人胰岛细胞移植中胰岛细胞活性研究

目的：器官联合切取中的不同胰腺获取方法是否对于胰岛细胞的活性有影响。方法：实验于2001—08／2004—08在南方医科大学珠江医院器官移植中心和南方医科大学解剖教研室完成，12例自愿捐赠器官供，采用高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉进行原位灌注后，进行胰腺、肾脏联合切取，肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取。取后采用胶原酶P消化胰腺，分离并纯化胰岛细胞，进行胰岛细胞活性染色．然后对比不同切除方法对于胰岛细胞活性率的影响。结果：胰腺、肾脏联合切取，肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取，如顺利，无污染、在冷却血时间5h以内，胰岛细胞活性率都在80％，经原位灌注后各方法之间无明显差别。结论：经腹主动脉进行原位灌注后，各种方法切取都符合无污染，冷却时间5h以内，不会影响胰岛细胞的活性。     

人胰岛细胞移植中胰岛细胞活性研究

目的:器官联合切取中的不同胰腺获取方法是否对于胰岛细胞的活性有影响。方法:实验于2001-08/2004-08在南方医科大学珠江医院器官移植中心和南方医科大学解剖教研室完成,12例自愿捐赠器官供者,采用高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉进行原位灌注后,进行胰腺、肾脏联合切取,肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取。取后采用胶原酶P消化胰腺,分离并纯化胰岛细胞,进行胰岛细胞活性染色,然后对比不同切除方法对于胰岛细胞活性率的影响。结果:胰腺、肾脏联合切取,肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取,如顺利、无污染、在冷却血时间5h以内,胰岛细胞活性率都在80%,经原位灌注后各方法之间无明显差别。结论:经腹主动脉进行原位灌注后,各种方法切取都符合无污染,冷却时间5h以内,不会影响胰岛细胞的活性。     

大鼠胰岛细胞的分离提纯及移植效果观察

背景:胰岛细胞移植已成为治疗1型和部分2型糖尿病的有效途径,但供体不足的问题限制了其发展。目的:改进胰岛细胞的分离和纯化方法,并观察其移植效果。设计:实验方法改进。单位:中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室。材料:实验于2006-01/10在中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室完成。供体为普通级封闭群Wistar大鼠,雌雄不限,体质量250～300g;受体为普通级封闭群SD大鼠,雄性,(Frompage2388)体质量180～220g,两种大鼠均购自中国医科大学实验动物部(许可证号:SYXK(LIAO)2003-0013)。方法:①胰岛细胞的分离纯化及胰岛功能评估:取未禁食的Wistar大鼠,麻醉后处死。于胆总管起始处剪一小口,将连着装有胶原酶的注射器的1mm直径的腰麻管顺行插入,将冷的胶原酶溶液(1.5g/L)注入胰管内,使胰腺充分膨胀。切取胰腺,将装有胰腺的离心管水浴消化,水浴期间间断加入1mol/L的NaOH使消化液的pH值保持在7.8±1.0,经Ficoll密度梯度离心法纯化胰岛。应用双硫腙法评估胰岛的纯度,应用丫啶橙/碘丙啶法评估胰岛的存活率,存活率=活细胞总数/(活细胞总数 死细胞总数)×100%。通过胰岛素释放实验检测胰岛活性:胰岛素释放指数=第3小时(高糖环境)的胰岛素含量/第2小时(低糖环境)的胰岛素含量。②胰岛移植效果的观察:受体SD大鼠腹腔内注射链脲霉素,非禁食状态下2次血糖>16.7mmol/L确定为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠按随机数字表法分为两组,即胰岛移植组和糖尿病组,每组8只。胰岛移植组于肾被膜下注射约1000个胰岛,糖尿病组注射相应体积的1640培养液,再随机取8只血糖浓度≤5.5mmol/L的SD大鼠作为正常对照组。术后每天检测大鼠血糖,以非禁食血糖小于11.1mmol/L者视为胰岛移植存活。胰岛移植组大鼠血糖正常3d后对胰岛移植组、糖尿病组和正常对照组大鼠分别进行静脉糖耐量试验,测定0,15,30,60,90及120min血糖。主要观察指标:胰岛的纯度、存活率及活性。结果:纳入受体SD大鼠24只,全部进入结果分析,无脱失。①平均每只大鼠胰腺可获得(1150±141)个胰岛,纯度>95%,存活率>98%,胰岛形态完好。②体外胰岛素释放实验低、高糖组的胰岛素释放量为(70.5±6.9)mIU/L,(321.4±11.6)mIU/L,胰岛素释放指数为4.60±0.52,提示所提取的胰岛β细胞有良好的功能。③胰岛移植组大鼠胰岛移植当天血糖既开始下降,3d后血糖下降至正常,维持正常血糖水平(6±2)d;而糖尿病组大鼠血糖均在16.7mmol/L以上。胰岛移植组静脉葡萄糖耐量试验曲线与正常对照组相似。结论:经原位灌注法分离、Ficoll密度梯度离心纯化的胰岛制备技术可以获得高纯度和活力良好的大鼠胰岛细胞。     

