静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响

目的:观察静压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外培养h PDLSCs,并将其随机分为4个组;置于压力加载装置内分别给予0(对照组)、20、100、200 k Pa的静压力刺激,连续加压6 h后分别采用Quantitative RT-PCR和Western-blots法检测h PDLSCs的破骨细胞核因子KB受体活化因子配基(RANKL)及骨保护因子(OPG)的表达。结果:与对照组相比,当压力值为20 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显(P>0.05),但OPG的表达量明显升高(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05);当压力值为100 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量明显升高(P<0.05),但OPG的表达量降低(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显升高(P<0.05);当压力值为200 k Pa时,RANKL、OPG mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.05),其中以RANKL下降的程度更加明显,RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05)。结论:持续的静压力作用可使h PDLSCs表达OPG和RANKL的水平发生明显变化,并具有力值依赖性。     

周期性流体静压力对牙周膜干细胞分化的影响

目的观察周期性流体静压力对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)分化的影响。方法酶消化法分离人牙周膜细胞,采用单克隆法分离hPDLSCs。流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,结晶紫染色观察hPDLSCs克隆形成。hPDLSCs成骨、成脂诱导分化后采用茜素红、油红O染色,观察hPDLSCs的多向分化能力。利用自主研发的力学加载装置,对PDLSCs加载0~120 kPa的周期性流体静压力7 d,采用Real-time PCR检测hPDLSCs中过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)、抗Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子(Scleraxis)及牙骨质蛋白1(CEMP1)的表达量。结果单克隆法分离的hPDLSCs高表达干细胞表面标志物CD90(95.2%)、CD105(95.5%),而低表达CD45(1.3%)、CD34(1.36%)。hPDLSCs具有克隆形成能力,并且成骨、成脂诱导后细胞出现红色钙结节和脂滴。经周期性力学刺激后,hPDLSCs中Scleraxis的表达显著高于对照组,而PPAR-γ、Runx2及CEMP1的表达与对照组相比无显著差异。结论周期性力学刺激可以维持hPDLSCs向牙周膜韧带成纤维细胞分化的潜能。     

周期性张应力对人牙周膜细胞Periostin表达的影响

目的:研究在机械力作用下人牙周膜细胞(h PDLCs)内Periositn(PN)m RNA和蛋白的表达变化。方法:采用组织块酶消化法培养h PDLCs,经鉴定后将第4代细胞随机分为4个实验组和1个对照组(非加力组),4个实验组分别采用Flexcell-5000 Tension System应力加载系统对h PDLCs加载6、12、24、48 h的周期性张应力;然后采用q RT-PCR、Western blot分别检测各组h PDLCs中PN m RNA和蛋白的表达变化。结果:在正常h PDLCs中表达PN m RNA和蛋白;与对照组相比,加力6 h后,PN m RNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);加力12 h后,PN m RNA和蛋白的表达均逐渐升高,并持续至24 h达最高水平(P<0.05);而在加力48 h时,PN m RNA和蛋白表达均明显下降,并恢复至对照组的表达水平(P>0.05)。结论:机械力可诱导h PDLCs中PN的表达增强及活化,且具有时间依赖性;提示PN可能参与了细胞内生物力学信号的转导。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

力生长因子对牙周膜干细胞增殖分化的影响

目的 探讨力生长因子（mechano-growth factor,MGF）对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法 采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）,流式细胞仪检测表面标志物,并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力;CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段（MGFCt24E肽）作用下PDLSCs的增殖活性;Western blot检测MGF-Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type Ⅰ alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）、磷酸化YAP(phosphorylation yes-associated protein,P-YAP)蛋白表达量;免疫荧光观察YAP的表达情况;siRNA干扰YAP表达后,观察PDLSCs中MGF-...     

人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞与人牙周膜干细胞成骨分化能力的对比研究

目的:比较人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesechymal stem ceils,hUCWJMSCs)与人牙周膜干细胞(periodontal mesenchymal stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力.方法:体外培养hUC-WJMSCs和hPDLSCs.MTT法检测细胞增殖情况;成骨诱导后测定细胞的ALP活性,茜素红染色检测细胞矿化能力,Real-timePCR分析OPN和Runx2基因的表达.结果:hUCWJMSCs增殖能力高于hPDLSCs;经矿化诱导后hPDLSCs ALP表达、矿化结节形成高于hUCWJMSCs(P＜0.05);Runx2在hPDLSCs中表达高于hUCWJMSCs(P ＜0.05);而hUCWJMSCs中OPN表达高于hPDLSCs(P＜0.05).结论:hUCWJMSCs、hPDLSCs均具有成骨分化能力,hPDLSCs成骨分化能力较强.     

