霍乱毒素亚单位B结合辣根过氧化酶电镜观察触液神经元几种显色方法比较

目的寻找电镜观察霍乱毒素业单位B结合辣根过氧化酶（CB—HHP）最理想的显色方法。方法将CB—HRP引入侧脑室，分别使用二氨基联苯胺（DAB）法、CoCl2-DAB法、TMB—ST法、TMB—ST结合DAB—CoCl2法显色CB—HRP，电镜下观察CB—HRP标记阳性神经冗显色情况。结果DAB法、CoCl2-DAB法以及TMB—ST法显色后，电镜下均未见有CB—HRP标记阳性神经元；TMB—ST结合DAB—CoCl2法显色，见有夫量CB-HRP标记阳性神经元，且超微结构清晰，标记物明艟。结论TMB—ST结合DAB—CoCl2法是用于电镜观察CB—HRP的最理想方法。     

以钼酸铵作HRP组化TMB反应的稳定剂及其在电镜、免疫组化技术上的应用

Olucha等曾以庚钼酸铵(AHM)代替硝普钠(SNP)做辣根过氧化物酶(HRP)组化反应四甲基联苯胺(TMB)法的稳定剂(TMB-AHM法),不同程度地消除了原TMB法以硝普钠做稳定剂的缺点。但Olucha用的是普通HRP,对此方法显示标记神经元树突的敏感性未做具体分析。本文将TMBAHM法应用于CB-HRP(Choleragen Subunit B Conjugated HRP)逆行追踪研究神经元嫌高尔基树     

TMB在ELISA及酶染法检测HFRSV抗原与抗体中的应用

本文建立了以TMB为底物的EL1SA双抗体夹心法和间接酶染色法。以前者检测HFRSV抗原,敏感性比OPD为废物的RLISA提高4倍以上;以后者检测血清中HFSR IgG抗体,敏感性比以DAB为底物的酶染色法可提高4～1024倍。而且,TMB没有OPD和DAB的致癌性,是一个理想的HRP底物显色剂。此试剂的应用有利于酶免疫技术地推广应用。     

一种新的高灵敏的HRP-TMB成色法(TMB-ST)

辣根过氧化物酶(HRP)法是目前神经解剖学中应用最广泛的技术之一。现有HRP成色法中最灵敏的Mesulam的TMB法(′78,′80)仍存在超微结构保存差、产物不稳定、非特异性沉淀多等问题,根据对HRP-TMB反应的酶促动力学、稳定剂的作用以及组织化学方面的研究,我们首次提出了一种用钨酸纳(Sodium Tungstate,ST)作为稳定剂的新的     

HRP—TMB反应中醋酸缓冲液PH值与反应敏感性组织超微结构保存的关系

为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过不同PH值的醋缓配的反应液后,在光镜及电镜下观察了下橄榄核区标记终末的密度及组织超微结构象。发现选用pH值为4.0的醋缓液较为合适。     

ELESA试剂盒中显色液应用于HRP逆行神经束路追踪实验染色的尝试

ELESA即酶联免疫吸附试验,是免疫学检测的常用方法。其原理为:标记有HRP(辣根过氧化物酶)的抗体或抗抗体与待检样品中的抗原或抗体进行抗原抗体反应,再利用HRP与酶反应底物发生呈色反应,以此来判断样品中待检抗原或抗体的有无及多少。酶反应底物包括H2 O2 和DAB或TMB。DAB(二氨基联苯胺)和TMB(四氨基联苯胺)均为呈色反应的供氢体,它们在H2 O2 存在时与HRP发生反应,前者的反应产物呈棕色,后者的反应产物呈蓝色。但由于DAB具有致癌性,所以目前TMB较为常用,有逐步取代DAB的趋势。为了使操作简便,许多厂家生产ELESA试剂盒。E…     

中缝背核至感觉皮质投射的定性追踪—HRP和免疫细胞化学结合法研究

本实验用HRP法和免疫细胞化学结合法,研究大鼠中脑中缝背核至大脑感觉皮质的纤维投射以及该纤维的性质。结果表明:中缝背核投射至感觉皮质的纤维多数起源于中缝背核的外侧部,其性质主要为5-HT能纤维(占整个投射纤维的88％),提示:中缝背核对感觉皮质的广泛影响可能是通过5-HT实现的;HRP(TMB法)和免疫细胞化学结合法是研究神经径路性质的有效方法。     

狒狒的动眼神经核的功能结构

作者在一組狒狒中,在动眼神經所支配的骨骼肌內注射了HRP。48小时后,通过灌注固定而杀死动物,並将其脑按TMB—HRP Mesulam(1978)方法处理,应用組織化学方法进行观察。     

