乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

基于体外鼠胚实验评估辅助生殖实验室质量

目的 通过监测体外鼠胚胎培养实验中卵裂率和囊胚率,评估本院新建的生殖胚胎实验室是否符合人类胚胎体外培养要求。方法 采用SPF级昆明系小鼠行体内和体外受精实验,雌鼠通过腹腔注射PMSG 10 U/只,48 h后腹腔注射hCG 10 U/只进行促排卵,促排卵后,体外受精组经手术获得精子和卵子行体外受精培养;体内受精组在雌鼠促排卵后,将雌鼠和雄鼠合笼饲养过夜,第二天清晨处死可见阴栓的雌鼠,手术获取受精原核胚进行培养,观察两组胚胎培养过程中的发育情况。结果 体外受精实验进行20个周期,共获卵946枚,受精率、囊胚率分别为（79.02±4.05）%、（80.12±5.27）%。体内受精实验进行14个周期,共获卵618枚,其受精率、囊胚率分别为（80.65±4.22）%、（81.35±3.06）%,两组间受精率和囊胚率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 通过监测体外鼠胚培养实验中卵裂率和囊胚率评估我院生殖胚胎实验室环境,结果表明符合各项指标质控标准。     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

胚胎早期发育体外共培养体系的比较

目的 探讨共培养体系中体细胞对胚胎早期发育的影响及比较2种常用共培养体系的优劣. 方法 实验分3组:同种不同类型体细胞.受精卵分别在含颗粒细胞和成纤维细胞的M199培养液中培养;异种同类型体细胞,受精卵分别在含牛颗粒细胞和小鼠颗粒细胞中M199培养液中培养;2种共培养体系比较,受精卵分别在"M199 颗粒细胞"和"B2 Vero细胞"的共培养体系中培养. 结果 颗粒细胞组较成纤维细胞组囊胚率高(P＜0.05);牛颗粒细胞组和小鼠颗粒细胞组在卵裂率和囊胚率方面差别无统计学意义;"M199 颗粒组"在卵裂率和囊胚率方面与"B2 Vero组"差别无统计学意义,但囊胚细胞数较少(P＜0.05). 结论 在一定的条件下,共培养体系中体细胞对胚胎早期发育有一定影响;"B2 Vero细胞"的共培养体系优于"M199 颗粒细胞"的共培养体系.     

槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育能力的影响

目的 为完善小鼠早期胚胎体外培养体系,了解槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响.方法 以CZB为基础培养液,添加不同浓度(500、50、5、1、0.5、0.2、0.1 μm)的槲皮素作为试验组,添加等量二甲基亚砜(DMSO)作为对照组,观察不同浓度槲皮素对胚胎发育到囊胚各阶段的影响.结果 当槲皮素浓度超过50μm时,对胚胎发育有毒性效应;0.1～1 μm浓度槲皮素对胚胎发育有促进作用,特别是0.5 μm槲皮素能明显提高胚胎的囊胚形成率.结论 0.5 μm槲皮素能促进小鼠早期胚胎的体外发育.     

胰岛素样生长因子-Ⅱ对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对小鼠早期胚胎的影响,为人类胚胎培养系统的优化提供依据.方法 在mKSOM培养基中加入不同浓度的IGF-Ⅱ,Xgd,鼠1-细胞胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率、孵化率及胚胎细胞数的变化.结果 小鼠1-细胞胚胎体外培养120 h后,IGF-Ⅱ添加组囊胚发育率、孵化率显著高于对照组,但囊胚细胞计数与对照组无明显差别.结论 添加IGF-Ⅱ对小鼠胚胎发育具有一定的促进作用.     

