单克隆抗体-蓖麻毒蛋白A链导向杀伤大肠癌细胞的研究

本研究从湘西野生蓖麻籽中提取了两种植物毒蛋白ricin Ⅰ、ricin Ⅱ,其分子量分别为65、67KD,LD_(50)分别为0.20、0.24ug/小鼠。用本室制备的抗大肠癌单克隆抗体Hb_3作为导向载体,与蓖麻毒蛋白A肽链交联,制备杂交分子Hb_3—RTA。SDS—PAGE分析表明,每个Hb_3上平均结合4.9个RTA。初步细胞毒试验显示,交联物Hb_3—RTA对大肠癌细胞HRT-18具有较强杀伤作用,而对正常人淋巴细胞杀伤作用较小。     

蓖麻饼蛋白的去毒及其利用

脱脂蓖麻饼是蓖麻(Ricinuscommunis)榨油后所剩饼粕。含蛋白质40%左右,脂肪3%～6%,及含糖、粗纤维、钙、磷、铁、锌等营养成份,它还含有18种氨基酸而且必需氨基酸含量充足(每100mg含有赖氨酸3.40mg、蛋氨酸190mg、色氨酸130mg、苯丙氨酸440mg、苏氨酸370mg、亮氨酸640mg、...     

亲和层析法制备蓖麻毒蛋白

目的研究蓖麻毒蛋白的提取纯化工艺,为制备抗癌生物导弹和生物农药提供原料。方法以琼脂糖凝胶为载体,D-半乳糖为特异性配基,采用亲和层析法纯化蓖麻毒蛋白;并用高效液相色谱法鉴定其纯度。结果该法制备的蓖麻毒蛋白纯度高,收得率好。结论该方法特异性强,制备效率高,可作为制备蓖麻毒蛋白纯品的一种有效方法 。     

溶酶体参与蓖麻毒素A链降解途径的研究

目的:研究溶酶体在蓖麻毒素A链(RTA)细胞内转运过程中的作用.方法:用DNA重组技术,将溶酶体的靶向信号肽KFERQ连接在RTA的羧基端;将构建好的重组质粒pKK223.3-RTA和pKK223.3-RTA-KFERQ转化感受态大肠杆菌JM109,经IPTG诱导表达RTA和RTA-KFERQ蛋白;重组蛋白质用Blue-Sepharose6B亲和柱纯化,以MTT法分别测定纯化后的RTA与RTA-KFERQ蛋白对体外培养的HEPG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)、A549(人肺癌细胞)3种细胞的毒性作用.结果:在大肠杆菌中成功表达了RTA和RTA-KFERQ.与RTA相比较,纯化的重组蛋白在体外有相似的蛋白质合成抑制活性,RTA-KFERQ对HEPG2、Hela和A549细胞的毒性分别减少了约49.87%、54.18%、88.68%.结论:RTA不能完全被溶酶体灭活,RTA可能存在溶酶体外的降解途径.     

杠柳毒苷在大鼠体内的组织分布

目的 考察杠柳毒苷在大鼠体内的组织分布。方法 采用高效液相色谱法测定大鼠静脉注射杠柳毒苷后,组织样品中杠柳毒苷的质量浓度。结果 大鼠iv杠柳毒苷0.74 mg/kg,2、10、20 min后肝中杠柳毒苷的质量浓度分别为（2.447± 0.687）、（0.631±0.272）、（0.292±0.228） μg/g,在肝中最高,其次是肾、心、肺、脾和脑。结论 杠柳毒苷静脉注射后,在大鼠体内分布迅速,主要分布于肝、肾和心中。     

PMEA-Na在大鼠体内的毒代动力学及其组织分布

目的:在进行9-[2-(磷酸甲氧基)乙基]腺嘌呤钠(PMEA-Na)SD大鼠慢性毒性研究的同时,研究其伴随毒代动力学及组织分布。方法:采用液相色谱质谱联用方法测定样品中的药物浓度,并进行血清生化学及组织病理学检测。结果:SD大鼠单次及多次iv给药(90 d,每天1次)后,在给药剂量范围内,PMEA-Na在大鼠体内的暴露量与给药剂量呈线性相关。在6,12和24 mg/kg剂量下,AUC分别为7.49,11.63,30.99 mg/L.h(单剂量)和11.43,25.19,54.20 mg/L.h(多剂量)。肾脏中PMEA-Na浓度最高,其次是肝脏和生殖器,且多次给药后其组织浓度升高。血清生化学检测指标AST、CRE、CK及CRE均升高(P     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体携带阿霉素在荷瘤鼠体内的分布

