褐藻多糖硫酸酯与明胶形成复合材料的抗凝血活性

目的:选用生物相容性好的明胶作为褐藻多糖硫酸酯的固定载体,制备褐藻多糖硫酸酯与明胶的复合材料,采用体外凝血试验评估其抗凝血性能。方法:实验于2003-12/2006-12在北京理工大学材料中心实验室、中国科学院北京化学研究所光谱实验室完成。①实验材料:褐藻多糖硫酸酯从市售海带中采用溶剂萃取法制备,纯度可达40%。实验血浆由北京北太平庄血站提供。②将质量浓度分别为100,200,300mg/L的褐藻多糖硫酸酯0.1mL滴加到盛有0.1mL明胶的醋酸溶液(w=0.01)比色杯中,反应完全后,采用0.05%戊二醛固定,干燥成膜后用PBS缓冲溶液冲洗,然后真空干燥72h得到3种不同复合材料。采用EQINOX55型红外光谱仪(美国NICOLET公司)进行结构表征。③采用体外抗凝血时间实验评价复合材料的抗凝血性,包括部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间测定。结果:①复合材料的红外光谱图在877cm-1出现新吸收峰。②实验血浆样品的部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间分别为46.1s,14.0s,12.2s,在正常人血浆的部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间范围内。200mg/L复合材料能显著延长部分凝血活酶时间和凝血酶原时间(P<0.05),300mg/L复合材料能显著延长凝血酶时间(P<0.05)。结论:褐藻多糖硫酸酯-明胶复合材料具有较好的抗凝血活性。     

新型无机微粒栓塞材料BaFe12O19的血液相容性实验

目的:评价BaFe12O19微粒作为一种新开发的具有潜在应用前景的新型血管内栓塞材料的血液相容性,并观察其对机体的出血时间、凝血时间及凝血酶原时间、纤维蛋白原测定、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间的影响。方法:BaFe12O19微粒材料于2005-07/2006-05在武汉理工大学生物材料与工程研究中心实验室完成,血液相容性实验于2006-05/09在解放军广州军区武汉总医院中心实验室完成。①溶血实验:取人新鲜全血,分别加入生理盐水(阴性对照组)、蒸馏水(阳性对照组)、无机微粒浸提液(实验组),观察溶血情况,计算溶血率。②出血、凝血时间测定:健康NIH小鼠随机分为实验组和对照组,分别腹腔注射无机微粒混悬液或生理盐水1 mL,7 d后测定出血、凝血时间。③凝血功能实验:取健康Wistar大鼠静脉血,随机分为实验组及对照组,分别注入1 g/L微粒混悬液或生理盐水1 mL,30 min后测量凝血功能。结果:①溶血实验结果:实验组和阴性对照组均无溶血现象,阳性对照组全部溶血,实验组的溶血率为2.08%,符合ISO规定的不大于5%的标准。②出血、凝血时间测定结果:实验组和对照组小鼠的出血、凝血时间比较差异无显著性意义(P>0.05)。③凝血功能实验结果:实验组和对照组凝血酶原时间、纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间比较均无显著差别(P>0.05)。结论:BaFe12O19微粒符合血液相容性标准,具有良好的血液相容性能。     

孕妇血浆和羊水凝血、抗凝血及纤维蛋白溶解状态研究

目的探讨孕妇血浆和羊水中凝血、抗凝血及纤溶状态。方法采用磁珠法检测孕妇第一产程末血浆和羊水中活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间、纤维蛋白原、抗凝血酶Ⅲ活性、蛋白C活性、蛋白S活性、凝血酶时间、D-二聚体和血管性血友病因子的水平。结果孕妇血浆纤维蛋白原、蛋白C活性、D-二聚体、血管性血友病因子显著高于健康对照组(P0.01)。羊水中活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间和凝血酶时间超出了试剂盒的检测上限,未检测到蛋白S活性,纤维蛋白原、抗凝血酶Ⅲ活性、蛋白C活性、D-二聚体和血管性血友病因子的水平分别为(0.27±0.46)g/L、(2.07±1.22)、(1.80±1.52)、(0.22±0.05)μg/mL和(0.32±0.09)。结论孕妇是发生深静脉血栓的高危人群,孕妇血浆和羊水中凝血、抗凝血及纤溶活性成分的变化可作为孕妇和胎儿健康状况的监测指标。     

