沙鼠肝泡球蚴组织中骨桥蛋白与IL-10的表达及相关性研究

目的 检测沙鼠肝泡状棘球蚴组织中骨桥蛋白（OPN）及白细胞介素-10（IL-10）的表达,并进一步探讨两者的相关性。方法 20%泡状棘球蚴组织混悬液开腹直视下肝脏穿刺注射感染长爪沙鼠60只,每只0.1mL,建立肝泡状棘球蚴长爪沙鼠模型。随机分为模型组（无干预,40只）和实验组（抗OPN抗体干预,20只）。感染至100 d时剖杀所有长爪沙鼠,观察泡状棘球蚴生长和转移情况,取长爪沙鼠肝泡状棘球蚴组织和转移灶标本。采用免疫组织化学SP法观察沙鼠肝泡状棘球蚴组织和转移灶中OPN及IL-10的表达情况。 结果 60只长爪沙鼠全部感染肝泡状棘球蚴。免疫组化染色显示肝泡状棘球蚴组织可见OPN及IL-10不同程度的表达。模型组中OPN和IL-10阳性细胞表达率分别为72.5%（29/40）和65%（26/40）,OPN及IL-10主要分布在肝泡状棘球蚴纤维囊壁,阳性产物均定位于细胞浆。65%（26/40）的长爪沙鼠模型经病理证实发生胸廓内淋巴结转移,伴有胸廓淋巴结转移的肝泡状棘球蚴组织中OPN及IL-10阳性细胞表达率分别为84.6% (22/26)、76.9%(20/26),均高于未发生胸廓淋巴结转移的肝泡状棘球蚴组织（50%、42.9%）（P﹤0.05）。实验组OPN和IL-10的阳性细胞表达率分别为40%（8/20）和35%(7/20)。OPN与IL-10表达呈正相关（r=0.605,P=0.000）。结论 OPN阳性表达可能与肝泡状棘球蚴的转移有关,OPN与IL-10可能在肝泡状棘球蚴的生长中起协同作用。     

抗骨桥蛋白抗体抑制肝泡型棘球蚴侵袭性生长和转移

目的外源性给予抗骨桥蛋白(osteopontin,OPN)抗体,观察其对肝泡型棘球蚴生长和转移的抑制作用。方法采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡型棘球蚴组织混悬液的方法(0.1 ml/只,约含原头节400个),建立肝泡型棘球蚴沙鼠模型180只,随机分为3组。实验组和对照组于接种后当天经尾静脉分别注射0.15 ml抗OPN抗体(效价1∶32)和沙鼠注射用的兔血清,共注射17次,前7次每次间隔2 d,后10次每次间隔1周。模型组未作处理。上述3组沙鼠分别于感染后1、20、40、60、80和100 d随机各处死10只沙鼠,观察泡型棘球蚴的生长和转移情况,采用免疫组织化学SP法观察各组沙鼠肝泡型棘球蚴组织中OPN的表达情况。于感染后100 d乙醚轻度麻醉沙鼠后,摘眼球取血,分离血清,用ELISA测定沙鼠血清中OPN的含量。结果感染后1、20、40、60和80 d,实验组与对照组和模型组囊湿重、胸腔淋巴结转移率间的差异均无统计学意义(P>0.05)。感染后100 d,实验组囊湿重、胸腔淋巴结转移率[(7.28±0.38)g、20%]均低于对照组[(9.70±0.61)g、70%]和模型组[(9.32±0.73)g、70%](...     

抗骨桥蛋白(OPN)抗体对沙鼠肝多房棘球蚴组织IL-2和IL-5表达的影响

目的观察兔抗鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)抗体对长爪沙鼠体内多房棘球蚴(俗称泡球蚴)组织中白细胞介素2(IL-2)和IL-5因子表达的影响。方法 180只长爪沙鼠随机均分为3组,即抗OPN抗体干预实验组(A组)、兔血清干预对照组(B组)和模型对照组(C组)。3组均采用开腹肝脏穿刺接种泡球蚴组织混悬液(0.1 ml/只,约含原头节400个),感染当天前两组分别注射兔抗兔OPN抗体(效价1∶32)和兔血清,均0.15 ml/次,1次/2 d×7次,以后改为每周1次直到处死。模型对照组不作任何处理。分别于处理后20、60、100、140、180和220 d各组均剖杀10只沙鼠,取肝泡球蚴组织,采用苏木素-伊红(HE)染色法和免疫组织化学SP法观察沙鼠肝泡球蚴组织中IL-2和IL-5的表达情况。结果感染泡球蚴长爪沙鼠的腹腔和肝脏中见大小不等的团块状囊泡。A、B和C组各时段泡球蚴组织中IL-2阳性细胞表达率的差异无统计学意义(P>0.05)。在感染140 d和180 d时,A组泡球蚴组织中IL-5阳性细胞表达率分别为40%和20%,显著低于B组(100%和90%)和C组(90%和80%)(P<0.05)。结论感染泡球蚴沙鼠进行抗OPN抗体干预后,Th2型IL-5细胞因子反应减弱,机体的免疫力有所增强。     