胶原酶消化时间及质量浓度对大鼠胰岛细胞分离的影响

背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能.目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案.设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放车总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成.材料:胰岛细胞供体为SD大鼠.将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L及2.0 g/L组,每组8只.方法:每组前4只动物.采用0.5,1.0,1.5,2.0 9/L 4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10 min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定最适合获取胰岛量最多的时间点.随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的最佳浓度.主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶最佳质量浓度及消化时间.结果:分忻后确定各组胰岛细胞最佳获取时间,胶原酶0.5 g/L组50 min,胶原酶1.0 g/L组40 min,胶原酶1.5 g/L及2.0 g/L组均为30minm.胶原酶0.5 g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶1.0 g/L.1.5 g/L及2.0 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L及1.5 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果.     

异种胰岛细胞移植进展

近年来随着胰岛细胞移植技术在欧美地区的逐渐成熟和临床应用的发展[1,2],胰岛移植有望成为治疗糖尿病的根本方案,但困扰胰岛移植的两个主要问题仍然存在：胰岛细胞来源不足与移植后的免疫排斥反应。现就当前异种胰岛细胞移植的研究进展简要综述如下：     

猪体外冠状动脉管壁高分辨MR成像

目的 利用1.5T MR扫描仪寻求简单易行的体外冠状动脉管壁成像程序.方法 对10个猪心行冠状动脉MR检查.以3D FIESTA序列行前降支成像,分别选择8通道头部线圈、膝关节线圈、颞下颌关节表面线圈行2D SE T1WI, 成像参数均相同,之后用颞下颌关节表面线圈,采用384×256和512×512的矩阵行T1WI.注入对比剂后,分别使用不同的NEX行SE T1WI、PDWI和frFSE T2WI.测量前降支近段管壁、管腔、前降支周围心外膜下的脂肪结缔组织、前降支邻近的室间隔心肌的信号强度,并测量周围空气的信号强度作为背景噪声,计算图像的信噪比(SNR)和冠状动脉管壁对管腔的对比噪声比(CNR1)及冠状动脉管壁对周围心外膜下脂肪结缔组织的对比噪声比(CNR2).结果 颞下颌关节表面线圈成像前降支管壁SE T1WI的SNR和CNR1、CNR2明显高于8通道头线圈和膝关节线圈.384×256矩阵所得的SE T1WI的SNR和CNR1、CNR2明显高于512×512矩阵.NEX为3时图像的SNR和CNR1、CNR2最高.结论 选择颞下颌关节表面线圈、384×256的矩阵、3个NEX可以得到良好的SNR和CNR.     

