组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法 体外分离、培养、扩增人类表皮细胞，与壳聚糖—明胶膜构建表皮细胞膜片，用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面，以单纯壳聚糖／明胶膜作为对照；术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测。结果 表皮细胞可以壳聚精—明胶膜作为载体在体外培养，达到60％～70％亚融合状态时，移植人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面，人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化，形成连续的表皮覆盖创面。结论 人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物。     

组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面.方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测.结果表皮细胞可以壳聚糖-明胶膜作为载体在体外培养,达到60%～70%亚融合状态时,移植人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面,人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化,形成连续的表皮覆盖创面.结论人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物.     

皮耐克组织工程皮肤修复皮肤创面的研究

【目的】探讨采用皮耐克真皮支架与大鼠表皮干细胞、成纤维细胞构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的可行性。【方法】分离培养大鼠表皮干细胞、成纤维细胞并进行免疫荧光鉴定。成纤维细胞接种于皮耐克敷料构建类真皮,表面种植表皮干细胞构建组织工程皮肤。将BALB/c裸鼠复制背部皮肤缺损模型,随机分为3组,单纯支架组移植皮耐克敷料,成纤维细胞支架组移植皮耐克成纤维细胞复合物,组织工程皮肤组移植皮耐克组织工程皮肤。术后记录创面愈合情况,并分别取5、7d创面组织进行病理学检查。【结果】表皮干细胞角蛋白15(CK15)、β1整合素表达阳性,成纤维细胞层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)表达阳性。组织工程皮肤组愈合情况最好,移植物处成纤维细胞增生,新生毛细血管明显,表皮细胞分层排列规则。【结论】皮耐克组织工程皮肤促进裸鼠皮肤创面修复效果良好。     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

脱细胞异体真皮加自体刃厚皮片移植修复皮肤缺损

目的观察采用脱细胞异体真皮基质与自体刃厚皮复合移植修复皮肤缺损的疗效。方法2003年8月至2005年10月用脱细胞异体真皮基质与自体刃厚皮复合移植修复5例皮肤缺损。结果4例植皮完全成活,1例植皮部分成活,经补充游离植皮后创面愈合,随访3～6个月复合移植皮肤质地柔软,弹性良好,无瘢痕增生。与自体全厚皮片移植无明显差异。结论脱细胞异体真皮基质加自体刃厚皮片移植是修复皮肤缺损的一种良好方法。     

复合牙龈间充质干细胞的脱细胞真皮基质修复 SD 大鼠皮肤缺损实验

目的：：探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)复合脱细胞真皮基质(ADM)修复皮肤缺损的实验。方法：以纯化3代 GMSCs 作为种子细胞接种于 ADM,构建组织工程化皮肤替代物。实验分组：18只 SD大鼠随机分成3组：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组。将3组相应材料分别移植于 SD 大鼠背部皮肤缺损处,观察比较创面修复效果。结果：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组皮肤缺损创面愈合时间分别为(15.1±1.3)d、(18.5±2.1)d 和(22.6±2.6)d,差异有显著性意义(P <0.05)。组织学观察显示,GMSCs 复合 ADM 移植组成纤维细胞、新生小血管、胶原纤维均较单纯 ADM 移植组和空白对照组明显增多。结论：GMSCs 复合 ADM 移植构建组织工程化皮肤替代物移植后促进了新生血管形成、缩短了皮肤创面的修复。实验显示 GMSCs 作为种子细胞复合 ADM,移植构建组织工程化皮肤替代物可用于皮肤缺损的修复治疗。     

龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤缺损的作用

[目的]观察龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤缺损创面的促进作用.[方法]将人成纤维细胞种植入胶原海绵,人角质形成细胞种植在表层,构建组织工程皮肤,并移植入裸鼠皮肤缺损创面;实验动物随机分为4组,选用"活血圣药"龙血竭于移植后2 d分别进行创面外敷、单纯口服、创面外敷+口服治疗,并设空白对照组.组织工程皮肤移植后9 d取材检测,观察创面局部表皮厚度、真皮层中层粘连蛋白(Ln)、Ⅰ型胶原蛋白的表达及毛细血管增生情况.[结果]龙血竭能促进组织工程皮肤移植后表皮的发育及真皮层中毛细血管的增生,增强Ln、Ⅰ型胶原蛋白的分泌,龙血竭外敷+口服组效果最佳.[结论]龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤创面有促进作用.     