肿瘤坏死因子-α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在肝泡型棘球蚴周围单核细胞中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)在肝泡型棘球蚴周围单核细胞中的表达。方法40只雌性昆明小鼠随机分为实验组(n=20)和假手术对照组(n=20),实验组小鼠开腹直视下肝脏穿刺注射0.1 ml泡型棘球蚴混悬液,对照组注射等量生理盐水。感染6个月后处死小鼠,取肝组织,观察泡型棘球蚴的生长和转移情况;用苏木素-伊红(HE)染色法观察组织病理变化;免疫组织化学法检测TNF-α和caspase-3在肝泡型棘球蚴和淋巴转移灶周围组织中的表达;原位末端标记技术(TUNEL)检测肝组织和泡型棘球蚴病灶周围单核细胞的凋亡。结果感染6个月后,实验组小鼠肝脏可见大小不等的结节状或团块状的泡型棘球蚴组织,淋巴结转移率为45.0%(9/20)。HE染色后观察发现,实验组肝泡型棘球蚴和淋巴转移灶周围均有大量单核细胞浸润。免疫组化染色结果显示,实验组TNF-α和cas-pase-3蛋白在肝泡型棘球蚴和淋巴转移灶周围均有不同程度的阳性表达,单核细胞阳性细胞检出率分别为100%、100%和95%、100%,与对照组肝组织中阳性细胞检出率(5%和0)比较均有统计学意义(P<0.01)。TUNEL结果显示,肝泡型棘球蚴和淋巴转移灶周围单核细胞发生凋亡,单核细胞阳性细胞检出率为100%,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。结论泡型棘球蚴在感染宿主过程中,引起TNF-α蛋白高表达,可能参与了诱导肝泡型棘球蚴周围宿主单核细胞的凋亡,从而抑制宿主的免疫功能。     

抗骨桥蛋白抗体对沙鼠肝泡球蚴组织细胞因子表达的影响

目的观察抗骨桥蛋白（OPN）抗体对沙鼠肝泡状棘球蚴组织中细胞因子表达的影响,并探讨其免疫机制。方法选长爪沙鼠30只,采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡状棘球蚴组织混悬液的方法建立模型后,随机分为实验组（抗OPN抗体干预,10只）、对照组（兔血清干预,10只）和模型组（无干预,10只）。于100d后剖杀所有沙鼠,取肝泡状棘球蚴组织,采用苏木精-伊红（HE）染色法和免疫组织化学SP法观察沙鼠肝泡状棘球蚴组织中IL-2,IL-5,IL-10及TNF-α因子的表达情况。结果感染泡状棘球蚴的沙鼠肝脏和腹腔中见大小不等的团块状囊泡。IL-2,IL-5及TNF-α在实验组、对照组与模型组间免疫组化染色阳性细胞率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,而实验组IL-10的阳性细胞率明显低于对照组与模型组（P〈0.05）。结论 Th1细胞介导的细胞免疫与Th2细胞介导的体液免疫共同参与了宿主抗肝泡状棘球蚴免疫。抗OPN抗体可使IL-10的表达减低。     

泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响

目的 评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考.方法 以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100 μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-lin...     

