OVA特异性免疫治疗对哮喘小鼠IL-23/Th17轴的影响及机制研究

目的腹部皮下注射大剂量卵白蛋白(OVA)建立小鼠哮喘免疫治疗模型,探讨IL-23/Th17轴在小鼠哮喘模型经皮免疫治疗过程中的作用。方法选择18只BALB/c小鼠为建模研究对象,按随机数字表法分为3组:空白对照组、哮喘对照组和哮喘免疫治疗组,每组6只小鼠。哮喘免疫治疗组予10μg OVA于0、7 d腹腔注射致敏,21~27 d持续1周予1 mg OVA腹部皮下注射诱导免疫耐受,35~41 d予1%OVA雾化激发;哮喘对照组在21~27 d OVA皮下注射等量生理盐水,其余处置同哮喘免疫治疗组;空白对照组采用等量生理盐水致敏及激发。50 d予10%OVA加强激发1次。末次激发24 h内检测气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数细胞总数及细胞分类计数;ELISA法检测血清OVA特异性Ig E、BALF中IL-5、IFN-γ、IL-23、IL-10的表达;HE染色观察肺组织病理改变;流式细胞仪检测各组脾、肺组织Treg、Th17细胞比例;q-PCR检测肺组织转录因子。结果哮喘免疫治疗组气道反应性、BALF中嗜酸性粒细胞计数、IL-23水平及血清OVA特异性Ig E水平明显低于哮喘对照组,差异有统计学意义(P0.05);而BALF中IFN-γ水平与哮喘对照组比较差异无统计学意义(P0.05);同时HE染色发现哮喘免疫治疗组肺组织炎症较哮喘对照组明显减轻;流式细胞技术检测发现外周血Treg细胞百分比明显高于哮喘对照组,差异有统计学意义(P0.05);q-PCR检测肺组织转录因子表明免疫治疗组Foxp3明显高于哮喘对照组,而RORγt明显低于哮喘对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论大剂量OVA特异性免疫治疗能够减轻哮喘小鼠气道慢性炎症反应,同时引起Th17细胞下降伴随IL-23表达降低;其机制可能与纠正肺部IL-23/Th17轴有关。     

幼年期肺炎链球菌肺炎对哮喘形成的影响

目的研究幼年期肺炎链球菌肺炎(S.pneumoniaepneumonia,S.pp)对成年期哮喘形成的影响。方法 3周龄雌性Balb/c小鼠随机分为对照组(control)、幼年期肺炎链球菌肺炎组(Inf S.pp)、哮喘组(OVA)、幼年期肺炎链球菌肺炎哮喘组(Inf S.pp+OVA)。3周龄雌性Balb/c小鼠鼻腔滴注2×106cfu/ml肺炎链球菌25μl建立肺炎链球菌肺炎模型,成年期用OVA致敏激发Balb/c小鼠建立哮喘模型,最后1次激发完成24 h内检测小鼠气道高反应性,HE染色制作肺组织病理切片,观察组织病理变化,检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中细胞总数、细胞分类计数及细胞因子水平,流式细胞术检测小鼠肺组织中CD4~+T细胞水平。结果幼年期肺炎链球菌肺炎哮喘组肺组织炎症细胞侵润、气道反应性、BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞及细胞因子IL-5、IL-13、IL-17水平显著高于对照组(P0.05),IFN-γ、IL-10表达显著降低(P0.05),肺组织内Th2、Th17水平显著高于对照组(P0.05),Foxp3~+Treg水平显著降低(P0.01),Th1/Th2、Foxp3~+Treg/Th17比例明显降低(P0.01)。幼年期肺炎链球菌肺炎哮喘组肺组织炎症细胞侵润、气道高反应性、BALF细胞分类计数及炎性因子水平、肺组织CD4~+T细胞水平与哮喘组比较无统计学差异。结论幼年期肺炎链球菌肺炎对成年期哮喘形成无显著影响。     