体外构建的皮肤模型Inspectskin Ⅰ修复裸鼠全层皮肤缺损

【目的】探讨胚胎来源表皮干细胞构建的人工皮肤模型InspectskinⅠ修复全层皮肤缺损的作用,为构建含皮肤附属结构的检验用皮肤奠定基础。【方法】将人羊膜和BMP-4定向诱导小鼠胚胎细胞分化为表皮干细胞,采用筏式培养在体外与PHBV和成纤维细胞共培养构建组织工程皮肤,经短暂培养后移植于裸鼠皮肤缺损创面,对移植物进行形态学和免疫组织化学观察。【结果】移植物可封闭皮肤缺损,在其表面可形成复层表皮样结构,真皮部分可见大小不等的由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构、汗腺样结构和毛囊样结构。免疫组化和免疫双标结果表明新生表皮的基底层分别呈CK19和CK10阳性,腺管样结构分别呈CEA和CK18阳性。【结论】体外重建的人工皮肤能修复裸鼠全层皮肤缺损,胚胎来源表皮干细胞具有分化为复层扁平上皮、汗腺样结构和毛囊样结构的潜能。     

关节周围皮肤缺损伤异体真皮网和自体皮片移植的临床应用

目的：采用J-1型脱细胞异体真皮网与自体皮片复合移植治疗关节周围皮肤大面积缺损伤。方法：2003年7月～2007年7月，运用J-1型脱细胞异体真皮网和自体皮片移植修复关节周围皮肤缺损创面6例。结果：复合移植皮肤颜色、质地基本接近正常皮肤，功能良好，瘢痕增生轻。结论：J-1型脱细胞异体真皮网可推广应用于关节周围皮肤大面积缺损创面的复合移植。     

真皮培养及覆盖创面的观察

目的：重新认识真皮的重要性和可利用性，寻找符合生物效应的创面覆盖物。方法：用断层真皮进行体外培养，通过玫瑰红染色、HE染色动态观察培养前后及移植动物创面后的组织形态学改变。结果：真皮培养后，附件增殖活跃，表面逐渐表皮化，可形成复层。移植小鼠全层皮肤缺损创面效果满意。结论：真皮在一定培养条件下可以重新生发表皮化，可形成复层，移植小鼠全层皮肤缺损创面效果满意。结论：真皮在一定培养条件下可以重新生发表皮层，形成最接近皮肤结构的创面覆盖物，培养后的真皮抗原性、免疫原性降低，容易被创面接受并加速创面愈合。     

去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损

目的利用去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损。方法体外分离和培养人毛囊干细胞,取经慢病毒介导的绿色荧光蛋白（pGC FU-GFP-Lentiviru）标记后第4代毛囊干细胞接种于去细胞羊膜上;负载后第7天,HE染色光学显微镜观察细胞黏附生长情况。于18只C57BL/6裸鼠背部制作全层皮肤缺损创面,并根据不同的处理方式分为实验组（将负载毛囊干细胞的去细胞羊膜植入裸鼠全层皮肤缺损创面）、去细胞羊膜移植＋干细胞注射组（将去细胞羊膜覆盖创面后羊膜下注射5×106毛囊干细胞）和去细胞羊膜移植组（去细胞羊膜单独移植）,每组6只。分别于移植后第7、14、21、28天,测量各组创面面积并计算创面收缩率。移植后第28天,荧光显微镜观察创面组织绿色荧光蛋白（GFP）表达,HE染色光学显微镜观察新生皮肤结构特征。结果去细胞羊膜负载毛囊干细胞后第7天,HE染色光学显微镜观察发现,细胞连接成片状覆盖于去细胞羊膜表面。实验组和去细胞羊膜移植＋干细胞注射组移植后各时点的创面收缩率均显著小于去细胞羊膜移植组（P〈0.05）。移植后第28天,荧光显微镜观察显示实验组创面表皮层GFP表达阳性;HE染色光学显微镜观察发现实验组创面组织表皮层明显增厚,有类似毛囊样结构生成。结论去细胞羊膜负载毛囊干细胞可用于修复裸鼠全层皮肤缺损。     