采用Ｄｅｘｔｒａｎ　Ｔ－４０桥联法将抗人脑胶质瘤单克隆抗体ＳＺ－３９与氚标记阿霉素（３Ｈ－ＡＤＲ）交联，制备成免疫交联物３Ｈ－ＡＤＲ－ＰＡＤ－ＭＡｂＳＺ－３９。在荷瘤鼠体内观察免疫交联物分布情况。结果显示，ＡＤＲ－ＭＡｂＳＺ－３９在相关肿瘤浓聚，发挥了单抗高选择性定位作用，其分布特异指数平均为３．７９，心脏为４，骨为２，有可能降低阿霉素的主要副作用──心脏损害及骨髓抑制。但其在肝、脾内摄入相对较多，临床应用时应予注意。     

槲皮素脂质体纳米粒在大鼠体内的分布研究

目的研究槲皮素脂质体纳米粒在大鼠体内分布情况。方法采用SD大鼠,随机分为槲皮素对照组(n=25)和槲皮素脂质体纳米粒实验组(n=25),分别给予尾静脉注射槲皮素悬浊液和槲皮素脂质体纳米粒悬浊液,于一定的时间点采集大鼠血液及主要脏器,使用HPLC法测定其槲皮素的浓度。结果实验组大鼠肝脏的槲皮素的浓度明显高于对照组,并呈缓慢下降趋势。结论槲皮素脂质体纳米粒具有良好的肝靶向性,并证实其有一定的缓释性。     

^99m锝标记紫杉醇脂质体在移植荷瘤鼠体内分布的研究

对２０只雌性裸鼠建立人卵巢习皮下移植瘤模型，经其尾静脉注射锝标紫杉醇脂质体（＾９９ｍＴＣ－ＴＬ）０．２ｍｌ，ｇｆ １５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ各处死动物５只，将心、肝、脾、肺、肾、小肠、子宫附件、骨及肿瘤组织分别称重。其余５只动物尾静脉注射游离锝（＾９９ｎｍＴＣ－Ｆ）０．１ｍｌ，９０ｍｉｎ处死，取肝、脾、肺及肿瘤组织称重，用γ－定标仪测共放射强度（单位：ＣＡＰ／１００ｍｇ），肝、脾、肺脏器内     

五加皮Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布

目的探讨五加皮抗肿瘤成分A ge蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布。方法用氯胺T法对A ge蛋白进行125I标记(形成125I-A ge),由尾iv小鼠后,于不同时间取组织和血液标本,测定放射cpm比值。以放射参与量(即脏器与血液中cpm比值)作为125I-A ge在组织中分布的依据。结果在一次性快速iv125I-A ge 2 h后,正常小鼠和荷瘤小鼠体内均以肾脏中125I-A ge的分布量最高,肝脏和肺部放射参与量也较高,与心脏、脾脏等其他脏器相比差异有显著性(P<0.01);尿中125I-A ge的量很高。iv同等剂量125I-A ge后,荷瘤小鼠的肾脏、肝脏和肺部组织的放射参与量比正常小鼠偏高(P<0.05)。结论五加皮A ge蛋白在小鼠体内主要分布于血流丰富的组织,主要通过泌尿系统排泄,不易透过血脑屏障。     

131I-D2C5在荷瘤裸鼠体内分布实验

目的 探讨131I-D2C5在荷瘤裸鼠体内的生物分布.方法 12只荷瘤裸鼠随机分为二组(每组各6只),鼠尾静脉注射131I-D2C5 或131I-mIgG 4 h、24 h、48 h后,采用γ计数器检测体内放射性分布.结果 静脉注射131I-D2C5后4 h,131I-D2C5主要分布在血、心、肝、肾、脾中,肿瘤在4h开始略有浓集.24 h后肿瘤组织内131I-D2C5聚集达到高峰,此时每克组织的放射性占注射剂量的百分比(%ID/g)达到4.12.131I-D2C5注射后4 h、24 h、48 h肿瘤/肌肉的放射性比值依次为3.96、7.63、8.21,而131I -mIgG依次为3.30、2.80、2.60,两者变化趋势差异显著.结论 131I-D2C5 能在裸鼠肿瘤组织内特异性聚集,有望用于肿瘤组织的受体显像和导向治疗.     