中国已自主研究掌握成人胰岛细胞移植新技术

新华社福州11月13日消息，中国已自主研究掌握成人胰岛细胞移植新技术。     

胰岛细胞移植过程中影响细胞活性的相关因素

目的：探讨胰岛细胞移植过程中胰腺的切取方法、冷缺血时间、组织相容性对于胰岛细胞活性的影响。 方法：实验于2001-09／2005-01在南方医科大学附属珠江医院完成。高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经主动脉原位灌注后，探讨肝、肾、胰腺联合及分别切取情况；测定不同的冷缺血时间条件下胰岛细胞活性的变化；体外培养胰岛细胞和血液供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系。 结果：④对于胰腺、肾脏联合切取，肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取顺利，在冷缺血时间5h以内胰岛细胞活性率都在80％，各方法之间无明显差别。②胰腺与肾脏经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液原位灌注满意，胰岛细胞的活性与冷缺血时间呈负相关，冷保存指数和胰岛细胞活性呈正相关。③人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中，胰岛将诱发一个迅速血小板激活和消耗，中性粒细胞和单核细胞也被消耗，加入肝素后这种反应明显减轻。 结论：腹主动脉进行原位灌注后，用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性；经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液保存的胰腺的冷缺血时间不易超过5．0～6，0h；胰岛细胞移植入血后，都将引发血细胞的类似炎症反应；HIA配型有助于提高移植后胰岛细胞的存活。     

脑星形细胞肿瘤的MR灌注成像和病理分级对照研究

目的研究MR灌注成像(PWI)在脑星形细胞肿瘤术前分级中的应用价值.方法对28例脑星形细胞肿瘤病人行MR PWI,低级别星形细胞瘤9例,间变型星形细胞瘤12例,胶质母细胞瘤7例.依次行常规MRI及MR PWI,首先得到信号强度-时间曲线,并合成相对脑血流容积(rCBV)图,计算出最大rCBV比率.结果三组最大rCBV比率分别为(3.23±0.97), (5.23±0.33),(6.09±0.70),三组之间比较均有显著性差异.结论 MR PWI能有效地在术前评价星形细胞肿瘤的病理级别.     

胰岛细胞移植过程中细胞受损的提示

背景:胰岛移植后可能发生有害的组织不相容性反应,影响细胞的存活及功能.目的:探讨胰岛细胞移植中早期胰岛细胞的损害程度及原因.方法:采用脑死亡自愿捐赠器官供者的胰腺,采用胶原酶P进行消化分离胰岛细胞,测定不同冷缺血时间下胰岛细胞损害程度.将胰岛细胞与血液进行分组培养,HLA匹配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素:错配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素;对照组:受者伞血+RPMI1640.观察移植早期可能出现的胰岛细胞损害.结果与结论:胰腺切取顺利,在冷缺血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,超过8 h活性胰岛细胞数量只有19%甚至更低.人胰岛暴露于未经抗凝的人血液中,胰岛将诱发一个迅速血细胞消耗.血小板、中性粒细胞和单核细胞计数显示,无论HLA错配还是匹配与对照组相比较血细胞都发牛明显的消耗:加入肝素后HLA错配组及HLA匹配组血细胞消耗反应明显减轻;HLA匹配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量高丁HLA错配组(P<0.05),说明良好组织相容性有利于胰岛细胞存活.结果提示冷缺血时间对胰岛细胞活性的影响很大,在冷缺血时间小于5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞移植的胰腺获取;移植到血液的胰岛细胞会有普遍性的炎症性损害及HLA相关性损害.     

SPIO标记脂肪干细胞移植治疗大鼠脑梗死的磁共振示踪成像研究

目的通过采用多聚左旋赖氨酸（PLL）与超顺磁氧化铁纳米微粒（SPIO）的复合物对脂肪干细胞（ADSCs）体外进行标记,观察SPIO标记ADSCs脑内移植治疗大鼠脑梗死的分布和迁徙情况。方法显微镜下直接结扎大脑中动脉方法制备大鼠脑梗死模型36只,随机分成缺血未干预对照组（12只）、磁性标记ADSCs移植组（12只）和未磁性标记ADSCs移植组（12只）,采用立体定向方法脑内移植。对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,病理组织化学染色观察ADSCs在体内的分布情况,并用磁共振成像的方法在体观察ADSCs的分布,并与病理结果进行对比。结果移植后3周神经系统行为学评分显示移植组动物明显改善,ADSCs脑内移植后3周MRT2WI显示移植区低信号改变并通过胼胝体向病灶迁移。病理组织检查显示磁共振低信号改变区可见普鲁士蓝染色阳性细胞。结论移植ADSCs可以有效地促进大鼠脑梗死后神经行为功能的恢复,MRI可用于在体评价经SPIO和PLL复合物标记的ADSCs细胞移植后在体内的分布、迁移过程。     

