自身CD3AK细胞治疗乙型肝炎的临床观察（附58例报告）

目的 :探讨CD3AK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床治疗效果。方法 :将 1 0 8例慢性乙型肝炎患者随机分为两组。治疗组 5 8例患者接受CD3AK细胞治疗 (1疗程回输细胞总数为 1 1～ 8×1 0 1 0 ) ,对照组 5 0例。结果 :5 8例患者经CD3AK细胞治疗后 ,HBeAg转阴率 36 .3% ,ALT复常率达86 .1 % ,HBVDNA转阴率 6 2 .1 % ,与对照组相比较有显著差异 ;随访一年后HBeAg转阴率 6 7.9% ,HBeAg转换率为 2 0 .7% ,ALT复常率达 97.2 % ,HBVDNA转阴率 86 .2 % ,与对照组相比较仍有显著差异。治疗组CD3和CD8T淋巴细胞绝对值在CD3AK细胞治疗后均增加在 85 %以上 ,前后对比有显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 :自身CD3AK细胞过继免疫治疗乙型肝炎可有效提高患者HBeAg阴转率和ALT的复常率 ;能明显增强患者的细胞免疫功能     

CD3AK过继性免疫治疗人脑胶质瘤实验及临床初步观察

取人脑胶质瘤患者周围静脉血，加入抗人ＣＤ３单抗诱导ＣＤ３ＡＫ，按不同效靶比与人脑胶质瘤细胞作用，同时以ＬＡＫ细胞组作对照。结果显示，ＣＤ３ＡＫ对胶质瘤细胞具有强大杀伤活性，效靶比越高，杀伤活性越强（Ｐ＜０．０５），其杀伤率明显高于ＬＡＫ细胞组（Ｐ＜０．０１）。临床应用ＣＤ３ＡＫ治疗脑胶质瘤患者，初步观察无明显副作用，且对患者免疫功能具有明显增强作用。     

CD3AK细胞的研究进展

ＣＤ３ＡＫ细胞是ＣＤ３单抗起始激活的杀伤细胞，不同的诱导方法可导致两种不同的细胞亚类，即ＣＤ３ＡＫ＾＋和ＣＤ３ＡＫ＾－，前者介导ＰＫＣ非依赖性快溶解细胞毒作用；后者介导ＰＫＣ依赖性慢溶解胞毒作用，本文归纳了在两种ＣＤ３ＡＫ细胞的诱导过程中，单核巨噬细胞，各种细胞因子以及谷胱苷肽等因素对其活化增殖，细胞毒活性的免疫调节作用。     

自体CD3AK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的临床观察

目的观察抗CD3单克隆抗体（anti—CD3 mAb）激活的杀伤细胞（cD3AK）过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的疗效。方法从51例恶性肿瘤患者自体外周血分离单个核细胞,加入anti—CD3mAb、重组人IL-2（rhIL-2）体外诱导后扩增培养,制备自体CD3AK细胞。待细胞培养至第10～12天时取样用于质控检测。收集质控检测合格的CD3AK细胞,调整至终浓度为（4．0～6．0）×10^9/L,静脉回输至患者体内,每例患者治疗3个疗程,每疗程回输5次（每2d回输1次）,每次回输细胞数不低于1×10^9,每疗程回输细胞总数大于5×10^＊。应用人T细胞亚群检测试剂盒和流式细胞仪测定治疗前后患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞以及CD16＋56＋细胞（NK细胞）比例;观察治疗前后患者的相关化验指标、生活质量以及不良反应;评定疗效,计算有效率和临床受益率。结果分离制备的CD3AK细胞符合理想活性细胞质量要求,可用于进一步实验治疗。CD3AK细胞过继免疫治疗后,患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞以及CD16＋56＋细胞（NK细胞）比例分别为（48．88±9．42）％、（35．09±4．11）％、（28．17±4．97）％、（20.31±6．98）％]均显著升高（均P〈0．05）。51例患者中,45例患者治疗后全身症状改善明显;所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现其他全身毒副反应;其中完全缓解6例、部分缓解14例、微效11例、稳定12例、进展8例,总有效率达60．8％,临床受益率达84．3％。结论CD3AK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤疗效确切、安全且无副作用,能有效改善和提高患者的机体免疫功能。     