EIESA试剂盒中显色液应用于HRP逆行神经束路追踪实验染色的尝试

ELESA即酶联免疫吸附试验，是免疫学检测的常用方法。其原理为：标记有HRP(辣根过氧化物酶)的抗体或抗抗体与待检样品中的抗原或抗体进行抗原抗体反应，再利用HRP与酶反应底物发生呈色反应，以此来判断样品中待检抗原或抗体的有无及多少。酶反应底物包括H202和DAB或TMB。DAB(二氨基联苯胺)和TMB(四氨基联苯胺)均为呈色反应的供氢体，它们在H2O2存在时与HRP发生反应，前者的反应产物呈棕色，后者的反应产物呈蓝色。但由于DAB     

表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响

目的:研究表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响。方法:用共沉淀法制备γ-Fe2O3纳米粒子,并用透射电子显微镜(TEM)表征。将γ-Fe2O3纳米粒子分别表面修饰二巯基丁二酸(DMSA)、柠檬酸、酒石酸和3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS),并用Zeta电位仪表征。由于γ-Fe2O3纳米粒子可以催化双氧水氧化底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB),从而发生显色反应,这一特性与辣根过氧化物酶(HRP)相似,通过岛津UV-3600紫外-可见分光光度计和酶标仪检测该显色反应,评估氧化铁纳米粒子的催化性能及表面修饰的影响。结果:(1)TEM和Zeta电位测量表明,γ-Fe2O3纳米粒子直径约为13 nm,表面修饰能够有效调控其表面电荷;(2)氧化铁纳米粒子类过氧化物酶催化活性与纳米粒子的表面电荷相关,表面负电荷有利于增加对带正电荷底物TMB的亲和力,从而增加类酶活性;(3)γ-Fe2O3/DMSA具有最高的表面负电荷,米氏常数测量表明Km(TMB)为0.3 mmo.lL-1,表现出与天然HRP对底物TMB类似的亲和力。结论:通过表面修饰可以调控氧化铁纳米粒子的类酶活性,其作为HRP模拟酶具有潜在的应用价值。     

大鼠腰骶段脊髓的脑啡肽能传入纤维的脑起源

研究目的探讨大鼠下丘脑和脑干至脊髓腰6和骶1节段的亮氨酸－脑啡肽能（L-ENK）下行投射纤维的细胞起源。研究设计用HRP注入大鼠腰骶髓，观察下丘脑及脑干的HRP标记细胞部位，然后用免疫细胞化学方法处理标记细胞，对其递质定性。研究对象健康成年Wistar大鼠。研究方法HRP注入腰6和骶1的一侧半后，取间脑和整个脑干冰冻切片，TMB成色，经过DAB＋COCl2法稳定1－MB产物后，再经L－ENK抗体孵育及PAP法至色，观察HRP和L－ENK免疫反应江标细胞。结果下丘脑室旁核、红核、前庭神经外侧核、Minimus核、脑桥尾测网状核．巨细胞网状核均出现了HRP－L－ENK双标细胞。结论下丘脑室旁核及脑干有脑啡肽能神经元投射至大鼠腰骶段脊髓。     

交感神经在兔椎动脉被膜节段性分布的实验研究

目的旨在利用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）逆行示踪技术对新西兰免进行实验，以明确交感神经纤维在椎动脉被膜上的分布规律，为临床颈性眩晕的分型提供实验依据，有助于对颈性眩晕的评估和治疗。方法选用20只新西兰兔，C2、C5左右侧各5只。将30％HRP5μl注于椎动脉外膜表面．48h后灌注处死，切取颈上神经节（SCG）、颈下神经节（ICG）（或星状神经节），TMB法成色反应，观察HRP标记细胞分市情况。结果实验侧同水平节段交感神经节发现以中、小细胞为主的HRP标记细胞。结论椎动脉被膜的交感神经分布具有节段性及同侧性的分布特点。     

肌肽在体外氧化反应中的作用

该研究分别以辣根过氧化物酶( HRP)或FeCl3为催化剂,在蓝四氮唑比色法(MTT)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及鲁米诺反应系统中分别评估肌肽对氧化反应的作用.在鲁米诺反应中,肌肽起到促氧化的作用;在TMB系统中,肌肽起中性作用;而在其他氧化系统中,肌肽是一种抗氧化剂.因此,肌肽是促氧化还是抗氧化性质,取决于底物的性质.     