维生素E对人胚胎凋亡及体外发育的影响

目的探讨抗氧化物维生素E（Vitamin E）对人类体外培养胚胎凋亡及体外发育的影响,并观察培养过程中胚胎凋亡的形态学变化。方法以常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryotransfer,IVF-ET）后废弃的胚胎为材料,培养过程中添加抗氧化物质维生素E,观察其对胚胎体外发育的影响,采用TUNEL方法对胚胎进行染色,观察其凋亡情况;用Hoechst33342对胚泡进行荧光染色,根据胚泡细胞总数及凋亡形态学变化对其凋亡进行检测。结果当添加100μmol维生素E时,与对照组相比,显著提高人类扩张期囊胚形成率和孵化率（P〈0.05）,降低其凋亡率（P〈0.05）。结论维生素E能够降低人类囊胚的凋亡率,提高其体外发育率。     

Comparison of the Effects and Safety of Mild Ovarian Stimulation and Conventional Ovarian Stimulation with A Long GnRH Agonist Protocol on IVF Outcomes

Objective To conduct a Meta-analysis of studies that compared the efficacies of mild ovarian stimulation and conventional long GnRH agonist protocol in patients under- going IVF or intracytoplasmic sperm injection （ICSI）. Methods Meta-analysis was performed. All studies were published by July 2012 with data related to outcomes following mild ovarian stimulation compared with the conventional protocol. Odds ratios （ORs） and weighted/standardized mean difference （WMD/SMD） from individual study were pooled in fixed and random effect models. Main outcome measure was the efficacy of mild ovarian stimulation. Results Six articles were included in this Meta-analysis. The number of oocytes retrieved was lower, the cycle cancellation rate was higher and the incidence of ovarian hyperstimulation syndrome （OHSS） was lower in the mild stimulation group than in conventional ovarian stimulation group. Clinical pregnancy rates were similar in both mild and conventional stimulation groups. Conclusions The level of evidence supporting the use of mild stimulation protocols in IVF is low, considering the fewer oocytes retrieved and the higher rates of cycle cancellation.     

GnRH拮抗剂方案与GnRH-a长方案对胚胎质量的影响及IVF-ET结局的比较

目的:探讨促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH-ant）方案与促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）长方案对胚胎质量的影响及体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕结局的差别。方法:回顾性分析124例接受GnRH-ant方案和477例接受GnRH-a长方案IVF-ET治疗并行新鲜周期移植的患者资料。结果:GnRH-ant方案组Gn天数和Gn用量少于GnRH-a长方案组,差异有统计学意义（P <0.05）。GnRH-a长方案组扳机日雌二醇（E₂）水平高于GnRH-ant方案组,差异有统计学意义（P <0.05）。两组间扳机日卵泡数、≥14 mm卵泡数、孕酮（P）、子宫内膜厚度、获卵数、正常受精数、正常卵裂数、优胚数和可用胚胎数之间差异无统计学意义（P >0.05）。GnRH-ant方案组生化妊娠率及临床妊娠率均高于GnRH-a长方案组,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论:GnRH-ant方案可能对胚胎质量无影响。两组间IVF-ET结局无差异,但GnRH-ant方案Gn天数和Gn用量较少,并倾向获得更高的生化妊娠率及临床妊娠率。     

GnRH激动剂联合HCG双扳机对高龄女性IVF的影响

目的 探索促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）双扳机是否有益于接受体外受精（IVF）治疗的高龄女性。方法 回顾两年来不孕高龄女性在笔者所在科室接受IVF治疗的699个周期,根据扳机用药不同分为3组,即单用HCG组、单用GnRH-a组、GnRH-a联合HCG组。比较3组间的获卵、胚胎质量、并发症等情况,并对其后续冷冻胚胎移植（FET）周期进行分析,比较3组间妊娠结局。结果 双扳机组与GnRH-a组相似,其获卵数、成熟卵数、有效胚胎数均显著多于HCG组（P=0.000）,但3组间的受精率、卵裂率、有效胚胎率比较差异无统计学意义（P>0.05）。HCG组中重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率为3.07%,而其他两组中均无发生。GnRH-a组有获卵失败比例升高的趋势,但与其他两组差异无统计学意义（P>0.05）。不同扳机方式的后续FET妊娠结局间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 与传统HCG或GnRH-a扳机方式比较,GnRH-a联合HCG双扳机更有利于得到更多的卵子数和成熟卵数,同时避免发生诱导排卵失败、或中重度OHSS的风险。     