壳聚糖/肝素和壳聚糖/重组水蛭素共价包被镍钛合金片的体外生物相容性

目的:体外评价生物活性分子共价包被镍钛金属片后的生物相容性。方法:实验于2005-11/2006-10在南京医科大学心血管药理实验室完成。实验材料:镍钛合金片(镍含量55.3%～55.6%,钛含量43.5%～44.2%,厚度0.05cm,激光切割为0.5cm×0.5cm);壳聚糖(脱乙酰度90%,Mr200000);肝素、重组水蛭素。实验分组:①实验分4组:未包被组、壳聚糖组、壳聚糖/肝素组、壳聚糖/重组水蛭素组。将壳聚糖、肝素(1g/L)和重组水蛭素(20mg/L)用共价化学交联法包被于镍钛金属片单面。②溶血实验:将各组样品加0.2mL稀释血液和10mL生理盐水。阳性对照和阴性对照分别用10mL蒸馏水和10mL生理盐水各加0.2mL稀释血,与样品同样操作。③人全血动态接触实验:各组镍钛合金片分别放入10mL新鲜的人全血后行扫描电镜检查,并检测血常规(红细胞计数、白细胞计数、血小板计数)及凝血3项(部分凝血活酶活化时间、凝血酶原时间、凝血酶时间)。④内皮细胞种植、培养:人脐静脉内皮细胞培养、传代后,植入每孔已放入1片镍钛金属片的24孔板中,倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞生长情况及细胞形态。⑤免疫荧光标记:Fn免疫荧光染色(红色激发波长510nm)观察细胞生长和黏附情况,Ki67免疫荧光标记(绿色激发波长510nm)观察细胞增殖情况。实验评估:①各组血液样本溶血率。②各组人全血接触实验后血液样本血细胞计数和凝血活性。③扫描电镜下各组人全血接触实验后镍钛金属片表面形态。④倒置显微镜下人脐静脉内皮细胞形态。⑤荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞生长、黏附情况。⑥荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞增殖情况。结果:①溶血率:各组镍钛金属片溶血率均小于1.7%。②血细胞计数和凝血活性:各组接触血液后红细胞、白细胞和血小板计数与未接触血液无差别;壳聚糖/重组水蛭素组与壳聚糖/肝素组部分凝血活酶活化时间、凝血酶原时间和凝血酶时间值较未包被组和壳聚糖组明显延长,差异有显著性意义(P<0.001);壳聚糖/重组水蛭素组部分凝血活酶活化时间和凝血酶时间值较壳聚糖/肝素组延长,差异有显著性意义(P<0.005)。③扫描电镜下各组人全血接触实验后镍钛金属片表面形态:镍钛合金片表面有纤维蛋白黏附、血小板黏附和聚集,顺序依次为壳聚糖组>未包被组>壳聚糖/肝素组>壳聚糖/重组水蛭素组。④倒置显微镜下人脐静脉内皮细胞形态:与人脐静脉内皮细胞72h孵育,见各组镍钛金属片边缘细胞生长、移行良好,无细胞变形。⑤荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞生长、黏附情况:利用Fn免疫荧光标记人脐静脉内皮细胞,镍钛金属片表面的人脐静脉内皮细胞黏附和生长顺序如下:壳聚糖组>未包被组>壳聚糖/重组水蛭素组>壳聚糖/肝素组。⑥荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞增殖情况:利用Ki67免疫荧光标记人脐静脉内皮细胞,镍钛金属片表面的人脐静脉内皮细胞增殖顺序如下:壳聚糖组=未包被组>壳聚糖/重组水蛭素组>壳聚糖/肝素组。结论:壳聚糖/肝素与壳聚糖/重组水蛭素包被镍钛金属后具有良好抗凝血活性,但壳聚糖/重组水蛭素与壳聚糖/肝素相比更有利于人脐静脉内皮细胞的生长。     

聚氨酯与丝素粉体共混膜的血液吸附性

背景:为了改善医用聚氨酯的亲水性和血液相容性,利用共混的方法制备聚氨酯,丝素粉体共混膜,但是粉体的加入会显著提高共混膜的吸水性,因此会影响体外血液相容的表征.目的:观察丝素粉体的加入对聚氨酯,丝素粉体共混膜亲水性和血液吸附性能的影响.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-08/10在武汉科技学院新型纺织材料绿色加工及其功能化教育部重点实验室和医院实验室完成.材料:蚕丝纤维由浙江桐乡市思源纺织有限公司提供,医用聚氨酯由DOW Chemical公司提供.方法:将蚕丝纤维在质量浓度为10g/L,浴比为1:20的Na2C03溶液中煮沸3 h,洗涤晾干后利用自制磨盘磨制成乳白色粉体而得到非水溶性丝素粉体.将丝素粉体加入到聚氨酯溶液中利用液体交换的方法制备了不同丝素粉体含量(0%,10%,30%,50%,70%)的聚氨酯与丝素粉体共混膜.主要观察指标;扫描电子显微镜观察共混膜表面形貌.计算单位体积共混膜上吸附血液红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板的数量.结果:当丝素粉体含量在50%以下时,丝素粉体被包含在聚氨酯大分子中间.当丝素粉体含量在70%时,丝素粉体均匀分布在共混膜表面.随着丝素粉体含量的增加,共混膜吸附血液各组分数量增加.随着时间的延长,共混膜吸附血液的量增加,直到达到动态平衡.在吸附动态平衡过程中,血小板的吸附量下降,主要归功于丝素粉体对其他细胞吸附能力要强于血小板.结论:丝素粉体加入可以明显改善材料的亲水性,并且随着丝素粉体含量的增加,共混膜对血液的吸附能力增强.     