肺结核患者外周血Th17/Treg的表达及其病理意义

为探讨肺结核患者外周血Th17与Treg的表达及其病理意义,收集2017年1月至2018年6月青海省第四人民医院收治的80例肺结核患者作为结核组,同期收集80例健康成人作为对照组。观察两组外周血Th17与Treg及其细胞因子的表达情况,同时分析Th17与Treg及其细胞因子与肺结核患者病情严重程度的相关性。结果显示,与对照组比较,结核组Th17降低[(2.69±0.93)%vs(1.94±0.91)%,P=0.000],Treg升高[(7.88±2.65)%vs(9.60±2.59)%,P=0.000],IL-17降低[(32.89±8.92) pg/mL vs(25.72±9.62) pg/mL,P=0.000],IL-10升高[(22.80±6.81) pg/mL vs(26.61±7.62) pg/mL,P=0.001]。肺结核患者病灶数目、直径总和与Th17、IL-17呈显著负相关(P0.05),与Treg、IL-10呈显著正相关(P0.05)。与无空洞形成的患者比较,空洞形成的患者Th17降低[(2.06±0.62)%vs(1.76±0.68)%,P=0.045],Treg升高[(8.79±2.12)%vs(10.81±2.41)%,P=0.000],IL-17和IL-10差异无统计学意义(P0.05)。提示外周血中Th17与Treg在肺结核患者中表达异常,与结核病情严重度相关。     

川芎嗪对小鼠哮喘模型Th17细胞的调控作用以及对Th17、Treg细胞平衡的影响

目的：研究川芎嗪对小鼠哮喘模型外周血中Th17、Treg细胞比例以及特征性细胞因子IL-17、IL-10水平的影响。方法：雄性BALB/c小鼠随机分成四组：正常对照组、哮喘模型组、川芎嗪治疗组以及激素治疗组。 OVA诱导激发哮喘,治疗组小鼠在第0、7、14天以及每次雾化吸入前30 min腹腔注射川芎嗪或地塞米松注射液,正常对照组用生理盐水替代OVA进行腹腔注射以及雾化吸入。小鼠的肺组织HE染色,分离外周血淋巴细胞做流式细胞学检测并ELISA法检测血清中IL-17、IL-10的水平。结果：哮喘模型组造模成功,川芎嗪治疗组及激素治疗组哮喘表现较轻微。 HE染色显示哮喘模型组小鼠肺组织在支气管以及小血管周围发现大量的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等炎性细胞浸润;而川芎嗪治疗组和激素治疗组小鼠的肺组织切片中仅发现少量的炎性细胞。流式细胞仪检测显示哮喘组小鼠的Treg细胞较正常组小鼠比例明显降低,而Th17细胞占CD4＋T细胞显著升高;川芎嗪治疗组小鼠以及激素治疗组小鼠的变化趋势一致,Treg细胞和Th17细胞的比例趋于正常。 ELISA结果显示哮喘组小鼠的IL-17的水平显著高于正常组,IL-10的水平较正常组显著降低,川芎嗪治疗组小鼠的IL-17水平较哮喘模型组明显降低,而IL-10的水平显著升高,激素治疗组小鼠的变化趋势与川芎嗪治疗组一致。结论：在OVA诱导小鼠哮喘模型中,川芎嗪可以通过增强Treg细胞的功能,增加Treg细胞的数量,进而抑制Th17细胞的数量以及功能,减轻Th17细胞的应答,降低IL-17细胞因子的分泌,从而起到预防/控制哮喘发作的作用。     

Thl7淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化.结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关.     