大白鼠体感区皮质与皮质下结构间的传入、传出联系

将HRP注入大白鼠体感区皮质,用TMB法成色反应观察顺、逆行标记的神经元结构。结果表明:体感区皮质与皮质下结构间存在着广泛的传入、传出联系。作者认为,其主要机能意义可能是:①缝核、兰斑核和网状结构等参与大脑皮质的感觉及镇痛机制;②体感区皮质与躯体感觉性核团间存在着返馈回路,从而调节一级感觉传入信息。     

骨骼肌纤维内联苯胺阳性反应物质的横纹状分布

<正> 联苯胺、二氨基联苯胺(DAB)和四甲基联苯胺(TMB)等都可以用来显示给予体内的外源性过氧化物酶,如辣根过氧化物酶(HRP)等。此外体内也含有内源性过氧化物酶或具有过氧化物酶活性的物质,这些内源性过氧化物酶活性物质已     

成鼠面神经付核的形态学研究

HRP—TMB法研究了16只成鼠的面神经付核的中枢定位、细胞构筑和中枢神经元计数等问题。发现面神经付核为独立核团,位于面神经(主)核的背侧,贯穿延髓的上段与中段。核由大小两种神经细胞互相环抱网络而成。为了清晰显示标记神经核团与其周围神经核团的相互位置关系,作者建议将成色反应后的切片,投入中性红染液中复染。     

在动物活体和死后神经断端使用HRP对神经细胞标记情况的比较—光镜和电镜观察

用成年小鼠34只,生前剪断左眼下神经和左面神经交给HRP,灌注固定后剪断右上颌神经和右面神经根给HRP。用BDHC、TMB或DAB呈色法制片。光镜下看到左三叉神经节和左面神经核中,标记细胞体多而标记纤维少,三种呈色法的反应物都是颗粒状。右三叉神经节和右面神经核中则标记纤维多而标记细胞体少,BDHC和TMB呈色反应物为颗粒而DAB呈色却为弥散性标记。电镜下标记细胞体内有电子密度大的阳性反应物,活体标记多为圆形或卵圆形含有反应物的次级溶酶体或多泡体;死后标记则有较多围绕于空泡一侧的不规则反应物,不见有膜围绕。死后标记的纤维,轴索内有大小不一的阳性颗粒,有的髓鞘中也散布着阳性微粒。     

巨细胞网状核与脊髓后角间的双向投射——HRP法和ARG法联合研究

动物经戊巴比妥钠麻醉,于立体定位仪上将内含20%HRP(注入20只大鼠)或100μci/μ1~3H-亮氨酸(注入12只大鼠)的微玻管插入巨细胞网状核(NGC),标记物注射持续45min。动物存活2 d(注入HRP)或1周(注入~3H-亮氨酸)后,动物深麻,灌注,脑干或脊髓冰冻切片,分别进行TMB呈色或D-19~b显影。结果显示:脊髓板层Ⅶ～Ⅷ内的HRP标记细胞较板层Ⅲ～Ⅴ和Ⅸ为多。在板层Ⅰ～Ⅵ,Ⅶ,Ⅷ和Ⅸ内可见散在的HRP标记终末。~H-亮氨酸注入NGC后,下行放射自显影标记终未在脊髓内出现的部位与上述HRP终未出现的部位基本一致。提示:NGC和脊髓间存在着双向投射关系,并且此种形态学方面的投射特点为NGC在疼痛方面反馈性调节功能提供理论依据。     

应用内源性过氧化物酶——联苯胺细胞化学法显示中枢神经系统内微血管方法的研究

应用血细胞中内源性过氧化物酶将底物过氧化氢分解,产生原子氧,使无色联苯胺及其衍生物呈色,显示中枢神经系统微血管的原理,在辣根过氧化物酶(HRP)呈色技术启示下,确立了4种中枢神经系统微血管显示法,即二氨基联苯胺法(DAB)、二盐酸联苯胺法(BDHC)、邻-联茴香胺法(O-D)以及四甲基联苯胺法(TMB)。实验结果表明,这4种方法均能清晰地呈现中枢神经系统内的徽血管,4种方法的显示结果并无显著性差异(P>0.05)。这4种方法的建立将为中枢神经系统微血管解剖学研究,病理组织血管构筑研究以及中枢神经系统内移植物血管重建研究提供了重要的技术手段。     

应用内源性过氧化物酶——联苯胺细胞化学法显示中枢神经系统内微血管方法的研究

应用血细胞中内源性过氧化物酶将底物过氧化氢分解,产生原子氧,使无色联苯胺及其衍生物呈色,显示中枢神经系统微血管的原理,在辣根过氧化物酶(HRP)呈色技术启示下,确立了4种中枢神经系统微血管显示法,即二氨基联苯胺法(DAB)、二盐酸联苯胺法(BDHC)、邻-联茴香胺法(O-D)以及四甲基联苯胺法(TMB)。实验结果表明,这4种方法均能清晰地呈现中枢神经系统内的徽血管,4种方法的显示结果并无显著性差异(P>0.05)。这4种方法的建立将为中枢神经系统微血管解剖学研究,病理组织血管构筑研究以及中枢神经系统内移植物血管重建研究提供了重要的技术手段。