型组高 (P <0 .0 1) ,且左归丸组胸腺质量与模型组相比减少较少 (P <0 .0 5 ) ,两组中药复方之间在影响FSH ,E2 、卵巢质量及胸腺质量方面差异不明显 (P >0 .0 5 )。结论　补阴复方左归丸调节雌性阴虚小鼠生殖内分泌的功能可能是其滋补肾阴的作用机制之一     

左归丸临床应用举隅

左归丸由熟地黄、山药、枸杞子、山茱萸、川牛膝、菟丝子、鹿角胶、龟版胶组成,为滋阴补肾名方.笔者临床体会,应用左归丸先改用汤剂治疗症状缓解后再用丸剂巩固治疗多种疑难顽症,只要方证合拍,投之常常取效.     

补肾方胚胎期干预子代成年大鼠IGT及其胰岛素抵抗、瘦素抵抗的研究

目的:通过大鼠胚胎发育期予补肾方干预,以研究中医补肾方在胚胎发育期干预能否预防高脂饮食诱发的子代成年大鼠糖耐量低减(IGT)及其对胰岛素、瘦素的影响.方法:将孕鼠分为正常对照组、模型组、左归丸组、右归丸组、八珍汤组,在孕1～19 d,各用药组分别以左归丸、右归丸、八珍汤灌胃(ig,20 g·kg-1,20 mL·kg-1),正常对照组和模型组以生理盐水灌胃.除正常对照组外,其余各组子鼠均于6周龄开始高脂饲料喂养,12周后测各组子鼠空腹血糖(FBG)、糖负荷后2h血糖(2hBG)、血清空腹胰岛素、瘦素.结果:与模型组比较,左归丸组2hBG明显降低(P＜0.05);八珍汤组和右归丸组2hBG无明显降低.左归丸组、右归丸组、八珍汤组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).左归丸组和右归丸组血清瘦素显著低于模型组(P ＜0.01,P＜0.01);而八珍汤组血清瘦素水平与模型组相比无显著性差异.结论:左归丸与右归丸胚胎期干预都可对抗高脂饮食引发子代成年大鼠胰岛素抵抗、瘦素抵抗,但对IGT的预防作用以左归丸为优.八珍汤组对抗胰岛素抵抗、瘦素抵抗作用相对弱,也未能预防高脂饮食引起的子鼠IGT的发生.     

针药结合治疗围绝经期肾阴虚型失眠临床研究

目的:观察针药结合治疗围绝经期肾阴虚型失眠的临床疗效。方法:选择符合研究标准的90例围绝经期肾阴虚型失眠患者,在随机的情况下将其平均分为董氏奇穴组、左归丸组、针药组,董氏奇穴组患者仅提供针刺治疗,左归丸组提供中药方剂左归丸治疗,针药组患者则同时进行董氏奇穴和左归丸治疗,持续治疗1周为1个疗程,连续治疗并观察3个疗程。结果:针药组治疗围绝经期肾阴虚型失眠的总有效率(96. 7%)优于董氏奇穴组(86. 7%)和左归丸组(80. 0%),针药组与董氏奇穴组、左归丸组比较有统计学意义(P 0. 05),董氏奇穴组与左归丸组比较无统计学意义。治疗后3组患者E2上升,FSH、LH下降,但治疗前后无统计学意义。经治疗后3组匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分均较治疗前明显下降,差异均有统计学意义(P 0. 05),针药组下降更显著,针药组治疗后PSQI与董氏奇穴组、左归丸组比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:针药结合治疗围绝经期肾阴虚型失眠效果优于仅提供董氏奇穴或中药治疗,能更好地提高围绝经期肾阴虚型失眠患者的生活质量。     

左归丸对5/6肾大部切除模型并肾性骨病大鼠甲状旁腺的影响

目的:探讨左归丸对5/6肾大部切除模型并肾性骨病大鼠甲状旁腺功能亢进的影响.方法:SPF级Wistar大鼠进行5/6肾大部切除并给予高磷饮食诱导肾性骨病模型.造模大鼠分为模型组、左归丸组、骨化三醇组,并设正常组、假手术组.药物干预12周处死大鼠,检测血清全段甲状旁腺激素(iPTH);双能X线测量大鼠股骨骨密度(BMD);分别采用Real-time PCR、western blotting检测甲状旁腺PTH mRNA与蛋白的表达;免疫组化的方法检测甲状旁腺PCNA的表达.结果:12周时,模型组大鼠出现了血iPTH升高,甲状旁腺增生,骨密度下降.左归丸组大鼠iPTH水平与模型组比较(P＜0.01)明显下降,左归丸组大鼠骨密度与模型组比较明显改善(P＜0.01),明显抑制甲状旁腺增生.结论:左归丸能降低5/6肾大部切除模型并肾性骨病大鼠甲状旁腺素合成以及血iPTH水平,抑制甲状旁腺增生,改善肾性骨痛.     

左归丸含药血清对血管生成体外三维模型的影响

目的:观察高效液相色谱(HPLC)监测制备的左归丸含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖及血管生成体外三维模型的影响。方法:左归丸灌胃大鼠后,于不同时间点制备血清,HPLC监测下,选取药物成分峰值最大时间点的含药血清进行体外实验。噻唑蓝(MTT)法观察左归丸含药血清对HUVEC增殖的影响,I型鼠尾胶原表面培养法观察左归丸含药血清对三维模型管样结构的影响。酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测雌二醇E2(estradiol)、血管内皮生长因子VEGF(vascular endothelial growth factor)水平。结果:左归丸灌胃后2h可达最高药物吸收峰值,左归丸11g/kg(72h),左归丸33g/kg(24、48、72h)对HUVEC均有明显的增殖作用。左归丸11g/kg、左归丸33g/kg均可明显的增加内皮小管的面积、长度、管径及生成指数。左归丸11g/kg、左归丸33g/kg均可明显的提高大鼠血清E2、VEGF水平。结论:HPLC监测下制备的左归丸含药血清能够促进血管内皮细胞的增殖,增大小管的面积、长度、管径及成管指数,提高血清E2、VEGF水平,从而促进血管生成。