热休克预处理抗过氧化氢所致心肌细胞损伤保护作用的细胞分子机理

体外培养的鸡胚心肌细胞分别置于３７℃．３９℃．４２℃下进行预处理，ＳＤＳ－ＰＡＧＦ、Ｎｏｒｔｈｅｍｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ显示４２℃预处理２ｈ导致心肌细胞中热休克蛋白（ＨＳＰｓ）特别是ＨＳＰ７０基因表达明显增加，并明显减轻了随后Ｈ２Ｏ２所致的心肌细胞损伤，表现为较高的细胞存活率、较高的ＳＯＤ及过氧化氢酶活性及较低的ＴＢＡＲＳ水平，而３９℃２ｈ的热休克预处理未能获得上述结果。在转录抑制剂放线菌素Ｄ或翻译抑制剂放线菌酮存在下，热休克预处理所诱导的ＨＳＰ基因表达被完全阻断，上述心肌细胞保护作用亦被完全取消。本研究为热休克蛋白的心肌保护作用提供了进一步证据     

热休克基因表达对抗过氧化氢所致肺内皮细胞损伤的保护作用

本研究探讨热休克反应（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨｓＲ）对抗过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）所致牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）损伤的保护作用及机制。实验发现，预先热休克处理（４２℃，２ｈ）可使ＢＰＡＥＣｓ中热休克蛋白７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ明显增多，同时显著减轻Ｈ２Ｏ２所致的ＢＰＡＥＣｓ中乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性的降低等变化。进一步实验证明放线菌酮和放线菌素Ｄ能分别抑制热休克诱导的Ｈ８Ｐ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多，同时均能取消ＨＳＲ对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用。结果提示，ＨＳＲ具有对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用；此种保护作用与细胞经热休克处理后细胞中热休克基因在转录和翻译两个水平的表达增强及抗氧化能力增加有关。     

热休克蛋白70对H2O2诱发大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨热休克蛋白70(HSP₇₀)对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP₇₀,用过氧化氢(H₂O₂)造成心肌细胞损伤。采用免疫组化、DNALadder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶及琥珀酸脱氢酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标的方法。结果:温度诱导后HSP₇₀在胞浆中大量表达,H₂O₂损伤组与HSP₇₀保护组凋亡率(12.18±1.94,6.42±0.86,P<0.01)、细胞色素C氧化酶比活力(5.824±1.949,10.375±2.513)及琥珀酸脱氢酶比活力(0.884±0.152,1.174±0.214,P<0.01)有显著差异。电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体。结论:HSP₇₀可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

热休克预处理对大鼠缺血再灌注心肌保护作用机制的探讨

目的:观察心肌缺血再灌注时P-选择素（Ps）表达情况；探讨热休克蛋白(HSP)对缺血再灌注心肌Ps及细胞凋亡表达的影响。 方法:成年雌性Wistar（n=40）大鼠随机分为3组。热休克组全麻后高热处理造成热休克动物模型，对照组及假手术组仅予全麻处理。24 h后热休克组及对照组结扎左冠状动脉前降支(LAD)1 h，再灌注2 h造成心肌缺血再灌注动物模型。假手术组只于LAD处穿线而不结扎。术毕测心梗范围、HSP70、Bax、Bcl-2、Ps、凋亡细胞及血清CK-MB。 结果:热休克组HSP70表达高于对照组及假手术组(P<0.05)，后两组无明显差别(P>0.05)；热休克组心梗范围小于对照组(P<0.05)，CK-MB值低于对照组(P<0.01)，凋亡细胞、Bax及Ps表达低于对照组(P<0.05)，两组Bcl-2表达无显著差别(P>0.05)；假手术组无Ps表达。 结论:HSP70可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡，抑制Bax表达致Bax/Bcl-2比值下降为其机制之一；Ps参与心肌缺血再灌注损伤；HSP70可能有抑制心肌Ps表达的作用，这或许是热休克预处理对大鼠缺血再灌注心肌的另一保护机制。     

低剂量过氧化氢预处理导致牛肺血管内皮细胞耐受过氧化氢损伤

小量过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）预处理，能诱导牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ增多，同时使ＢＰＡＥＣｓ获得了对大量Ｈ２Ｏ２损伤的耐受性，表现为大量Ｈ２Ｏ２所致乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶、超氧化歧化酶活性降低等变化减轻。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别抑制ＨＳＰ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多后，此种耐受性消失，说明小量Ｈ２Ｏ２预处理使Ｂ     

热休克蛋白70对离体心脏心肌间质的保护作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）对大鼠离体心脏心肌间质的影响。方法Wistar大鼠16只，分为2组：对照组（C，n=8），腹腔注射生理盐水0．4ml，24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液，4℃保存3h后建立Langendorff灌注模型，灌注KH液2h；实验组（E，n=8），腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素，24h后取离体心脏，方法同对照组。以心肌细胞中HSP70含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸（HP）、内皮索（ET）含量和心肌超微结构等作为观察指标。结果HSP70含量E组与C组比较明显增高；E组心功能恢复方面优于C组（P〈0．05），HP含量优于C组（P〈0．01），ET含量低于C组（P〈0．01），心肌超微结构损伤较C组明显减轻。结论HSP 70对供心心肌间质具有保护作用。     