磁标记大鼠肾脏骨髓间充质干细胞移植MR成像研究

目的对移植入大鼠正常肾脏的Fe2O3-PLL标记MSCs进行MR成像并探讨其成像技术。方法分离培养大鼠骨髓MSCs,Fe2O3-PLL标记细胞。将标记和未标记细胞经左肾动脉移植入大鼠肾脏,移植后即刻,第1、3、5、8天应用MRI对移植细胞进行活体示踪并与肾脏组织切片对照。结果MSCs的Fe2O3-PLL标记率近100%。标记细胞移植后T2WI肾脏皮质区信号强度明显下降,持续至移植后第8天。组织学分析见绝大多数标记细胞分布于肾小球内。结论1.5T磁共振仪可对移植入正常肾脏的Fe2O3-PLL标记细胞进行活体成像,T2WI信号变化最明显。     

磁共振在体研究成体神经发生的进展

近年来,成体脑内神经发生的研究越来越受到关注。MR已成为在体研究成体神经发生的重要技术之一。本文针对MR在体研究成体神经发生的进展进行综述。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的磁共振成像研究

目的明确顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)体外标记兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的适当浓度和不同标记浓度对细胞的生物学活性影响,以及经MR成像的特征和可成像的最低标记细胞量等。方法分离、纯化、培养兔MSCs,体外不同浓度SPIO标记,荧光显微镜观察铁颗粒在细胞内的位置、不同标记浓度下的最佳孵育时间、不同标记浓度细胞形态的改变、细胞内铁颗粒的分布及标记率;测量并绘制未标记细胞和标记细胞的MTT生长曲线;选取适当浓度标记量,对不同细胞量组进行标记后MR成像,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析。结果标记后的铁颗粒均位于细胞质内;20～50μgFe/ml培养液是SPIO标记干细胞的适当浓度阈值,超过50μgFe/ml培养液浓度可使细胞的变形增殖能力受到不同程度的抑制;在此浓度阈值标记后孵育18～24h即可有效标记细胞97%～100%;细胞对铁颗粒的吸收与细胞的数量、标记浓度和孵育时间呈正相关;SPIO标记的MSCs在T2WI尤其是FFE(T2WI)序列信号明显降低;在35μgFe/ml培养液标记浓度下,MR可成像的最低细胞量为5×104;35μgFe/ml培养液浓度时,标记细胞1×105和5×104MR成像可使T2WI、FFE图像信号均降低,而且没有使靶灶扩大的磁敏感伪影。结论SPIO可以简便标记MSCs并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,MRT2WI和T2WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞。     

磁共振扩散加权成像在胰腺癌诊断中的价值

目的 探讨磁共振扩散加权成像(DWI)及相应的表观扩散系数(ADC)在胰腺癌诊断中的价值.方法 正常对照组25例,临床及影像学证实的急性胰腺炎患者26例,经手术病理证实或临床随访证实胰腺癌患者23例,在上腹部常规序列扫描后行DWI成像.比较T1WI、T2WI及DWI序列上癌组织相对于癌周组织的信号强度比(signal ...     