低温等离子体肝素化改性后小肠黏膜下层的血液相容性及其构建小口径血管的可行性

背景:栓塞是小口径血管植入后失败的主要原因,目前常常对血管支架材料进行抗凝改性,以期提高其血液相容性,从而提高血管的有效通畅性.目的:观察低温等离子体肝素化改性后的内植物修复材料小肠黏膜下层的血液相容性,并探讨其体内构建小口径血管的可行性.设计:单一样本实验.单位:上海交通大学附属第六人民医院骨科、上海市四肢显微外科研究所.材料:实验于2006-01/10在上海市四肢显微外科研究所实验室进行.小肠黏膜下层来自农场猪.方法:①改性:将猪小肠黏膜下层用氩等离子体处理器照射处理,氩气流量20mL/min,照射时间分别为0,2,4,6,8,10,12,14 s,接着浸入肝素钠溶液24 h.②体内抗凝血实验:将20条狗分为2组,分别植入经过改性或未改性的小肠黏膜下层缝合成的3 mm口径血管支架,与股动脉直接吻合,观察6周.主要观察指标:①血液相容性检测:通过扫描电镜观测表面形态,并通过液滴接触角、凝血时间及血小板黏附实验检测小肠黏膜下层改性前后的抗凝性.②体内抗凝血:通过彩色多普勒和组织学检测,评价血管支架直接在体内循环血流下的长期通畅性和形成血管的可行性.结果:①改性小肠黏膜下层膜表面呈现出均匀的微结构改变,随着等离子体照射时间增加,表面液滴接触角降低;改性后凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间延长:血小板黏附减少.②植入体内后未改性小肠黏膜下层血管支架3 d内栓塞,改性组在6周内仍保持通畅,管腔内表面有完整内皮细胞覆盖.结论:经低温等离子体肝素化改性后小肠黏膜下层的亲水性、抗凝性有明显提高.     

婴儿自发性脑出血误诊探析

1病例资料女,50天。因精神差、活动及哭泣减少、吸吮无力、呕吐2天入院。为足月顺产,出生体重3 100 g,阿氏评分正常,从出生到入院前2天无外伤史,亦未见明显异常。在当地医院行头颅CT扫描示右颞叶肿瘤伴出血,予甘露醇脱水治疗后转入我院。查体:头围36·6 cm,体重3 400 g。嗜睡,前囟饱满,活动及哭泣少,吸吮无力,左侧肢体肌力下降。查血小板249×109/L,凝血酶原时间11.7 s,国际标准化比值0.89,活化部分凝血活酶时间37.5s,活化部分凝血活酶时间比率1.02,凝血酶时间16.1s,凝血酶时间比率1.01,纤维蛋白原3.24 g/L。复查CT示右颞叶有直径约5.0 c…     

初诊急性白血病的弥散性血管内凝血

在初诊为急性白血病(AL)化疗之前,排除感染、肝病及其它已知原因的弥散性血管内凝血(DIC),对104例各种类型AL的DIC发生率进行检测。采用Ribero和Goldberg等DIC诊断标准:①血浆纤维蛋白原(FIB)<150mg/dl;②血清纤维蛋白原/纤维蛋白裂解产物>10μg/ml;③凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)比对照值延长≥3秒,活化的部分凝血活酶时     

脾血管肉瘤1例

1 病历摘要 女,61岁.因左上腹疼痛半个月入院.化验检查异常项目:WBC增高(17.4×10(9)/L),HGB降低(80 g/L),活化凝血活酶时间延长(52.1 s),纤维蛋白原增高(6.87 g/L),活化部分凝血活酶时间比率增高1.58.彩超示:左上腹实性包块.     

丝素蛋白作为抗凝血材料的研究与进展

目的:总结丝素蛋白制备抗凝血材料的改性方法,分析改性材料的抗凝血机制和抗凝血性能。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2006-12关于丝素蛋白作为抗凝血材料的文章。检索词“silk fibroin,anticoagulant activity”并限定文章的语言种类为“English”。同时利用计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2007-01的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“丝素蛋白,抗凝血性”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:关于丝素作为抗凝血材料的改性方法、抗凝血机制和抗凝血性能。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集到符合上述要求的文献35篇,排除8篇重复性研究。27篇符合纳入标准:其中22篇关于丝素蛋白抗凝血材料的研究,5篇关于丝素作为生物材料的综述。资料综合:丝素蛋白作为抗凝血材料的研究主要集中在用s-羧甲基还原角蛋白、肝素、硫酸、二氧化硫和vWf因子的抗体等对丝素蛋白的改性,改性方法可归纳为两类:接枝和共混。通过对丝素蛋白材料进行修饰改性,可以提高其抗凝血性。结论:通过接枝和共混制备的丝素蛋白材料,具有较好的抗凝血性,在抗凝血生物材料领域将具有很大的应用潜力。