热休克蛋白70对未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌细胞功能的影响。方法健康新生长耳大白兔随机分为2组。对照组(C):腹腔注射生理盐水0.4ml,注射后24h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。实验组(E):腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取离体心脏,方法同对照组。测定心肌细胞中HSP70含量及相关生化指标并作统计学处理比较。结果HSP70含量E组明显高于C组;E组ATP含量、SOD活性方面均优于C组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组(P<0.01),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均优于C组(P<0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组(P<0.01)。结论HSP70对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护作用。     

热休克蛋白与心肌保护

热休克蛋白是一种在正常细胞中普遍表达的蛋白质,可在机体应激的情况下表达增加,通过分子伴侣作用对其他蛋白质的折叠、降解起重要作用。同时,还具有抗氧化、抗细胞凋亡及协同免疫的作用。高温、缺血缺氧预适应均能诱导机体HSP表达增加,产生心脏保护作用。     

热休克预处理对家兔肝缺血-再灌注损伤的影响

目的 :探讨热休克预处理对肝缺血 再灌注损伤的影响。方法 :随机将家兔分为对照组和热休克预处理组 ,复制肝脏缺血 再灌注模型 ,分别于缺血前、缺血 45min、再灌注 45min三次取血 ,赖氏法检测血清谷丙转氨酶 (ALT)活性。结果 :热休克预处理组缺血前的ALT活性稍高于对照组 ,但是缺血后及再灌注后显著低于对照组。结论 :热休克预处理对肝细胞有轻微的损伤作用 ,但是对缺血后和再灌注后损伤均有显著的保护作用。     

热休克蛋白90对抗氯化钴引起的心肌细胞损伤

目的探讨热休克蛋白90（heat shock protein 90,HSP90）在对抗氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。方法应用不同浓度的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测HSP90的表达;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）检测试剂盒分析SOD活性抑制率。结果在400～1000μmol／L浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在0．5—36h时间范围内,600μmol／LCoCl2呈时间依赖性地促进H9C2心肌细胞HSP90的表达。2～16μmol／LHSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allylamino-17demethoxygeldanamycin,17AAG）呈剂量依赖性地加重600μmol／LCoCl2对H9C2细胞存活率的抑制。2μmol／L17AAG本身不损伤H9C2心肌细胞,但明显地加强CoCl2增加H9C2心肌细胞内ROS生成的作用,并增加CoCl2对SOD活性的抑制。结论HSP90表达上调可能是H9C2心肌细胞对抗化学性缺氧的内在防御机制之一。     

热休克、心肌缺血预处理对I/R心肌的保护作用研究

目的:观察热休克(heatshock,HS)和缺血预处理(ischemicpreconditioningI.P)对缺血再灌注(I/R)心肌损伤的保护作用,并同时检测HS和IP后热休克蛋白72(HSP),抗氧化酶的动态变化,探讨HSP和IP对缺血再灌注心肌保护的可能机制。方法:建立HS和IP动物模型,检测HS和IP后,模型,检测HS和IP后,0、24、48、96、192hHSP表达水平的变化及再灌注后的心肌组织SOD、CAT、MDA含量变化,最后处死动物,用TTC染色测定心肌坏死范围。结果:再灌注后24h和48h两组心肌组织MDA含量减少,SOD、CAT活性明显高于对照组。对照组、HS组及IP组oh几乎无HSP表达,其表达高峰在HS和IP后24h,48h,随后逐渐降低,于192h返回基线水平。HS和IP组心肌梗死面积较对照组显著减少(P<0.01)。结论:热休克蛋白和缺血预处理均能提高抗氧化酶活性,减轻心肌缺血再灌注损伤。     

蛋白激酶C对缺血预处理家兔心肌热休克蛋白70 mRNA的影响

目的:探讨心肌缺血预处理(IPC)过程中蛋白激酶(PKC)对热休克蛋白(HSP)70mRNA表达的影响。方法:在原位及离体家兔心脏缺血再灌注(I/R)、缺血预处理模型上分别应用PKC抑制剂和激动剂,观察对心肌的作用和对心肌HSP70mRNA的表达的影响。结果:缺血预处理和使用佛波酯(PMA)使心肌HSP70mRNA的表达、左心功能明显高于I/R组,磷脂酶A₂(PLA₂)活性及心律失常发生率明显低于该组;而使用多粘菌素B(PMB)则阻断了缺血预处理对心脏的保护作用,同时HSP70mRNA表达也明显低于IPC及PMA组。结论:PKC参与了缺血预处理过程中HSP70表达的调控。     

细胞外热休克蛋白70及其生物学功能

热休克蛋白(HSP)一直被描述为一种细胞内蛋白质在胞内发挥一系列生物学作用,参与细胞内蛋白质的折叠、装配、降解和修复过程。近年来,有研究发现HSP70能被主动释放到胞外,成为细胞外HSP70(extracellular HSP70,eHSP70),但关于其功能尚不清楚。循环HSP70水平与多种疾病进程密切相关。有研究发现暴露于物理和心理刺激源作用下,HSP70可能通过脂筏或Exosome介导的分泌途径释放到细胞外,作为一种生物活性因子影响多种疾病的进程。     