The Influence of Growth Factors on the Development of Preimplantation Mammalian Embryos

The development of the preimplantation mammalian embryo from a fertilized egg to a blastocyst capable of implanting in the uterus is a complex process. Cell division must be carefully programmed. The embryonic genome must be activated at the appropriate stage of development, and the pattern of gene expression must be carefully coordinated for the initiation of the correct program of differentiation. Cell fates must be chosen to establish specific cell types such as the inner cell mass and the trophectoderm, which give rise to the embryo proper and the placenta, respectively. This review summarizes recent findings concerning the influence of growth factors on the development of preimplantation mammalian embryos. Maternal factors secreted into the lumen of the female reproductive tract as well as substances synthesized by the developing embryo itself help to regulate this process. Studies of embryos in culture and investigations using homologous recombination to create embryos and animals null for specific genes have enabled the identification of several growth factors that appear essential for preimplantation mammalian embryo development. Some of the factors are required maternal factors; others are embryo-derived autocrine and paracrine factors. Studies using molecular biology are beginning to identify differences in the patterns of genes expressed by naturally derived embryos and those developing in culture. The knowledge gained from studies on growth factors, media, embryonic development, and gene expression should help improve culture conditions for embryos and will provide for safer outcomes from assisted reproductive procedures in human and animal clinics.     

孕大鼠在胚泡着床前给予醋氨酚对器官形成期胚胎发育的影响

研究孕大鼠胚泡着床前药物损伤对胚胎器官形成期发育的影响，探索药源性胚泡异常与胎仔发育的关系。方法：母鼠孕第3天给予醋氨酚0．25～1．00g／kg．孕第4天处死母鼠．计数胚泡细胞数，胚泡微核数及微核率；孕第12．5天处死母鼠，评价胚胎组织器官形态分化程度及胚胎生长发育状况。结果：醋氨酚（0．25～1．00g／kg）抑制着床前胚泡发育,对胚泡细胞产生遗传毒作用，并呈明显剂量依赖关系。与对照组相比，孕第12．5天（器官形成期）胚胎生长发育状况无明显差异，胚胎组织器官形态分化无显著改变。醋氨酚0．5g，1．0g／kg对胚胎发育具毒性，导致胚胎发育迟缓、胚胎畸形、胚胎死亡数显著增加。结论：胚胎发育毒性与着床前胚泡遗传物质损伤相关。     

促性腺激素释放激素激动剂对子宫肌瘤细胞泌乳素生成的作用

目的研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对体外培养的子宫肌瘤细胞泌乳素生成的抑制作用.方法来源于行子宫切除术的绝经前妇女的肌瘤细胞进行原代培养,10%胎牛血清或双丁酰环磷腺苷(db-cAMP)作用24,48,72,96 h后测定上清液中泌乳素(PRL)的浓度.再在上述培养液中加入GnRHa(buserelin 10-5M)后,同样的时段测定PRL浓度.采用半定量反转录PCR法测定GnRHa作用后的GnRH受体mRNA表达的变化.结果胎牛血清和db-cAMP可刺激PRL的产生,db-cAMP的刺激作用更强,并且PRL量随db-cAMP作用时间和剂量的增加而增加.在作用96 hGnRHa对对照组(不含胎牛血清)和10%胎牛血清组PRL产生有明显抑制,但db-cAMP对PRL的刺激作用不会被GnRHa所抑制.GnRHa在48 h对GnRH受体mRNA表达有轻微下调.结论GnRHa对子宫肌瘤细胞PRL的产生有直接抑制作用.由于GnRHa无法抑制db-cAMP对PRL的刺激作用,其抑制作用位点可能位于蛋白激酶A途径环磷酸腺苷位点以上.     