脱细胞真皮联合骨髓间充质干细胞修复糖尿病大鼠皮肤全层缺损创面的研究

目的研究以骨髓间充质干细胞为种子细胞、脱细胞真皮为支架的组织工程皮肤对糖尿病大鼠皮肤全层缺损创面愈合的影响。方法 36只大鼠随机分为3组,A组：骨髓间充质干细胞＋脱细胞真皮实验组;B组：脱细胞真皮对照组;C组：空白对照组。观察创面愈合及5-BrdU阳性细胞表达角蛋白的表达情况。结果 A组第3、5、7及14 d创面愈合率分别为（19.10%±3.52%）、（29.80%±4.10%）、（56.71%±8.07%）与（88.12%±5.31%）,明显快于B、C两组（P〈0.05）。A组新生皮肤的细胞结合有序,排列紧密,真皮层较厚,有大量皮肤附属器及血管形成,明显多于B、C两组。免疫组化检测BrdU阳性细胞表达角蛋白。结论骨髓间充质干细胞联合ADM可有效促进糖尿病大鼠创面的愈合。     

巴马小型猪与人真皮的组织形态学和生物力学基本特征比较研究

目的通过比较研究巴马小型猪与人皮肤在真皮组织结构、胶原类型和生物力学性能方面的差异,寻找猪脱细胞真皮基质临床应用受限相关的组织结构及生物力学原因。方法收集巴马小型猪与人的背部全层皮肤样本,采用大体观察、HE染色、Masson三色染色、天狼猩红染色、VVG染色、扫描电镜及透射电镜等方法,显微照相后进行形态学观察和图像分析软件测量,同时利用材料试验机检测真皮生物力学性能。结果与人皮肤比较,光镜下可见巴马小型猪皮肤的真皮胶原纤维束更粗[(39.29±10.17)μmvs(17.21±5.20)μm](P=0.000 3),而其间隙率更低[(19.01±1.55)%vs(32.36±1.28)%](P=0.029);真皮弹性纤维分布、Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及其比值也与人真皮有明显差异(P<0.05);扫描电镜显示巴马小型猪真皮的胶原纤维束排列紧密、束间孔隙小,透射电镜显示巴马小型猪真皮的胶原原纤维较细,横纹的周期更长;生物力学检测显示巴马小型猪真皮的最大应变[(0.52±0.05)mm/mm]低于人真皮[(0.80±0.06)mm/mm](P=0.003),而弹性模量[(69.65±12.16)MPa]和最大应力[(20...     

猪皮脱细胞真皮基质制备方法的改良及其临床应用

目的：寻找一种较好的脱细胞真皮基质制备方法。方法：利用自制的装置，先将猪皮经负压处理，去除起泡后的表皮，然后利用离子型去污剂的渗透压梯度作用去除真皮内的细胞成分。结果：本方法制备的脱细胞真皮基质的胶原直径及排列结构均正常，无任何细胞成分。临床应用18例复合皮均存活良好。结论：本方法不失为一种简单方便且对真皮基质性状影响较小的脱细胞真皮基质制备方法。     

异种脱细胞真皮联合皮肤微粒应用于供皮区创面的研究

目的 探讨异种脱细胞真皮联合皮肤微粒应用于供皮区创面的临床效果.方法 将44例患者按照随机数字法随机分成治疗组和对照组.治疗组患者供皮区创面采用皮肤微粒结合异种脱细胞真皮基质敷料覆盖方法;对照组创面采用单层油纱覆盖方法.观察创面愈合时间、创面形成水疱情况以及瘙痒情况.结果 治疗组供皮区创面愈合时间短于对照组.治疗组患者出现水疱、感觉瘙痒以及疼痛的比例低于对照组.结论 异种脱细胞真皮联合皮肤微粒应用于供皮区创面是一种有效的促进供皮区创面愈合的手术方法.     