低剂量亚硝酸钠预适应对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的:研究亚硝酸钠(NaNO2)预适应对过氧化氢(H2O2)损伤鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用。方法:分别以系列浓度的NaNO2作用PC12细胞24h,细胞的增殖活性采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和活细胞计数法,用Hoechst 33258染色计数凝集和碎核细胞占细胞总数的百分比为细胞凋亡率。以3mmol/L浓度的NaNO2预适应细胞24h后,加或不加一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo),再用1.1mmol/L H2O2暴露6h,细胞存活率检测用MTT、凋亡检测用流式细胞术和Hoechst 33258/PI染色。比色法测定丙二醛(MDA)含量和酶活性。结果:NaNO2对PC12细胞增殖作用呈典型的β型曲线,最大低促效应出现在第24h,最大低促效应剂量为1.4mmol/L,最大促增殖效应为对照组的156%,未观察到不良效应水平(NOAEL)为6mmol/L,细胞增殖半数抑制率(IC50)值为45mmol/L。用3mmol/L NaNO2预适应24h,然后用1.1mmol/LH2O2暴露6h,细胞增殖活性比单纯H2O2组明显升高(P0.05)。用1.1mmol/L H2O2暴露6h,非预适应组细胞凋亡率为44.9%;3mmol/L NaNO2预适应组细胞凋亡率为19.1%,差异显著(P0.05),这种现象可以被一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo)所抑制。3mmol/L NaNO2预适应组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平升高,MDA含量降低(P0.05)。结论:低于6mmol/L NaNO2暴露能够引起PC12细胞的低促效应。低浓度NaNO2预适应,通过降低细胞脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,保护过氧化氢毒害的PC12细胞。亚硝酸盐还原为一氧化氮在细胞保护过程中起关键作用。     

空肠弯曲菌热休克蛋白43对T细胞的活化作用

本文用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验发现空肠弯曲菌４３ＫＤ热休克蛋白（ＨＳＰ４３）能显著促进小鼠脾淋巴细胞活化，并呈剂量依赖关系，这种活化作用不但能被特异性针对ＨＳＰ４３的二株单抗明显抑制，而且也能针对ＨＳＰ６０家族保守区序列的二株单抗所抑制，去除巨噬细胞同样也能抑制ＨＳＰ４３活化作用。用单抗和补体的特异性杀伤所致Ｔ细胞亚群缺失试验发现ＨＳＰ４３主要活化ＣＤ４＾＋Ｔ细胞，本文结果提示空肠弯曲菌ＨＳＰ４３可     

热休克反应对缺血-再灌心肌保护作用的机制探讨

目的：探讨热休克反应对大鼠缺血-再灌心肌保护作用的可能机制。方法：SD大鼠,随机分为对照组及热休克组,动物经热休克处理恢复2或24h后复制缺血再灌模型并进行各项检测。结果：①热休克处理后心肌组织内SOD活性显著高于对照组,MDA含量则显著低于对照组。②热休克组心肌组织内乳酸及ATP含量均显著高于对照组,糖原含量则显著低于对照组。③热休克反应能诱导HSP70i的转录。结论：热休克反应对缺血-再灌心肌的保护作用与心肌能量代谢的改善、抗氧化能力的增强以及HSP70i的转录合成增强有关。     

热休克蛋白基因技术在心肌保护研究中的应用

热休克蛋白是应激时细胞快速合成的一组对细胞产生保护作用的蛋白质。近年来应用基因转染技术 ,反义技术 ,基因敲除技术 ,转基因动物技术等在基因水平人工操纵热休克蛋白的表达 ,从而探讨各种应激条件下热休克蛋白家族对心肌保护的作用。     

热休克蛋白参与PI3K/Akt 介导H2O2 预处理的抗凋亡作用

目的: 探讨热休克蛋白(HSP)是否参与PI3K/Akt信号通路介导的H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。方法: 利用PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗高浓度H₂O₂诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2) 损伤组;(3)预处理＋损伤组; (4)LY294002＋预处理＋损伤组;(5) LY294002组;(6) quercetin＋预处理＋损伤组;(7) 17-AAG＋预处理＋损伤组;(8) 溶剂对照组。应用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3的活性,免疫印迹法(Western blotting)测定HSP的表达水平。结果: 100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂引起的细胞凋亡,使caspase-3的活性降低,同时上调HSP70和HSP90的表达。HSP70和HSP90的抑制剂quercetin和17-AAG拮抗H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。 PI3K抑制剂LY294002不仅拮抗了H₂O₂预处理抗细胞凋亡的作用,并且抑制H₂O₂预处理对HSP70和HSP90的表达上调。结论: PI3K/Akt通路、HSP70和HSP90均参与H₂O₂预处理诱导的细胞保护作用。并且HSP70和HSP90参与PI3K/Akt信号通路介导H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。