抗骨桥蛋白抗体对沙鼠肝多房棘球蚴组织周围血管生成的影响

目的观察抗骨桥蛋白（osteopontin,OPN）抗体对长爪沙鼠肝多房棘球蚴（俗称泡球蚴）组织周围血管生成的影响。方法 90只长爪沙鼠随机分为3组,即模型对照组（A组）,兔血清对照组（B组）和抗OPN抗体干预组（C组）,所有沙鼠均采用开腹肝穿刺法接种泡球蚴原头节悬混液0.1ml（约含原头节400个）。B组于接种当天注射兔血清0.15ml/鼠,1次/2d,连续7次,之后改为每周1次,直至处死;C组采用相同的方法注射抗OPN抗体（效价1∶32）;A组不作任何处理。分别与感染后第20、60、100、140、180d每组各处死6只沙鼠,留取肝泡球蚴组织,制作组织切片采用苏木素-伊红（H-E）法和免疫组化Envision法观察各组沙鼠肝泡球蚴组织MVD-CD34的表达情况。结果感染泡球蚴沙鼠肝脏中均可见团块状泡球蚴组织,部分播散至腹腔。感染20d时A、B、C组MVD分别为（9.83±3.87）/HP,（9.67±2.94）/HP和（7.50±1.87）/HP,感染60d时分别为（33.67±3.67）/HP,（32.83±6.11）/HP和（24.33±5.61）/HP,感染100d时分别为（44.67±4.92）/HP,（42.20±6.26）/HP和（28.00±8.76）/HP,感染140d时分别为（34.17±3.19）/HP,（31.67±4.97）/HP和（20.50±4.72）/HP;感染180d时分别为（32.33±7.42）/HP,（29.67±3.88）/HP和（13.50±3.21）/HP。其中感染60d及以后各时间点C组与A组和B组相比,微血管数差异有统计学意义（P〈0.05）。结论抗OPN抗体可抑制沙鼠肝泡球蚴组织周围血管生成。     

抗OPN抗体干预感染泡球蚴沙鼠后细胞因子水平的动态变化

目的观察人工接种泡球蚴(EM)沙鼠在抗骨桥蛋白(OPN)抗体干预下体内白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-5和IL-10水平动态变化,探讨抗OPN抗体对泡球蚴感染免疫机制的影响。方法采用开腹直视下肝脏穿刺注射的方法,用20%泡球蚴组织混悬液感染长爪沙鼠180只,每只0.1ml,建立肝泡球蚴病(AE)沙鼠模型。将感染沙鼠随机分为实验组、对照组和空白组,每组60只。实验组沙鼠接种泡球蚴后当天经尾静脉注射抗OPN抗体,每次0.15ml,每隔两日注射一次,注射7次后,每隔1周注射一次;对照组沙鼠经尾静脉注射兔血清(时间和剂量同上);空白组为单纯模型组。分别于感染1、20、40、60、80和100d后,各组随机选取10只沙鼠,摘眼球取血,离心,收集血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-2、TNF-α、IL-5和IL-10含量。结果感染100d时实验组IL-10为(77.93±4.13)pg/ml,对照组为(82.46±4.24)pg/ml,空白组为(84.69±5.57)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05),其余各时间段的IL-10水平及各时间段其他3种细胞因子水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Th1细胞介导的细胞免疫与Th2细胞介导的体液免疫共同参与宿主抗肝泡球蚴免疫。抗OPN抗体可能对血清IL-10表达水平有一定的抑制作用。     

泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响

目的评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考。方法以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HSC-T6细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白(collagen 1, Col1)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达量。收集泡球蚴感染1、2、4、6、8个月小鼠血清和肝脏,分别采用ELISA法检测血清中Col1和α-SMA含量,采用天狼猩红染色法动态观察肝脏胶原纤维沉积情况。结果泡球蚴感染沙鼠血清体外可诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,不同血清剂量组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=126.50、FLX-2=201.50,P均0.05);其中100μL血清对HSC-T6和LX-2细胞促增殖率最高,HSC-T6和LX-2细胞增殖率分别为(573.36±206.34)%和(940.38±61.65)%。泡球蚴感染沙鼠血清体外刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA蛋白含量均上升;且以100μL血清刺激后Col1和α-SMA含量最高,分别为(20.99±2.01)ng/m L和(305.52±16.67)pg/mL。泡球蚴及其生发层细胞、原头节均可体外诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,增殖率分别为(142.65±9.17)%和(189.99±7.75)%、(118.55±8.96)%和(122.54±0.21)%、(156.34±17.45)%和(160.59±31.41)%,不同刺激组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=11.24、FLX-2=47.72,P均0.05);泡球蚴及其生发层细胞、原头节刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA含量均增高;且以泡球蚴作用最为明显,Col1和α-SMA含量分别为(4.43±2.23)ng/mL和(285.20±90.67)pg/mL。泡球蚴感染后1～8个月,小鼠肝脏中胶原纤维沉积持续增加;小鼠血清中Col1水平在感染后6个月达最高,为(280.26±23.04)ng/mL;α-SMA水平在感染后8个月达最高,为(33.68±4.45)ng/mL。结论泡球蚴持续感染可促进肝星状细胞体外增殖及小鼠血清中Col1和α-SMA蛋白含量升高,引起小鼠肝脏中胶原纤维沉积增多。泡球蚴感染阶段是引起泡型棘球蚴病肝纤维化的关键期。     