大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像

目的描述超顺磁氧化铁(SPIO)颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对细胞的影响及MR成像特点,评价其标记效果。方法分离、纯化并培养大鼠BMSCs,使用多聚赖氨酸(PLL)对细胞进行SPIO(50μgFe/ml,48h)标记,采用普鲁士蓝染色、细胞内铁含量检测等评定SPIO标记BMSCs的效率;通过台盼蓝染色、二甲基亚砜比色法检测细胞活力和增殖情况,通过Hoechst染色观察细胞凋亡情况,评价SPIO是否影响BMSCs的生物学特性;并对标记的BMSCs进行MR成像(序列:T1SE、T2FSE及T2*GRE)。结果细胞标记率达100%,标记细胞铁含量明显高于未标记细胞;细胞活力、增殖、周期和凋亡检测显示标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);MR成像显示标记细胞数目大于5×103个细胞时,3个序列图像均能够观察到信号变化,以T2*WI最为明显。结论大鼠BMSCs可以被SPIO(50μgFe/ml,48h)有效标记,且对细胞的生物学特性无明显影响;1.5TMR能够在体外观察到标记后的细胞。     

3.0T磁共振扩散加权成像诊断胰腺癌

目的 探讨3.0T MR扩散加权成像及其表观扩散系数(ADC值)对胰腺癌的诊断价值.方法 对经手术病理证实的胰腺癌患者30例及对照组30例行DWI检查(b值＝800 s/mm~2),测量肿瘤组织、瘤周组织及对照组正常胰腺组织的 ADC值,并对所得结果进行统计学检验.结果 ①肿瘤组织、瘤周组织和正常胰腺组织的平均ADC值分别为(1.494±0.273)×10~(-3) mm~2/s、(1.631±0.281)×10~(-3) mm~2/s和(1.778±0.237)×10~(-3) mm~2/s.单因素方差分析显示肿瘤组织与正常胰腺组织间差异有统计学意义,而肿瘤组织与瘤周组织间平均ADC值差异无统计学意义.②以肿瘤组织平均ADC值95%可信区间的上限(1.622×10~(-3) mm~2/s)作为诊断胰腺癌的上限阈值点,诊断的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值分别为73.33%、86.67%、80.00%、84.62%、76.47%,ROC曲线下面积Az=0.800.结论 胰腺癌组织与正常胰腺组织间平均ADC值差异具有统计学意义,测量ADC值对于诊断胰腺癌具有一定帮助.     

SPIO分子探针标记裸鼠肺腺癌移植瘤的磁共振成像及病理学初步研究

目的建立应用超顺磁性氧化铁(SPIO)分子探针氨基硅烷Fe3O4纳米颗粒标记人肺腺癌的裸鼠移植瘤模型,行磁共振成像和病理观察,探讨其临床价值.方法制备氨基硅烷Fe3O4纳米颗粒,分别将标记和未标记肺腺癌细胞株植入裸鼠皮下,观察其成瘤情况,行MR扫描和病理观察.结果标记及未标记纳米分子探针SPIO的肿瘤模型均成功建立,其中前者肿瘤较后者在MR成像中信号强度有明显变化,在T1WI、T2WI、FGR/20°和FGR/70°四个序列中,以FGR/20°变化最明显.病理切片普鲁士兰染色可见肿瘤细胞及坏死组织内有铁染色.结论氨基硅烷Fe3O4纳米颗粒标记人肺腺癌细胞建立裸鼠移植瘤模型稳定可靠,应用磁共振可以对其进行活体监测,提示在临床上具有良好的潜在性应用前景.     

利用颅脑射频线圈进行大鼠磁共振成像

目的 研究3.0T磁共振成像系统中大鼠脑部射频线圈.方法 提出一种设计线圈结构的方案,采用高等于直径的鞍型线圈,研究直径为5 cm的大鼠脑部线圈减小电容和分布电容,可使线圈带宽减小,提高线圈品质的因素(Q).将线圈与人体头部线圈和体部线圈分别对自制的模型利用同一序列进行扫描,对三组图像选择同一位置的图像,比较各线圈的信噪比(SNR).观察图像的质量,应用大鼠颅脑模型分别进行轴位、矢状位和冠状位T1W FLAIR或T2W扫描.结果 线圈的SNR比现有的头部线圈高5倍以上.大鼠图像能很好地显示脑室结构,可清楚分辨脑部的灰质和白质.结论 利用所设计的线圈可获得具有很高SNR的图像,在大鼠脑部影像研究中取得了很好的效果.