Th17淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制。方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组。哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替。HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况。结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化。结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关。     

血红素加氧酶-1调节CD4~+T细胞亚群拮抗过敏性哮喘的实验研究

制备哮喘小鼠模型,干预血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达,探讨HO-1在过敏性气道炎症中抗炎及其对T辅助细胞(T helper,Th)1、Th2、Th17和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的调节作用。用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发BALB/c小鼠制备以嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)浸润为主的哮喘动物模型,并在致敏、激发中给予HO-1底物氯化高铁血红素(hemin)诱导HO-1高表达。经肺脏组织病理切片,血清OVA特异性IgE水平,肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)炎症细胞分类计数观察哮喘小鼠气道炎症程度;western blot和real-time PCR分别检测肺脏和脾脏组织HO-1基因表达和蛋白量,肺脏组织Th1、Th2、Th17及Treg分泌的细胞因子及特定转录因子基因表达;流式细胞术分析脾脏CD4+T细胞亚群。实验结果显示,OVA致敏、激发后(OVA组),小鼠肺脏和脾脏HO-1表达较正常组增高,血红素干预后(OVA+hemin组),HO-1蛋白表达则进一步升高;肺脏病理组织学显示OVA组见大量炎症细胞浸润,以EOS为主,伴BALF中细胞总数和EOS数及血清OVA特异性IgE增加,但经血红素干预后,上述现象明显减轻;OVA组肺组织中T-bet表达及IFN-γ水平降低;但GATA-3和RORγt表达及IL-4、IL-17A和IL-6水平较正常组显著增高,而血红素能逆转该结果;进一步显示OVA+hemin组Foxp3表达和IL-10及TGF-β水平较其余两组显著增高;脾脏CD4+T细胞亚群结果显示OVA组可见大量Th2,Th17略有增多,Th1和Treg则略降低,血红素干预明显下调Th2和Th17细胞比例,显著提升Treg细胞比例,而Th1则呈现升高趋势。结果表明,上调HO-1表达能显著拮抗EOS性气道炎症,该作用是通过调节Th17/Treg和Th1/Th2细胞平衡,促进TGF-β和IL-10分泌以抑制气道炎症。     

反复自然流产患者外周血Th17和Treg细胞相关细胞因子的测定

目的 通过检测反复自然流产(RSA)患者外周血Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达及IL-6、IL-17、TGF-β1的水平,探讨Th17和Treg细胞在RSA发病中的作用.方法 选取2011-12/2012-04郑州大学第三附属医院50例RSA患者为研究对象,同期选取50名健康早孕女性作为对照组.采用实时荧光定量PCR检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性;采用ELISA测定血清中IL-6、IL-17、TGF-β1的含量.结果 RSA组RORγt mRNA水平(25.358 ±9.236)显著高于正常对照组(10.611±5.792);Foxp3 mRNA水平(6.851±2.875)显著低于正常对照组(32.218±5.023).RSA患者RORγt和Foxp3 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.530,P=0.018).RSA组IL-6、TGF-β1含量分别为(82.7±23.2)、(269.3±29.6) pg/mL,明显低于正常对照组(210.4±40.6)、(497.8±54.6)pg/mL;IL-17含量(172.8±33.9) pg/mL明显高于正常对照组(53.4±10.8) pg/mL.结论 RORγtmRNA表达上调与Foxp3mRNA表达下调所致的Th17和Treg细胞免疫失衡可能是RSA的原因之一;IL-6、IL-17、TGF-β1含量变化的异常在RSA的发生发展中可能起一定作用.     