来曲唑联合GnRH—a治疗用于PCOS患者的研究

目的探讨来曲唑（LE）以及促性腺激素释放激素激动剂（GnRH—a）用于多囊卵巢综合征（PCOS）患者的治疗效果。方法50例不孕症常规检查确诊为PCOS并接受促排卵及宫腔内人工授精（IUI）的不孕患者,随机分为来曲唑组（24例）：口服LE;HMG组（26例）：注射14MG。两组分别于月经周期第3～7天每天口服来曲唑5．0mg或HMG75IU肌内注射,分别监测月经周期第10天子宫内膜厚度,直径≥10mm卵泡个数,记录GnRH—a注射日子宫内膜的厚度、形态,直径≥16ram卵泡（成熟卵泡）个数,直径≥14卵泡（优势卵泡）个数,血清黄体生成素（LH）、雌激素（E：）、睾酮（T）水平,分别统计排卵率及妊娠率,多胎率,卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率。结果与HMG组相比,来曲唑组月经周期第10天子宫内膜厚度薄（P=0．00）;GnRH—a注射日血清中E,水平低（P=0．00）,T水平高（P=0．004）,优势卵泡数少（P=0．02）,OHSS发生率低（P=0．04）,但临床妊娠率无明显差异（P=0．78）且多胎率低（P=0．02）。结论对PCOS患者,用LE或HMG促排卵,临床妊娠率无差异,用LE联合GnRH—a治疗可以降低HCG日血清中雌激素水平,减少OHSS的发生率,以及多胎率,可望成为一线促排卵药。     

拮抗剂方案中的排卵延迟对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的 分析体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)新鲜周期,拮抗剂方案对胚胎移植妊娠结局的影响.方法 回顾性分析北京妇产医院生殖医学中心2015年进行体外受精、新鲜胚胎移植的149周期,分析拮抗剂方案中的排卵延迟对IVF-ET的妊娠结局的影响.按照是否用拮抗剂分为2组,其中拮抗剂方案组共83个周期,非拮抗剂方案组共66个周期.结果 非拮抗剂方案组分娩孕周及单胎新生儿体重显著低于拮抗剂方案组(P值分别为0.022、0.010),而2组中双胎低体重儿体重、双胎高体重儿体重、双胎新生儿平均体重差异均无统计学意义(P值分别为0.927、0.754、0.839).非拮抗剂方案组孕早期B超胎囊数、胎心数、临床妊娠率、活产率、剖宫产率、早产率、胎停育率均显著高于拮抗剂组(P值分别为0.000、0.002、0.000、0.019、0.039、0.009、0.024).结论 IVF-ET中拮抗剂方案引起的排卵延迟并未增加早产、胎停育、新生儿低体重等不良妊娠结局的发生率.     

子宫内膜异位症患者GnRH-a预治疗后不同启动时间体外受精效果分析

目的探讨子宫内膜异位症（EMs）患者促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）预治疗后的有效促排卵方案。方法收集EMs患者接受体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的35例,于GnRH-a预治疗后月经周期第3天启动（A组）与GnRH-a预治疗后第28天启动组（B组）的两个不同时期予以促性腺激素（Gn）超促排卵,并与单纯性输卵管因素不孕患者80例（C组）治疗结局作比较。结果 3组年龄、不孕年限、种植率和临床妊娠率差异均无统计学意义（均P〉0.05）。3组Gn使用天数、注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）日E2水平差异有统计学意义（P〈0.05）,获卵数、受精数、卵裂数和移植胚胎数差异均无统计学意义（均P〉0.05）。讨论GnRH-a预治疗EMs患者后,于月经周期第3天启动超排卵的方案,值得在临床中试用。     

GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症患者间质细胞 分泌VEGF作用的比较

目的：测定GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症（EMs）患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨GnRH II对EMs患者可能的作用。方法：给予原代培养的EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH II,GnRH I类似物（戈舍瑞林,goserelin）处理,同时设对照组（不加GnRH）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中VEGF浓度,并进行比较。结果：EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）,且较GnRH I类似物（戈舍瑞林）的作用更强（P＜0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位（P＜0.05）。结论：EMs患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH II呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH II明显强于GnRH I,为寻找EMs抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据。