肿瘤患者自体CD3AK与LAK细胞生物学特性研究

目的：ＣＤ３ＡＫ细胞是由抗ＣＤ３单克隆抗体和ＩＬ－２共同激活诱导的肿瘤杀伤细胞。对３０例肿瘤患者自体ＤＣ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞进行了比较性研究。方法：采用ＭＴＴ法检测ＣＤ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞的杀瘤活性,应用流工细胞术进行免疫标志物分析。结果与结论：肿瘤患者ＰＢＭＮＣ诱导后产生的ＣＤ３ＡＫ细胞较ＬＡＫ细胞有更强的增殖能力,但对Ｒａｊｉ、Ｋ５６２细胞的生长抑制作用无明显区别;４０％～６０％ＣＤ３ＡＫ     

CD3AK细胞的诱导及其抗肿瘤作用机制的初步探讨

采用两种状态的IgG2型小鼠抗人CD3单抗,辅以小剂量外源性IL-2刺激诱导CD3AK细胞,测定其对K562,Raji及P815细胞的杀伤作用。结果发现,0.1μg/ml浓度的游离状态抗CD3单抗和10μg/ml浓度的粘附状态抗CD3单抗刺激人PBMC增殖达最强效果,其中粘附状态抗CD3单抗诱导的PBMC增殖活性明显强于激离状态抗CD3单抗;外源性IL-2能协同增强抗CD3单抗诱导PBMC增殖,但当粘附状态抗CD3单抗处于最强激活浓度时,其协同作用并不明显。实验结果显示,CD3AK细胞对三种不同性质的肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用,其杀伤活性既有效靶细胞直接接触杀伤,又有杀伤因子介导。     

T细胞受体基因转染过继性免疫治疗的研究进展

利用T细胞进行过继性免疫治疗是治疗病毒感染性疾病和肿瘤的理想方法,但是用于治疗的T细胞的特异性、亲和性和数量等限制了其应用,如何获得特异、高效、一定数量的T细胞是目前亟待解决的问题。采用TCR基因转染的方法,将特异性高亲和力TCR转移到受体的T细胞中,可以特异性杀伤受体体内的肿瘤细胞。     

异体CD3AK细胞对白血病细胞的体外杀伤作用

肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中的重要进展之一 ,有关免疫效应细胞在自体造血干细胞的体外净化中的应用也引起了国内外学者的兴趣。我们观察了ＣＤ3ＡＫ细胞对残留ＣＭＬ细胞系及原代白血病细胞的体外杀伤作用 ,以期ＣＤ3ＡＫ细胞应用于自体移植体外净化。材料与方法材料 :正常人外周血由健康志愿男性提供 ;ＣＭＬ患者骨髓由东南大学附属中大医院血液科提供。ＣＤ3ＡＫ细胞的制备 :取正常人肝素抗凝全血10ｍｌ,常规分离单个核细胞 ,调整浓度为 10 6 ｍｌ,加入包被有 3μｇＣＤ3单抗的 2 4孔板中 ,加入 2 0 0Ｕ ｍｌＩＬ 2 ,每 2～ 3ｄ换液 …     

T细胞过继免疫治疗恶性实体肿瘤研究进展

过继细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）在血液系统疾病的临床应用已获得广泛认可，尤其在目前疫苗免疫治疗还存在着不能有效抑制微小残留肿瘤生长等多种因素而限制了其临床应用的前提下，ACI在恶性实体肿瘤治疗中的应用研究也引起了人们的普遍关注。     

