维拉帕米对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成的影响

目的 探讨钙通道阻滞剂维拉帕米治疗增生瘢痕的作用机理及进一步应用于临床的可能性。方法 采用组织块法进行增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）的体外培养;MTT比色法检测维拉帕米对HSFB生长增殖的 影响;^3H－脯氨酸掺入法及羟脯氨酸比色法测定维拉帕米对细胞胶原合成的影响;Northern Blot检测维拉帕米对HSFBⅠ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响。结果 维拉帕米对HSFB的增殖、胶原合成及Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达均呈剂量依赖性抑制,以100μmol/L浓度组作用最为显著。结论 维拉帕米可以通过减少Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达等途径抑制瘢痕增生。     

培养的正常和瘢痕角质形成细胞上清液对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 研究培养的正常角质形成细胞、瘢痕角质形成的细胞的上清液对增生性瘢痕成纤维细胞生物活性和胶原合成的影响。方法 采用MTT、^3H-脯氨酸掺入法、Ⅲ型前胶原放免试剂盒测定不同来源、不同浓茺培养的角度形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤细胞增殖和胶原合成的影响。结果 正常角质形成细胞上清液，可抑制瘢痕成纤维细胞增殖，对细胞内胶原合成有一定的促进作用，但却抑制细胞内胶原向细胞外分泌。瘢痕角质形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用不明显，甚至还有促进的趋势，对细胞内外胶原合成、分泌皆有明显的促进作用。结论 正常角质形成细胞与瘢痕角质形成细胞分泌的物质对瘢痕成纤维细胞具有不同作用。     

Dynamic changes of autophagy during hypertrophic scar formation and the role of autophagy intervention

BackgroundThe role of autophagy in the formation of hypertrophic scars (HS) remains unclear. This study aimed to explore the role and potential mechanism of autophagy during the development of HS.MethodsRNA and protein expression levels of Beclin-1, p62, and LC3II in normal skin tissues and HS specimens from different patients were examined. Autophagy inducers and inhibitors were used to cure established HS in rabbit ears, and the expression of Beclin-1, p62, and LC3II at the RNA and protein level was determined. Lastly, the effects of autophagy inducers and inhibitors on HS development were analyzed.ResultsCompared to normal skin tissues, the expression of LC3Ⅱ and Beclin-1 was higher (P<0.05), while that of p62 was lower (P<0.05) in HS tissues. In addition, the LC3II/LC3I ratio was increased during HS formation, and the altered expression of the three proteins stabilized after one year. Administration of autophagy inducers enhanced the formation of HS as well as the expression levels of LC3II and Beclin-1 but decreased p62 expression. Meanwhile, administration of autophagy inhibitors increased the expression of LC3II, Beclin-1, and p62, along with reduced HS formation.ConclusionAutophagic activity increased during HS initiation and subsequent stabilization. In addition, autophagy inhibitors were able to inhibit HS formation by suppressing autophagy, whereas autophagy inducers promoted scar hyperplasia by enhancing autophagy.     

Genistein inhibits proliferation and functions of hypertrophic scar fibroblasts

Hypertrophic scarring is abnormal proliferation of dermal fibroblasts and excessive deposition of extracellular matrix. To date, despite many studies, treatments have not been satisfactory. Genistein, a potent, specific inhibitor of tyrosine protein kinases (TPKs), has been proved to inhibit many kinds of tumour and some fibrotic diseases. The purpose of this study was to investigate the effects of genistein on the proliferation and functions of hypertrophic scar fibroblasts (HSFBs) and the mechanism by which genistein inhibits TPK signal transduction. The first effect was observed by methyl-thiazol-diphenyl-tetrazolium assay and the second by [gamma-(32)p] adenosine triphosphate incorporation assay. The results demonstrated that genistein inhibits the proliferation and function of HSFBs and changes the TPK signal transduction pathway, which can provide an experimental basis for treating HS with genistein.     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