Th17/Treg在中性粒细胞哮喘发病中的作用及临床意义

目的:分析Th17/Treg在中性粒细胞哮喘发病中的作用及临床意义.方法:选择2021年3月至2022年3月于医院治疗的支气管中性粒细胞哮喘患者50例,记为观察组.另选择同期于本院进行体检的健康志愿者50例,记为对照组.检测支气管哮喘患者缓解期、急性期及对照组Th17细胞、Treg细胞及其相关细胞因子白细胞介素(IL)-22、IL-21、IL-17、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,并计算Th17/Treg.比较两组患者Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子水平.比较支气管哮喘患者缓解期、急性期Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子水平.评估观察组哮喘控制情况(ACQ),分析中性粒细胞哮喘患者ACQ评分与Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg的相关性.结果:观察组Th17细胞、Th17/Treg、IL-22、IL-21、IL-17水平显著高于对照组(P<0.05),观察组Treg细胞、IL-10、TGF-β1水平显著低于对照组(P<0.05).支气管哮喘患者急性期Th17细胞、Th17/Treg、IL-22、IL-21、IL-17水平显著高于缓解期(P<0.05),支气管哮喘患者急性期Treg细胞、IL-10、TGF-β1水平显著低于缓解期(P<0.05).支气管哮喘患者ACQ评分与Th17细胞、Th17/Treg呈正相关(P<0.05),与Treg细胞呈负相关(P<0.05).结论:在健康人群、中性粒细胞哮喘急性期及缓解期中Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子存在差异,可作为中性粒细胞哮喘诊断、病情判断指标,为临床诊疗提供参考.     

Th17淋巴细胞及相关细胞因子加重哮喘小鼠气道炎症

目的:研究Th17淋巴细胞及其相关的细胞因子在加重哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分率情况.将外周血各T淋巴细胞亚群与BALF的中性粒细胞数作相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P＜0.05),BALF上清中IL-4和IL-17的水平显著增高(P＜0.05),而IFN-γ的水平显著降低(P＜0.05),外周血Th2、Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著增高(P＜0.05),而Th1淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著降低(P＜0.05).相关性分析显示Th1淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著负相关(rThl=-0.446,P＜0.05),Th17淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著正相关(rTh17=0.394,P＜0.05).结论:Th17淋巴细胞可促进中性粒细胞及炎性介质在哮喘小鼠气道内的聚集,加重气道炎症.     

补肾益气方调控TGF-β1对反复自然流产患者外周血Treg/Th17细胞平衡的影响

为探讨补肾益气方通过调控TGF-β1对反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者外周血Treg和Th17细胞平衡的影响,选取了15例RSA患者,孕42d起诊断为正常宫内妊娠后服中药,在服药前以及服药一个月后以流式细胞术检测Treg和Th17细胞数量,ELISA方法检测外周血TGF-β1及IL-10、IL-17水平。结果显示,中药治疗后RSA患者外周血Treg数量上升至(5.94±1.37)%,明显高于服药前(3.45±0.93)%(P0.05)。Th17细胞数量下降至(1.12±0.32)%,低于治疗前(2.61±0.70)%。中药治疗后,Treg/Th17细胞比值上升,从1.43±0.66升高至5.64±1.84%(P0.05)。Treg相关细胞因子IL-10水平从(17.90±4.18)pg/ml上升至(28.80±7.18)pg/ml,Th17细胞相关细胞因子IL-17则从(45.83±4.15)pg/ml下降至(31.21±5.62)pg/ml,同时发现中药治疗后血TGF-β1水平从(192.73±13.97)pg/ml上升为(334.07±61.53)pg/ml(P0.05),TGF-β1/IL-17比值从4.23±0.43提高至11.20±3.56,IL-10/IL-17比值从0.39±0.09上升至0.94±0.28(P0.05),差异有统计学意义。以上结果表明补肾益气方能够调控Treg/Th17细胞平衡,改变母体细胞因子分泌状态,保护胎儿不被排斥,其机制可能与母体TGF-β1水平上调有关。     

苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490减轻中性粒细胞性哮喘模型小鼠气道炎症

目的观察苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对中性粒细胞性哮喘模型小鼠气道炎症的影响。方法无特定病原体(SPF)级C57BL雌性小鼠54只,按随机数字表法分成中性粒细胞性哮喘(NA)组、AG490处理的NA(NAAG)组和正常(NC)组,每组18只。NA、NAAG组小鼠于第0、6、13天经气道滴卵清蛋白(OVA)、脂多糖(LPS)致敏。NAAG组小鼠于实验第0天起经腹腔注射AG490每只500μg,3次/周,连续3周。于第21天连续2 d雾化吸入10 g/L OVA激发,每次1 h。最后1次雾化结束后24 h时,收集小鼠标本并检测相关指标。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并检测其有核细胞总数及分类比例;分离肺组织行HE染色及过碘酸希夫(PAS)染色,光镜下观察肺组织病理变化和杯状细胞增生;采用流式细胞术检测肺脏Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的频数;采用ELISA检测小鼠BALF中IL-17的水平。结果与NA组相比,NAAG组BALF有核细胞计数、中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比均明显降低,NAAG组肺组织病理学改变及杯状细胞增生较NA组明显减轻。与NA组相比,NAAG组BALF IL-17水平降低、肺组织Th17细胞比例减少、Treg比例增加。结论 NA小鼠致敏阶段给予AG490处理,可增加小鼠激发阶段肺组织Treg数量、减少Th17细胞数量,减轻NA小鼠气道炎症。     

副交感神经对支气管哮喘模型Th17型免疫反应的作用及其机制

为探讨副交感神经对卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导哮喘小鼠气道炎症和Th17型免疫反应的影响和可能机制,将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、GTS-21[α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor, α7nAChR)激动剂]干预组和α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin, α-BGT)(α7nAChR拮抗剂)干预组。除对照组外,其余各组采用OVA构建小鼠哮喘模型,每次激发前GTS-21干预组经静脉注射GTS-21, α-BGT干预组皮下注射α-BGT。ELISA检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中TGF-β1和IL-6的浓度;H-E染色观察肺组织病理学变化;RT-PCR检测肺组织中c-Rel和IL-17的mRNA表达水平;Western blotting检测肺组织中c-Rel、IL-17和RORγt蛋白的表达水平;FACS检测各组小鼠脾脏单细胞悬液中Th17占CD4⁺T细胞的百分比。结果显示,OVA刺激后肺组织中有大量炎症细胞的...     

哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平及其功能初步研究

目的:观察哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平和功能状态,初步探讨Th17在儿童哮喘发病中的作用.方法:以正常儿童(对照组,n=20)为对照,流式细胞术(FCM)检测哮喘急性发作期患儿(哮喘组,n=26)外周血Th17以及Th1,Th2细胞百分率,ELISA方法检测外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清IL-17,IFN-γ以及血浆IL-17,IL-23,IgE水平.结果:(1) 哮喘组和对照组外周血CD4+T中CD4+IL-17+T比例[(1.25±0.66)% vs (1.27±0.66)%(P>0.05)];CD4+IL-4+T比例[(2.40±2.55)% vs(2.52±1.26)%(P>0.05)];两组比较无统计学意义.哮喘组CD4+IFN-γ+T比例低于对照组[15.79±7.48 vs 24.10±12.70(P<0.05)].(2) PHA活化的PBMC体外培养72 h上清中,哮喘组IL-17水平为17.53(0～245.57)ng/L,低于对照组101.74(25.12～500.60)ng/L(P<0.01);IFN-γ水平与对照组比较无统计学意义[3507±2788 ng/L vs 3027±2737 ng/L];两组血浆中IL-17均<2 ng/L,IL-23均<15 ng/L.(3) 哮喘组血浆总IgE 499.26(2.3～945.1)IU/mL,高于对照组54.57(1.7～318.26)IU/mL(P<0.001);IgE阳性(>150 IU/mL)和阴性(<150 IU/mL)哮喘患儿体外PBMC培养上清中IL-17,IFN-γ水平比较无统计学意义.结论:哮喘急性发作期患儿外周血Th1细胞以及PHA活化的IL-17表达水平降低,Th1水平和Th17功能异常的机制及其在儿童哮喘发病中的作用值得进一步研究.     