抗骨桥蛋白抗体对沙鼠肝多房棘球蚴组织中的基质金属蛋白酶2和转化生长因子β1的影响北大核心CSCD

目的观察抗骨桥蛋白(OPN)抗体对长爪沙鼠体内多房棘球蚴组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法 180只沙鼠随机均分为3组,即抗OPN抗体组(A组)、兔血清对照组(B组)和模型对照组(C组),3组沙鼠均采用肝内穿刺接种,每鼠注射原头节混悬液0.1 ml(约400个原头节)。A组和B组于接种当天,分别经尾静脉注射抗OPN抗体和兔血清0.15 ml/鼠,每2天1次,7次后改为每周1次,直至处死。C组不作处理。分别于感染后20、60、100、140、180和220 d后每组各处死10只沙鼠,取肝脏多房棘球蚴组织。免疫组织化学法观察多房棘球蚴组织中MMP-2和TGF-β1细胞因子的表达情况。结果所有沙鼠肝脏中均见大小不等的团块状囊泡。多房棘球蚴组织中的MMP-2免疫组化染色结果显示,3组有阳性细胞表达的动物数之间差异无统计学意义(均P>0.05)。而A组有TGF-β1阳性细胞表达的动物数在感染后100、140和180 d(3、2和2只)均显著少于B组(8、8和9只)和C组(8、9和9只)(P<0.05),其他时间点3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗OPN抗体可以在一段时间内减少沙鼠多房棘球蚴组织中TGF-β1的表达,但对MMP-2没有影响。     

年龄对小鼠继发性肝泡状棘球蚴模型的影响

目的 探讨不同年龄对继发性肝泡状棘球蚴的影响。方法 分别选取8周龄、18周龄、28周龄雌性昆明小鼠29、25、25只,用20%乌拉坦腹腔注射麻醉后,运用切开上腹部皮肤经腹壁肌层透视下肝穿刺方法分别对3组小鼠进行肝脏注射E. m组织混悬液,制备继发性肝泡状棘球蚴小鼠模型。接种后饲养100 d,行安乐死并解剖。结果 3组小鼠存活率分别为: 62.1%、84%、68%(P>0.05)。肝脏E. m感染率分别为:72.2%、71.4%、76.5%(P>0.05)。肝脏E. m包囊直径分别为: 0.915±0.103 cm、1.247±0.112 cm、1.215±0.197cm(P>0.05)。肝脏E. m包囊质量分别为:0.332±0.035 g、0.532±0.155 g、0.382±0.085 g(P>0.05),差异无统计学意义,小鼠肝E. m组织HE染色无差异。结论 利用18周龄小鼠作为造模动物制作继发性肝泡状棘球蚴模型,实验小鼠存活率高。     

Alveolar hydatid cyst with lung metastasis: a case report.

Alveolar hydatid disease is a serious and often fatal condition caused by infection with the metacestode form of echinococcus multilocularis. Liver involvement is seen in 90% of the cases. The parasite develops within the liver as a rapid invasive pseudomalignant growth and may make distant metastasis. We present the case of a 37 year old woman admitted to our gastroenterology department with obstructive jaundice and then diagnosed as alveolar hydatid cyst with lung metastasis. This case is presented due to its rare prevalence.     

西伯利亚棘球绦虫和多房棘球绦虫泡状蚴在长爪沙鼠体内发育的比较

从内蒙古呼伦贝尔草原捕获的沙狐（Vulpes corsac)小肠中收集到的西伯利亚棘球绦虫（Echinococcus sibiricensis)和多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）的成虫,经人工感染实验小白鼠,用在小白鼠体内发育的两种泡状蚴（Alveolar echinococcus)的微量物质,分别经腹腔接种到实验室饲养的长爪沙鼠（Meriomes unguiculatus),结果再次证实此两种棘球绦虫具有完全不同发生形式的泡状蚴和不同的宿主反应以及西伯利亚棘球绦虫种的独立性。     

A specific diagnostic antigen of Echinococcus granulosus with an apparent molecular weight of 8 kDA

An echinococcus antigen with an apparent molecular weight of 8 kDa was identified as diagnostically important. An immunoblot assay using this antigen was 91% sensitive for surgically confirmed Echinococcus granulosus hydatid disease of the liver. Specificity was 100% for echinococcosis. Marked cross-reactivity was observed with serum specimens from patients with E. multilocularis and E. vogeli infections. The 8 kDa component was not related to the widely recognized echinococcus antigen 5.     