增生性瘢痕成纤维细胞中分泌型凋亡相关蛋白1相互作用蛋白的研究

目的 寻找与分泌型凋亡相关蛋白1 （secreted apoptosis-related protein1,SARP1）存在相互作用的蛋白质分子,分析其分子机制.方法 成功构建的重组SARP1腺病毒载体Ad-SARP1,转染进入原代培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）.免疫共沉淀法沉淀出蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后,用考马斯亮蓝染色,对SDS-PAGE胶上切取的电泳蛋白条带进行酶解与质谱分析,根据质谱分析获得的肽序列谱图自动进行数据库搜索.结果 在阳细胞对照组和导入Ad-SARP1感染的细胞当中,均共沉淀出7条蛋白带,相对分子质量分别约为93×103、43×103、40×103、37×103、31×103、26×103和12×103;在未加SARP1抗体组则没有沉淀出蛋白条带.分析蛋白条带得到6个可能与SARP1有相互作用的蛋白,分别为骨膜蛋白前体（periostin precursor或OSF-2）、牙周韧带相关蛋白1（asporin precursor或PLAP1）、磷酸甘油激酶1（phosphoglycerate kinase 1）、未知蛋白rCG50690、载脂蛋白（apolipoprotein A-I,Apo-AI）、硫氧还蛋白1（thioredoxin 1,TRX1）.结论 通过免疫共沉淀法结合液相色谱/质谱联用离子阱检测技术,可以获得SARP1的相互作用蛋白,为研究SARP1调控HSFb凋亡信号通路的作用机制提供了新的线索.     

体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成及结缔组织生长因子的表达

目的　探讨结缔组织生长因子在人增生性瘢痕发病机制中的作用。方法　体外培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞 ,通过H3 脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成 ,通过免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应检测细胞结缔组织生长因子蛋白质和mRNA的表达。结果　和正常皮肤成纤维细胞相比 ,增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成和结缔组织生长因子蛋白质及mRNA的表达均显著增高 (P <0 0 1)。结论　结缔组织生长因子可能在增生性瘢痕纤维化过程中发挥重要促进作用。     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构,阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术,从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同,细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点,认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型,可用于瘢痕防治的研究。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成（P〈0.05）,且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义（P〈0.01）;三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调（P〈0.05）。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的观察钙网蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法采用免疫细胞化学染色和原位 ELISA 技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行 CRT 分布定位及表达水平研究。结果瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均有不同程度的 CRT 表达,其中瘢痕成纤维细胞表达 CRT 水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明显高于正常皮肤成纤维细胞水平(A:1.43±0.12),差异有非常显著意义(P<0.01);而在已融合的瘢痕和正常皮肤成纤维细胞内则均无 CRT 表达。结论瘢痕成纤维细胞内 CRT 的丰富表达对促进细胞迁移、信号传递及钙存储等方面均有着积极作用。     

水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响

目的 探讨水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响,为临床应用水蛭素治疗增生性瘢痕提供理论基础.方法 用消化法进行人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的体外培养,用流式细胞仪检测不同浓度水蛭素对不同来源的成纤维细胞细胞周期的影响,用Western印迹法检测部分与细胞周期相关的蛋白（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27及细胞周期蛋白E（cyclin-E）的表达.结果 随着水蛭素浓度的增加,人体正常皮肤及增生性瘢痕组织成纤维细胞G1期细胞增加而S期细胞则减少,周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27的表达上调,细胞周期蛋白E的表达下调.结论 水蛭素通过影响细胞周期调控蛋白的表达,使正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的周期分布发生改变,导致细胞周期G1期阻滞（G1 phase arrest）,从而抑制成纤维细胞增生,因此水蛭素对于瘢痕的防治有一定的作用.     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构，阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术，从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同，细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点，认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型，可用于瘢痕防治的研究。     

内毒素对人正常皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的：研究细菌内毒素（LPS）刺激后的正常皮肤成纤维细胞的表型改变,探讨其与增生性瘢痕形成的关系.方法：体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度LPS（0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000 μg/ml）刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原（PCNA）、α1（Ⅰ）前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照.结果：瘢痕组织成纤维细胞光镜下核浆比例大;免疫组织化学染色显示PCNA、α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞比例分别为0.88±0.15、0.42±0.11和0.38±0.13;电镜下显示细胞形态多样化,核膜不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体多,伴微丝、微管及肌微丝出现.正常皮肤成纤维细胞PCNA阳性细胞比例为0.37±0.09,未见α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达.正常皮肤成纤维细胞经LPS刺激后,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组织化学染色显示PCNA、α1（I）前胶原蛋白阳性细胞和α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态发生多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现.上述变化在LPS 0.1ug/ml时最明显[PCNA、α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞比例分别为：0.91±0.15、0.40±0.15和0.44±0.13],接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成型或收缩表型变化.此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞.结论：LPS刺激后皮成纤维细胞表型变化规律,提示LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