IL-27对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白(OVA)激发哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1μgIL-27(溶于50μlPBS中)滴鼻给药,观察3组小鼠肺组织病理改变,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞;ELISA法测定小鼠BALF中IL-4和IFN-γ浓度,RT-PCR测定肺组织T-bet mRNA的表达量。结果 IL-27组小鼠肺组织炎症反应明显轻于哮喘组小鼠;IL-27组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞计数为(2.21±0.33)×107/L明显低于哮喘组的(12.82±2.17)×107/L(P0.01);IL-27组小鼠BALF中IL-4浓度为(20.4±3.2)μg/L,明显低于哮喘组的(61.3±13.1)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠BALF中IFN-γ浓度为(50.3±6.3)μg/L,明显高于哮喘组的(11.1±3.3)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠肺组织T-bet mRNA表达量(吸光度积分比值)为(0.268±0.048),明显高于哮喘组的(0.130±0.012)(P0.05)。结论 IL-27可能通过增强T-bet mRNA的表达增强Th1反应,减少BALF中嗜酸性粒细胞数量,进而减轻了哮喘小鼠肺组织炎症反应。     

气道应用T-bet重组腺病毒抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症

目的探讨气道应用T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对哮喘小鼠气道炎症反应的影响及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为4组,实验组(A组)、对照病毒组(B组)、PBS对照组(C组)和正常对照组(D组),A、B、C组采用卵蛋白(OVA)、明矾建立哮喘模型,分别于第19天激发前气道内单次应用50μLAdT-bet(108pfu)、AdLacZ、PBS。26d取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、IL-4、IL-5、IFNγ浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3表达。结果1)A组BALF中的嗜酸粒细胞(EOS)为(0.5±0.2)%明显低于B组(21.2±6.9)%和C组(20.9±6.8)%(P<0.01);2)A组BALF中的IL-4(6.7±3.8)pg/mL和IL-5(12.4±4.9)pg/mL的水平明显低于B组[IL-4(91.4±22.5)pg/mL和IL-5(55.6±10.6)pg/mL]和C组[IL-4(89.8±23.6)pg/mL和IL-5(56.7±11.5)pg/mL](P<0.01),而IFNγ的水平(710±45)pg/mL则明显高于B组(13.1±3.5...     

地塞米松对呼吸道合胞病毒感染哮喘加重小鼠气道TSLP分泌及炎症的影响

目的:探讨地塞米松(DEX)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌及气道炎症的影响。方法:雌性BALB/c小鼠32只,随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/DEX组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘,地塞米松1mg/kg肌肉注射;无创肺功能检测各组小鼠气道反应性;ELISA法检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFNγ-和气管灌洗液(BALF)TSLP含量;小鼠肺组织病理观察炎症反应,免疫组化观察小鼠气道上皮细胞TSLP表达水平。结果:无创肺功能检测显示地塞米松抑制RSV感染哮喘加重小鼠气道反应性的增高,OVA/RSV/DEX组小鼠Penh值明显低于OVA/RSV组(P<0.01);OVA/RSV/DEX组小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFNγ-浓度[分别为(86.78±27.04)、(227.66±40.87)、(194.65±73.27)和(17.33±3.06)pg/ml]和BALF中TSLP浓度[(1 873±10)pg/ml],均明显低于OVA/RSV组[分别为(274.2±103.7)、(293.3±46.1)、(330±93.5)、(30.1±5.7)、(2 127±46)pg/ml](P<0.01);病理观察显示地塞米松显著减轻RSV感染哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实地塞米松抑制RSV感染哮喘小鼠气道上皮细胞TSLP表达。结论:地塞米松可以抑制RSV感染哮喘加重小鼠气道上皮细胞表达TSLP,减轻RSV感染哮喘加重小鼠气道炎症反应。     