激光微孔冷冻异体真皮与自体刃厚皮片复合移植的试验研究

目的制备大鼠激光微孔冷冻异体真皮,探讨其与自体刃厚皮片复合移植在全层皮肤缺损的应用。方法在大鼠背部制作全层皮肤缺损创面,激光微孔冷冻组采用激光微孔冷冻异本真皮＋自体刃厚皮片,网状脱细胞组采用网状异体脱细胞真皮＋自体刃厚皮片,每组30只大鼠,对照组单纯移植自体刃厚皮片,10只大鼠;观察移植后2周,4周,8周各组创面愈合情况,计算移植物成活率,并进行组织学观察。结果移植后2周,4周,8周,激光微孔冷冻组与网状脱细胞组移植物成活率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,组织学观察见各组上皮化良好,胶原纤维排列整齐,基层膜结构完整。结论激光微孔冷冻异体真皮＋自体刃厚皮片修复全层皮肤缺损能够抑制瘢痕增生,改善创面愈合质量。     

肝素化羊脱细胞真皮基质对大鼠深Ⅱ度创面愈合的影响

目的制备肝素化羊脱细胞真皮基质（ADM）,观察其对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。方法①制成异种（羊）ADM,再用低分子肝钠素注射液浸泡处理,合成肝素化羊ADM。对肝素化羊ADM进行组织学观察,测定吸附量,进行细菌、真菌培养。②96只Wistar大鼠制作背部深Ⅱ度烫伤模型,随机分为4组,A组（n=24）肝素化羊ADM覆盖创面,B组（n=24）异种（羊）ADM覆盖创面,C组（n=24）肝素钠乳膏涂沫创面,D组（n=24）为对照组。测算3,7,14,21d创面愈合率,于7,14d光镜观察创面组织学变化,于14d电镜观察成纤维细胞结构。观察各组创面、粪、尿有无出血现象。结果①肝素化羊ADM质感柔软有弹性,不易断裂。含有低分子肝素钠（4047.50±497.49）IU/g。光镜检查、电镜检查未见表皮和真皮细胞残留,胶原结构基本完整。细菌和真菌培养呈阴性。②伤后14,21d,A组创面愈合率优于B,C,D组（P〈0.05）。伤后14d光镜观察,A组与B,C,D组比较表皮组织、肉芽组织、胶原纤维明显增多。伤后14d电镜观察,A组与B,C,D组比较成纤维细胞细胞器更丰富。各组动物创面、粪便及尿液均无出血现象。结论肝素化羊ADM能够促进大鼠深Ⅱ度创面愈合,适合用作生物敷料。     

脱细胞真皮基质治疗早期深度烧伤的研究

目的：运用异体脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）修复早期深I～I I度烧伤创面,以推广更为有效的治疗方法。方法将36例患者随机分为实验组和对照组,每组18例,对照组采用自身刃厚皮片游离移植结合保痂治疗,实验组采用异体脱细胞真皮基质进行治疗,最后采用温哥华瘢痕量表对患者术后瘢痕的外型、功能及瘢痕再生情况分为3个月、半年及1年进行评价。结果术后半年及1年实验组患者温哥华瘢痕评分分别为（6.02±0.35）分及（5.06±1.37）分,低于对照组的（9.35±1.12）分及（7.38±0.12）分,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论运用异体脱细胞真皮基质（ADM）修复深I～I I度烧伤创面,患者术后创面恢复良好,瘢痕再生不明显,外观平滑,是值得推广的有效治疗方法。