IGF-1对人牙周膜干细胞成骨能力的影响

目的探讨IGF-1是否影响人牙周膜干细胞的成骨能力。方法分离、培养牙周膜干细胞,实验分为两组：对照组和实验组（经IGF-1诱导）,进行矿化能力检测、实时定量RT-PCR检测、ALP活性检测。结果实验组人牙周膜干细胞体外矿化能力明显强于对照组。实验组人牙周膜干细胞Runx2,Collagen type I,Osteocalcin的表达以及ALP活性明显高于对照组。结论 IGF-1影响人牙周膜干细胞在体外的成骨能力。     

雌激素对人牙周膜干细胞干性维持的影响

目的研究雌激素对人牙周膜干细胞（hPDLSC）干性维持的影响。 方法分离、培养原代hPDLSC并完成其干细胞鉴定;雌激素处理48 h,采用流式细胞术检测雌激素对hPDLSC细胞周期的影响;定量聚合酶链反应（q-PCR）检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因、干性相关基因Oct4、Sox2、c-Myc以及衰老相关基因p16和p53的变化;雌激素长期处理后观察细胞克隆形成能力及骨向分化能力的改变。应用SPSS 17.0软件,利用配对样本t检验对组间均数进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果实验获得的hPDLSC符合间充质干细胞鉴定标准。流式细胞术结果显示,雌激素处理48 h后hPDLSC增殖能力（29.730 ± 1.845）较对照组（23.587 ± 2.905）明显提高,差异有统计学意义（t= 9.913,P= 0.010）。q-PCR结果显示雌激素处理48 h后,hTERT表达量（1.958 ± 0.338）较对照组（1.000 ± 0.018）明显提高（t= 7.00,P= 0.001）;Oct4表达量（2.539 ± 0.493）较对照组（1.000 ± 0.011）明显提高（t= 6.26,P= 0.001）;Sox2表达量（2.234 ± 0.255）较对照组（1.016 ± 0.221）明显提高（t= 6.26,P= 0.003）;c-Myc表达量（1.328 ± 0.091）较对照组（1.003 ± 0.088）明显提高（t= 5.67,P= 0.002）;而衰老相关基因p16表达量（0.460 ± 0.085）较对照组（1.009 ± 0.163）明显降低（t= 12.24,P= 0.007）;p53表达量（0.301 ± 0.041）较对照组（1.004 ± 0.115）明显降低（t= 7.77,P= 0.016）。雌激素长期处理后,雌激素处理组的克隆形成率（0.058 ± 0.008）显著高于对照组（0.013 ± 0.008）,差异有统计学意义（t= 5.60,P= 0.028）,成骨能力显著强于对照组（A_对照组= 1.238 ± 0.084;A_E2=2.460 ± 0.182,t= 16.41,P<0.001）。 结论雌激素能提高hTERT和Oct4、Sox2、c-Myc的基因表达量,维持细胞增殖,抑制细胞衰老。雌激素长期处理能维持体外扩增时hPDLSC的干性。     

周期性牵张力加载下人牙周膜细胞中血管内皮生长因子表达变化的研究

目的：观察周期性牵张力作用下，体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPLFs)中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的变化，以探讨机械力介导下牙周组织改建的机制。方法：通过体外细胞培养加载系统，采用周期性牵张力(每分钟6个循环，12％形变量)加载l、3、5、7d，用免疫组化和原位杂交技术，观察VEGF在HPLFs中的表达。结果：HPLFs在体外表达VEGF，其蛋白水平及mRNA水平的表达从加力ld开始升高，5d达到高峰，在加力7d开始下降。结论：在一定条件下，周期性牵张力可显著影响HPLFs VEGF的蛋白和mRNA水平的表达，进一步证实机械力作用下，VEGF参与了牙周组织改建，在正畸牙齿移动的机制中具有重要意义。     