支气管哮喘患者外周血Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞表达特征

目的:探讨外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在支气管哮喘患者中的表达特征。方法:41例慢性持续期哮喘患者,分为间歇-轻度组(n=23)和中重度组(n=18),行肺功能检查和哮喘控制问卷(ACQ)调查,20例正常人作为对照。通过流式细胞术检测外周血Th17和CD4+CD25+Treg细胞的比例。ELISA检测血浆以及植物血凝素刺激24小时后外周血单个核细胞(PBMC)上清液中的IL-17、IL-10、TGF-β水平。结果:中重度哮喘组外周血Th17细胞比例及血浆IL-17水平高于间歇-轻度哮喘和正常人组,而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆IL-10、TGF-β水平则降低。中重度哮喘组PBMC上清液中IL-17水平增高。哮喘患者FEV1(%预计值)与Th17细胞及血浆IL-17表达成负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。ACQ平均得分与Th17细胞和血浆IL-17表达成正相关,与外周血CD4+CD25+Treg表达成负相关。结论:中重度哮喘中外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,哮喘的严重程度及症状控制与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

OX40L 对儿童哮喘和哮喘小鼠模型辅助性T 细胞分化的影响

目的:探讨OX40L对哮喘细胞免疫过程中辅助性T细胞分化的影响。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测哮喘患者和健康受试者血清OX40L、IL-4、IL-17、IFN-γ和TGF-β的浓度。~3H-TdR渗入法测定T细胞的增殖。流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17和Treg细胞数量。Western blot检测蛋白质表达和磷酸化。苏木精和伊红(HE)染色评价肺组织病理改变。结果:与稳定期哮喘患者或健康对照受试者相比,急性期哮喘患者的OX40L、IL-4和IL-17水平明显增加,而IFN-γ和TGF-β水平明显降低。用OX40L-Ig融合蛋白处理时,CD4~+T细胞的增殖进一步增加。OVA诱导的CD4~+T细胞中Akt的磷酸化水平升高,而OX40L-Ig融合蛋白处理的细胞中Akt的磷酸化水平进一步升高。PI3K/Akt抑制剂LY294002处理明显降低了OVA诱导的CD4~+T细胞的增殖。LY294002处理后,OVA诱导的CD4~+T细胞中IL-4、IL-17以及Th2和Th17细胞的数量明显减少。相反,LY294002显著升高了IFN-γ和TGF-β的表达以及Th1和Treg细胞的数量。用抗小鼠OX40L单抗处理时,与OX40L-Ig融合蛋白处理组相比,IL-4和IL-17水平以及Th2和Th17细胞的数量显著减少,而IFN-γ和TGF-β水平以及Th1和Treg的数量明显增加。HE染色显示,用抗小鼠OX40L单抗处理可抑制哮喘小鼠肺组织病变。结论:OX40L通过PI3K/Akt信号通路诱导了Th2和Th17细胞的分化,用抗小鼠OX40L单抗阻断OX40L可以诱导哮喘中的Th1和Treg细胞分化。     

抗CD86单克隆抗体对哮喘小鼠TH1/TH2细胞因子的影响

目的观察抗CD86单克隆抗体对卵蛋白干粉(OVA)致敏并刺激小鼠TH1和TH2细胞因子比例的变化,为防治哮喘提供实验依据.方法经OVA致敏的雌性Balb/c于激发前腹腔注射抗CD86单克隆抗体及同型对照IgG2α 50 μg,末次激发48 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和干扰素-γ(INF-γ)水平.结果以OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平升高[分别为(64.23±3.91)pg/mL、(379.84±73.02)pg/mL],与PBS对照组[分别为(22±2)pg/mL、(245.75±50.01)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05);OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中INF-γ水平降低[(98.73±16.41)pg/mL],与PBS对照组[(218.35±48.63)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05).抗CD86单克隆抗体组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平降低[分别为(35.78±4.88)pg/mL、(222.98±58.68)pg/mL],而INF-γ水平升高[(206.92±47.8)pg/mL],与哮喘对照组及同型对照IgG2α组(98.73±16.41)pg/mL、(102.32±15.49)pg/mL比较差异有显著性(P＜0.05).结论抗CD86单克隆抗体通过阻断共刺激信号,纠正TH1/TH2失衡,从而达到抗气道炎症的作用.