B7-H1阻断对CD3AK细胞体外生物学活性的影响

目的: 探讨B7-H1阻断对CD3AK细胞增殖活化及其抗肿瘤免疫效应的影响.方法: 利用CD3单克隆抗体(mAb)刺激健康人外周血淋巴细胞诱导产生CD3AK细胞,然后利用B7-H1阻断型抗体阻断B7-H1通路,3H-TdR渗入法检测阻断后CD3AK细胞的增殖能力,ELISA法检测阻断后CD3AK细胞分泌IFN-γ、 TNF-α和IL-10的水平,同时将CD3AK细胞作用于膀胱肿瘤BIU-87细胞,MTT法检测阻断后CD3AK细胞的杀伤活性.结果: B7-H1阻断后,CD3AK细胞的增殖能力明显增强,体外存活时间明显延长;其分泌IFN-γ、 TNF-α的水平明显提高,而分泌IL-10的水平明显下降;同时CD3AK细胞对BIU-87细胞的杀伤活性亦明显升高.结论: 阻断B7-H1通路可以促进和维持CD3AK细胞的增殖和活化,并增强其抗肿瘤的免疫效应.阻断B7-H1通路将有望成为肿瘤免疫治疗的新策略.     

人脐带血清不同组分对CD3AK细胞增殖的影响

人脐带血清有很好的支持ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的活性，本文证明这种活性主要在大分子血清物质中。用截留分子量为１０５的滤膜超滤合并的人脐带血清，分成上下两部分，各占全血清的１／４和３／４。膜上部分为＞１０５血清；膜下部分为＜１０５血清。促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的活性，主要在＞１０５血清；＜１０５血清的活性较低，尤其是对４天以上的增殖，即使增加浓度，添加＜１０５血清组的ＣＤ３Ａ细胞数目还是随培养天数下降。培养液中添加全脐带血清、＞１０５血清或重混合脐血清、ＣＤ３单抗和白细胞介素－１（ＩＬ－１），促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖；若培养液中改加＜１０５血清，则ＣＤ３单抗和ＩＬ－１反而使ＣＤ３ＡＫ细胞减少。此外，这两部分血清组分对ＣＤ３ＡＫ细胞合成ＤＮＡ和ＲＮＡ、对其表型、细胞表面分子表达和其杀伤活性均有不同影响。上述结果提示，人脐带血清中有分子量超过１０５的促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的物质。     

抗CD4单抗增强抗CD3单抗／IL—2活化的肿瘤特异性T细胞的抗瘤活性

目的探讨抗CD4mAb增强抗CD3mAb刺激的肿瘤特异性T细胞增殖和杀瘤活性的作用。方法将肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,采用4种不同的方案培养1单独加2×104U/LrIL2IL2组2单独加抗CD3mAb抗CD3组3加抗CD3mAb48h后,再加入抗CD3mAb和2×104U/LrIL2抗CD3 IL2组4同时加抗CD3mAb和抗CD4mAb48h后,再加入抗CD3mAb、抗CD4mAb和2×104U/LrIL2抗CD3 IL2 抗CD4组。然后分别检测4组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果抗CD3 IL2组细胞的3HTdR掺入量在第6,12和20d分别为:22045、13986和1931;抗CD3 IL2 抗CD4组细胞的3HTdR掺入量在第6、12和20d,分别为46193、31047和7443,后者明显高于前者P0.05。在培养12d时,抗CD3 IL2组的细胞对FBL3细胞株的最大杀伤率为83.6%;抗CD3 IL2 抗CD4组细胞的最大杀伤率为91.7%。细胞表型:FACS分析表明,抗CD3 IL2 抗CD4组培养12d的细胞,99%以上为Thy1.2 细胞,且CD4 、CD25 细胞的百分率均高于抗CD3 IL2组。结论抗CD4mAb对抗CD3mAb刺激、IL2诱导的肿瘤特异性T细胞的增殖和杀瘤活性具有增强作用。     

The combination therapy with EpCAM/CD3 BsAb and MUC-1/CD3 BsAb elicited antitumor immunity by T-cell adoptive immunotherapy in lung cancer