成纤维细胞生长因子结合蛋白在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕中微血管形成的作用

目的探讨成纤维细胞生长因子结合蛋白（FGF—BP）mRNA在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕组织中的表达及其与微血管形成之间的关系。方法设计地高辛标记的FGF-BP寡核苷酸探针，对10例烧伤后肉芽组织，33例增生性瘢痕和9例正常皮肤进行原位杂交实验，检测各组织中FGF-BPmRNA的表达差异；采用免疫组织化学方法检测各组织中微血管数目差异。结果烧伤后肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）FGF-BPmRNA表达明显升高，FGF-BPmRNA在增生性瘢痕6个月后逐渐下降至正常水平。肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）微血管数目明显高于其他各组。FGF-BPmRNA表达与微血管数目成正相关（Spearman R=0．463，P〈0．01）。结论FGF．BP可能是影响烧伤后创面愈合和早期瘢痕增生过程中微血管形成的重要因子。     

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素对增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达的影响。方法培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞，然后分别按终浓度为1、5、10mg／L加入汉防己甲素，继续培养24h，提取细胞内的RNA，经RT—PCR获得cDNA，再用MMP-1的特异性引物，通过PCR扩增，得到MMP-1的mRNA，并以β—actin为内参照物，进行琼脂糖凝胶电泳，最后用Band—scan扫描系统测定各产物密度值，用凝胶自动成像仪拍照。结果在汉防己甲素的作用下，成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达增加。结论汉防己甲素可使增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1的mRNA转录增加。从而增加了MMP-1的合成，因而可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用。     

胶原酶对裸鼠移植肥厚性瘢痕的治疗作用

目的观察胶原酶对肥厚性瘢痕(HTS)胶原降解的影响,探讨它对 HTS 的治疗作用。方法建立 HTS 裸鼠移植模型,局部注射胶原酶于瘢痕组织。治疗后取材行光、电镜观察和分析。结果 HTS 组织胶原纤维被降解,真皮层变薄,瘢痕缩小,质地变软,与对照组差异十分明显。结论胶原酶的局部注射可能是治疗 HTS 的较好方法。     

高压氧对兔耳增生性瘢痕形成的影响

目的：探讨高压氧（Hyperbaric oxygenation,HBO）对兔耳增生性瘢痕形成及对血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）表达的影响。方法：选取20只新西兰大白兔建立兔耳瘢痕模型,每耳6个创面,随机分成实验组和对照组2组,每组10只,共120个创面,实验组术后立即给予HBO处理,对照组处于常压环境中。术后第29天切取瘢痕组织,测量瘢痕增生指数（hypertrophic index,HI）,并用HE染色观察瘢痕形态学变化,免疫组织化学方法检测TGFβ1及VEGF的表达。结果：实验组HI值明显低于对照组（P〈0．01）;HE染色结果示实验组成纤维细胞数目较对照组明显减少（P〈0．01）;免疫组织化学检测结果示实验组VEGF、TGFβ1的表达量较对照组显著降低（P〈0．01）。结论：HBO可降低VEGF、TGFβ1的表达,对兔耳增生性瘢痕有明显抑制作用。     

Potential cellular and molecular causes of hypertrophic scar formation

A scar is an expected result of wound healing. However, in some individuals, and particularly in burn victims, the wound healing processes may lead to a fibrotic hypertrophic scar, which is raised, red, inflexible and responsible for serious functional and cosmetic problems. It seems that a wide array of subsequent processes are involved in hypertrophic scar formation, like an affected haemostasis, exaggerated inflammation, prolonged reepithelialization, overabundant extracellular matrix production, augmented neovascularization, atypical extracellular matrix remodeling and reduced apoptosis. Platelets, macrophages, T-lymphocytes, mast cells, Langerhans cells and keratinocytes are directly and indirectly involved in the activation of fibroblasts, which in turn produce excess extracellular matrix. Following the chronology of normal wound healing, we unravel, clarify and reorganize the complex molecular and cellular key processes that may be responsible for hypertrophic scars. It remains unclear whether these processes are a cause or a consequence of unusual scar tissue formation, but raising evidence exists that immunological responses early following wounding play an important role. Therefore, when developing preventive treatment modalities, one should aim to put the early affected wound healing processes back on track as quickly as possible.