β-CIT在／正常恒河猴体内分布的SPECT显像研究

目的 研究多巴胺转运蛋白（ＤＡＴ）放射性配体＾１２３Ｉ－、＾１３１Ｉ－β－ＣＩＴ在正常恒河猴体内的分布,探讨其临床应用前景。方法 于正常恒河猴肘静脉处弹注射％＾１２３Ｉ－β－ＣＩＴ（９ＭｃＩ）或＾１３１－β－ＣＩＴ（１０ｍＣｉ）后,运用单光子发射计算机断层扫描仪（ＳＰＥＣＴ）连续动态进行全身和砂部断层扫描,计算各时间点感兴趣区（ＲＯＩ）的放射性计数。结果 不同时间的断层扫描显示注射后２４ｈ,在纹状     

紫茎泽兰羟基泽兰酮在大鼠体内毒代动力学与组织分布

目的 探讨紫茎泽兰羟基泽兰酮(Euptox A)在大鼠体内的毒代动力学和组织分布.方法 将15只Wistar大鼠随机分为3组,每组5只;分别静脉给予Euptox A 25、50和100mg·kg-1后,于不同时间点采集血样;另18只大鼠随机分为3组,每组6只;静脉给予Euptox A 50mg·kg-1后,分别于10、...     

蓖麻毒素及其修饰物在肝癌细胞膜上的分布

目的：探讨３－（α－吡啶二硫基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基酯（ＳＰＤＰ）修饰的蓖麻毒素毒癌活性及其机制。方法：用流式细胞仪分析蓖麻毒素及其修饰物在肝癌细胞膜上的分布变化。结果：修饰的蓖麻毒素在肝癌细胞上的分布比未修饰的蓖麻毒素明显增多,结论：ＳＰＤＰ修饰后的蓖麻毒素对肝癌细胞的亲和力增加,提示蓖麻毒素用ＳＰＤＰ修饰可能是改进其抗癌作用的一个有价值的途径。     

RTA—RA3是B220特异性的有潜力的抗自身免疫的免疫毒素

将抗B220单克隆抗体分泌克隆RA3注射至SCID小鼠腹腔以获取腹水，抗体经proteinA亲和层析柱提纯，再经SPDP双功能交联剂修饰后，与还原的去糖基蓖麻毒蛋白A链反应生成免疫毒素RTA-RA3．SephadexG150柱层析分离纯化此免疫毒素，在还原状态下可见到免疫球蛋白重链、轻链及另一条带RTA．免疫毒素体内注射，研究MRL/＋和MRL/lpr小鼠脾细胞的淋巴细胞标志．实验表明：RTA－RA3对脾B220＋细胞有显著抑制作用．提示这一免疫毒素可用于治疗自身免疫性疾病。     

蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白 (GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究.方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a( );在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性.结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性.结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究.     

β-CIT在／正常恒河猴体内分布的SPECT显像研究

目的 研究多巴胺转运蛋白(DAT)放射性配体123I－、131I－β－CIT在正常恒河猴体内的分布，探讨其临床应用前景。方法 于正常恒河猴肘静脉处弹丸注射123Iβ－CIT(9mCi)或131I-β-CIT(10mCi)后，运用单光子发射计算机断层扫描仪(SPECT)连续动态进行全身和头部断层扫描，计算各时间点感兴趣区(ROI)的放射性计数。结果 不同时间的断层扫描显示注射后24h，在纹状体部位的放射性浓集最清晰，纹状体／额叶比值1．78，左、右侧纹状体及与同侧额叶、颞叶和枕叶的比值基本相同；全身动态扫描显示β－CIT主要分布在消化道(胆囊和空、回肠)。结论在脑内β-CIT主要分布在纹状体，注射后24h是脑断层扫描的最佳时间点；123I－β－CIT SPECT在体显像可用于检测纹状体DAT的功能或密度。