Lung cancer remains a global challenge due to high morbidity and mortality rates and poor response to treatment, and there are still no effective strategies to solve it. The bispecific antibody (BsAb) is a novel antibody, which can target two different antigens and mediate specific killing effects by selectively redirecting effector cells to the target cells. In this study, we combined two BsAbs to achieve a dual-target therapy strategy of EpCAM⁺ and MUC-1⁺ with high affinity and specificity. The results showed that the combination of two BsAbs against EpCAM and MUC-1 could inhibit the growth of lung cancer more effectively in cell lines and primary tumors. The superior antitumor effect of two BsAbs could be attributable to enhanced CTL and increased production of type I IFNs. At the same time, the combination of EpCAM/CD3 BsAb and MUC-1/CD3 BsAb significantly regulated T population in the TDLNs. Therefore, we have found a potential immunotherapeutic strategy, which was the combination therapy with EpCAM/CD3 BsAb and MUC-1/CD3 BsAb for the treatment of non-small cell lung cancer.     

Heteroconjugate antibodies enhance cell-mediated anti-herpes simplex virus immunity in vivo.

Heteroconjugate antibodies are generated by covalently linking two mAbs with different specificities. When anti-CD3 mAb, capable of activating effector T cells, is coupled to anti-herpes simplex virus (HSV) mAb, which binds HSV antigens on virally-infected target cells, the resulting heteroconjugate antibody can be used in vitro to enhance anti-HSV immunity. Specifically, these heteroconjugate antibodies can augment anti-HSV immunity among lymphocytes previously lacking cytotoxicity against HSV-infected target cells. However, the efficacy of these specialized reagents in enhancing anti-HSV immunity in vivo has not been determined. We report here that anti-HSV heteroconjugates used in an adoptive transfer murine model of HSV-1 infection inhibited HSV replication in vivo and improved long-term survival. These results demonstrate that heteroconjugate antibodies have a potential therapeutic role in enhancement of anti-HSV immunity.     

CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的：观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MCC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bcl-2的表达水平，提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法：RT-PCR法检测CD44、bcl-2mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果：CD44反义寡核苷酸（1.6μmol／L）处理后，明显地抑制MGC80-3细胞CD44mRNA和蛋白表达水平，在CD44配体低分子量透明质酸（HA）存在下，使MCC80-3表面下调的Fas分子显著增高，表达率从6．69％提高到16．81％（P〈0．01）。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高，并呈效靶比依赖效应（P〈0．01）。MGC80-3细胞bcl-2mRNA的相对表达定量值由1．06降至0．32。结论：CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44mRNA和蛋白表达，上调Fas分子的表达，下调凋亡抵抗基因bcl-2的表达，并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。     

抗CD3单抗和rIL－2共刺激法诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的人ＣＤ３ＡＫ是异质性细胞群，其细胞表型以ＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞和ＣＤ５６＋ＮＫ细胞表型为主，具有活化的淋巴母细胞形态学特征，常形成集落，并表达活化淋巴细胞的表面标记，如ＩＬ－２受体和ＭＨＣⅡ类抗原。     

抗CD3单抗和rIL－2共刺激法诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的人ＣＤ３ＡＫ是异质性细胞群，其细胞表型以ＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞和ＣＤ５６＋ＮＫ细胞表型为主，具有活化的淋巴母细胞形态学特征，常形成集落，并表达活化淋巴细胞的表面标记，如ＩＬ－２受体和ＭＨＣⅡ类抗原。     