血小板衍生生长因子BB对牙周膜干细胞生物学特性的影响

目的：观察血小板衍生生长因子BB（platelet derived growth factor BB, PDGFBB）基因修饰人牙周膜干细胞（human periodontal stem cells, hPDLSCs）的生物学特性,探讨PDGFBB对hPDLSCs细胞增殖、迁移及诱导成骨的影响。方法：分离并扩增hPDLSCs,免疫荧光染色鉴定细胞表面标志和成骨诱导分化能力。通过慢病毒载体介导PDGFBB基因转染hPDLSCs,转染后,采用CCK-8及划痕实验检测其对细胞增殖、迁移的影响。利用实时荧光定量PCR分析PDGFBB基因转染后hPDLSCs细胞内成骨相关基因和成血管相关基因VEGF mRNA的表达水平。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果：采用组织块培养及有限稀释法成功获得hPDLSCs。PDGFBB转染hPDLSCs后,细胞形态良好,与空病毒组和未转染组相比,转染组细胞增殖及迁移能力显著上升,OPN、COL-1和VEGF mRNA表达水平显著上调（P<0.05)。结论：慢病毒载体能在体外将PDGFBB基因转入hPDLSCs,获得持续、稳定表达。PDGFBB可促进hPDLSCs细胞的增殖和迁移,上调成骨和成血管相关基因的表达。     

miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的：研究 miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法：分离培养人牙周膜干细胞后用 qRT-PCR检测 miR-20a 的表达,并且在瞬时转染 miR-20a mimics 和 inhibitor 后成骨诱导,用茜素红染色,Western Blot 和 PCR 的方法检测成骨能力的改变。结果：人炎症牙周膜干细胞中 miR-20a 表达降低,转染 mimics 后成骨能力升高,转染 inhibitor 后成骨能力降低。结论：miR-20a 可以促进人炎症牙周膜干细胞成骨分化。     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

人牙周膜干细胞的分离培养及初步鉴定

目的 体处分离培养人类牙周膜干细胞并对其生物学性状进行初步鉴定.方法 采用有限稀释法进行牙周膜干细胞克隆筛选,获得单细胞克隆来源细胞,检测其克隆形成率,并采用免疫组织化学染色、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色等方法鉴定牙周膜干细胞的组织来源及生物学特性.结果 有限稀释法获得的牙周膜干细胞克隆株呈簇状生长,排列紧密,细胞呈圆形或椭圆形,细胞较小,排列形成紧密的团块状.免疫组化染色显示细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性;碱性磷酸酶染色阳性;早期间充质干细胞的标志物STRO-1荧光染色显示细胞发出明亮的红色荧光,表达阳性.结论 牙周膜中存在具有高增殖能力的干细胞,克隆化分离培养的人牙周膜干细胞具有强克隆形成能力,具有间充质干细胞表型和生物学特性.     

牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

目的：对经牛血小板衍化生长因子作用的人牙周膜成纤维细胞超微结构进行观察。方法：透射电镜观察。结果：发现细胞超微结构发生了明显的变化，包括粗面内质网扩张和增多，发达的线粒体与大量的多聚核糖体形成，胞核增大，核内常染色质增多等。结论：牛血小板衍化生长因子可促进人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质合成旺盛，代谢、增殖活跃。提示这些变化可能与细胞在该因子作用下生物学功能增强有密切关系。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞细胞周期的影响

临床常见咬合创伤引起牙齿松动、牙周膜腔增宽、牙槽骨吸收。牙周膜受损与牙周膜组织及人牙周膜成纤维细胞(hum an periodontal ligam ent fibrob last,HPLF)的生命活动异常有密切关系[1]。本组应用可控压力细胞加载装置,对HPLF加载不同大小的间断性压力[2],用流式细胞仪观察不同间断性模拟咬合压力对HPLF细胞周期的影响,推测50、100 kPa间断性压力对细胞分裂有抑制作用。1材料和方法1.1牙周膜成纤维细胞原代培养和细胞加载方法取青少年因正畸需要而拔除的前磨牙,组织块法[3]原代培养,反复贴壁纯化。置37℃,50 mL/L CO2,100%湿度CO2…