肝包虫周围纤维囊壁中骨桥蛋白免疫印记与组化分析

目的:研究肝细粒棘球蚴(肝包虫)周围纤维囊壁中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达定位．方法:采用免疫印记法检测OPN在肝细粒棘球蚴(n=48)周围纤维囊壁中的表达,并结合免疫组化方法观察其组织学分布．结果:肝细粒棘球蚴周围纤维囊壁经免疫印记分析80％有OPN表达,形态学观察集中分布于近虫体侧纤维性囊壁(内层),与近肝侧纤维性囊壁(外层)比较有显著差异(75％ vs 8．3％, P<0．05)．结论:OPN参与肝细粒棘球蚴周围内层纤维性囊壁肉芽肿反应的调节．     

Treatment of a case of mesangioproliferative glomerulonephritis secondary to Echinococcus alveolaris with albendazole

Parasitic infections lead to significant morbidity and mortality, especially in tropical regions. The renal damage caused by these infections occurs via various mechanisms. Two forms of parasitic echinococcus infection widely responsible for infection in humans are Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis. E. multilocularis causes Alveolar echinococcus infection in humans. Alveolar echinococcus has high mortality, and the possible limits of surgery are generally exceeded by the time of diagnosis. The literature contains no case reports of comorbidity of alveolar echinococcus and glomerulonephritis. Here we discuss the treatment of a patient with comorbid mesangioproliferative glomerulonephritis and alveolar echinococcus, behaving like a tumor, using albendazole since there was no possibility of surgery. This is the first ever such case report.     

Hepatic echinococcosis: clinical and therapeutic aspects

Echinococcosis or hydatid disease (HD) is a zoonosis caused by the larval stages of taeniid cestodes belonging to the genus Echinococcus. Hepatic echinococcosis is a life-threatening disease, mainly differentiated into alveolar and cystic forms, associated with Echinoccus multilocularis (E. multilocularis) and Echinococcus granulosus (E. granulosus) infection, respectively. Cystic echinococcosis (CE) has a worldwide distribution, while hepatic alveolar echinococcosis (AE) is endemic in the Northern hemisphere, including North America and several Asian and European countries, like France, Germany and Austria. E. granulosus young cysts are spherical, unilocular vesicles, consisting of an internal germinal layer and an outer acellular layer. Cyst expansion is associated with a host immune reaction and the subsequent development of a fibrous layer, called the pericyst; old cysts typically present internal septations and daughter cysts. E. multilocularis has a tumor-like, infiltrative behavior, which is responsible for tissue destruction and finally for liver failure. The liver is the main site of HD involvement, for both alveolar and cystic hydatidosis. HD is usually asymptomatic for a long period of time, because cyst growth is commonly slow; the most frequent symptoms are fatigue and abdominal pain. Patients may also present jaundice, hepatomegaly or anaphylaxis, due to cyst leakage or rupture. HD diagnosis is usually accomplished with the combined use of ultrasonography and immunodiagnosis; furthermore, the improvement of surgical techniques, the introduction of minimally invasive treatments [such as puncture, aspiration, injection, re-aspiration (PAIR)] and more effective drugs (such as benzoimidazoles) have deeply changed life expectancy and quality of life of patients with HD. The aim of this article is to provide an up-to-date review of biological, diagnostic, clinical and therapeutic aspects of hepatic echinococcosis.     

Osteopontin: Versatile modulator of liver diseases

Osteopontin (OPN) is a multifunctional protein, involved in pathological conditions including inflammation, immunity, angiogenesis, fibrosis and cancer progression in various tissues. Hepatic inflammation and fibrosis induced by feeding with a diet deficient in methionine and choline (MCD diet) were markedly attenuated in OPN knockout mice when compared with wild‐type mice in the model of non‐alcoholic steatohepatitis (NASH). Hepatic cholangiocytes, myofibroblastic stellate cells and natural killer T cells were suggested to secret OPN in mice fed an MCD diet. Plasma and hepatic OPN levels were significantly higher in patients with NASH with advanced fibrosis than in those with early fibrosis. Hepatic OPN mRNA level was correlated with hepatic neutrophil infiltration and fibrosis in patients with alcoholic liver diseases. In those with hepatocellular carcinoma (HCC), OPN levels in plasma and HCC were prognostic factors after liver resection or transplantation. Downregulation of OPN inhibited tumor growth and lung metastasis in nude mice implanted with HCC cells. The single nucleotide polymorphism in the promoter region of the OPN gene was shown to be associated with activity of hepatitis in chronic hepatitis C patients, prognosis in patients with HCC, and growth and lung metastasis of HCC xenografts in nude mice. OPN was reported to be a downstream effecter of Hedgehog pathway, which modulates hepatic fibrosis and carcinogenesis. This review focuses on the roles of OPN in hepatic inflammation, fibrosis and cancer progression. Further elucidation of cellular interactions and molecular mechanisms associated with OPN actions may contribute to development of novel strategies for treatment of the liver diseases.