CD3AK细胞对人卵巢癌细胞系的体外杀伤作用

目的：研究卵巢癌盆腔引流淋巴结的淋巴细胞,经ＣＤ３单克隆抗体激活后的杀伤细胞ＣＤ３ＡＫ（ＣＤ３ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｅｒｃｅｌｓ）在体外的抗瘤作用。方法：采用卵巢癌病人盆腔引流淋巴结的淋巴细胞,在体外与ＣＤ３单抗和少量ｒＩＬ－２诱导并激活后,在两株人卵巢癌ＨＯ－８９１０、ＨＯ－８９１０ＰＭ细胞系上进行实验研究。将两株细胞各随机分成６组：（１）阴性对照组（Ａ组）：只加新鲜全培养液;（２）低浓度ＣＤ３ＡＫ组（Ｂ组）：５×１０５·Ｌ－１ＣＤ３ＡＫ培养液;（３）中浓度ＣＤ３ＡＫ组（Ｃ组）：１×１０９·Ｌ－１ＣＤ３ＡＫ培养液;（４）高浓度ＣＤ３ＡＫ组（Ｃ组）：２．５×１０９·Ｌ－１ＣＤ３ＡＫ培养液;（５）顺铂阳性对照组（Ｅ组）：含１０ｍｇ·Ｌ－１顺铂培养液;（６）顺铂＋ＣＤ３ＡＫ联合用药组（Ｆ组）：含１０ｍｇ·Ｌ－１顺铂＋１×１０９·Ｌ－１ＣＤ３ＡＫ培养液,分别用ＬＤＨ活性测定、自然杀伤率及台盼蓝活细胞计数法进行了观察。结果：ＣＤ３ＡＫ细胞对卵巢癌细胞有明显的杀伤作用,两株细胞均以中浓度ＣＤ３ＡＫ细胞就显示了较好的细胞毒活性作用（Ｐ＜０．０１）,统计学上差异有高度显著性。ＣＤ３ＡＫ细胞与顺铂联合用药时,无论在细胞增     

Soluble and membrane‐bound interleukin (IL)‐15 Rα/IL‐15 complexes mediate proliferation of high‐avidity central memory CD8+ T cells for adoptive immunotherapy of cancer and infections

The lack of persistence of infused T cells is a principal limitation of adoptive immunotherapy in man. Interleukin (IL)‐15 can sustain memory T cell expansion when presented in complex with IL‐15Rα (15Rα/15). We developed a novel in‐vitro system for generation of stable 15Rα/15 complexes. Immunologically quantifiable amounts of IL‐15 were obtained when both IL‐15Rα and IL‐15 genes were co‐transduced in NIH 3T3 fibroblast‐based artificial antigen‐presenting cells expressing human leucocyte antigen (HLA) A:0201, β₂ microglobulin, CD80, CD58 and CD54 [A2‐artificial antigen presenting cell (AAPC)] and a murine pro‐B cell line (Baf‐3) (A2‐AAPC^15Rα/15and Baf‐3^15Rα/15). Transduction of cells with IL‐15 alone resulted in only transient expression of IL‐15, with minimal amounts of immunologically detectable IL‐15. In comparison, cells transduced with IL‐15Rα alone (A2‐AAPC^Rα) demonstrated stable expression of IL‐15Rα; however, when loaded with soluble IL‐15 (sIL‐15), these cells sequestered 15Rα/15 intracellularly and also demonstrated minimal amounts of IL‐15. Human T cells stimulated in vitro against a viral antigen (CMVpp65) in the presence of 15Rα/15 generated superior yields of high‐avidity CMVpp65 epitope‐specific T cells [cytomegalovirus‐cytotoxic T lymphocytes (CMV‐CTLs)] responding to ≤ 10^{? 13} M peptide concentrations, and lysing targets cells at lower effector : target ratios (1 : 10 and 1 : 100), where sIL‐15, sIL‐2 or sIL‐7 CMV‐CTLs demonstrated minimal or no activity. Both soluble and surface presented 15Rα/15, but not sIL‐15, sustained in‐vitro expansion of CD62L⁺ and CCR7⁺ central memory phenotype CMV‐CTLs (T_CM). 15Rα/15 complexes represent a potent adjuvant for augmenting the efficacy of adoptive immunotherapy. Such cell‐bound or soluble 15Rα/15 complexes could be developed for use in combination immunotherapy approaches.