拓扑异构酶——癌化疗的新靶

一类具有调节DNA三维结构的核酶称为DNA拓扑异构酶(Topoisomerases),它们在细胞的翻译、转录和有丝分裂的生命过程中起重要作用。抗癌药蒽环类、鬼臼霉素类和吖啶类干扰这些酶,尤其是干扰TopoⅡ酶的活性。DNA—拓扑异构酶Ⅱ复合物是酶活性的中介体,其如果被药物所稳定则形成一种“断裂复合物”而显示药物的细胞毒作用。 拓扑异构酶有二型,即TOPOⅠ和TOPOⅡ。TOPOⅠ酶是分子量为100KD的单体,它能断裂一条     

灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡

目的 :研究中华灵芝宝的抗肿瘤作用机理。方法 :DNA超螺旋解旋法检测中华灵芝宝对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ (TOPOⅠ、Ⅱ )活性的影响 ;琼脂糖凝胶电泳检测其对DNA的直接打断作用及诱导K5 6 2细胞凋亡的能力。结果 :中华灵芝宝能抑制TOPOⅠ、Ⅱ的活性 ,促进DNA的解旋、断裂 ;同时还能直接打断质粒和大分子DNA ;作用于K5 6 2细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带。结论 :中华灵芝宝能同时抑制TOPOⅠ、Ⅱ活性 ,直接打断质粒和大分子DNA ,并能诱导K5 6 2细胞凋亡。     

羟基喜树碱为主化疗方案治疗晚期胃癌的临床观察

DNA复制过程中进行解螺旋时必须有拓扑异构酶的参与,该酶在癌组织中的含量明显高于正常组织。HCPT(羟基喜树碱)为细胞周期特异性药物,主要作用于S期细胞,DNA拓扑异构酶Ⅰ(TOPOⅠ)是其作用靶点。我们自1999年10月以来用HDLF(HCPT、DDP、CF、5Fu)方案治疗62例晚期胃癌,现报告如下。 一、资料与方法 1.病例选择:1999年10月～2001年10月本组共62例,其中男性40例,女性22例。年龄32～72岁,中位年龄56     

DNA拓扑异构酶抑制剂与抗癌作用(摘要)

自七十年代发现了一类能控制和改变DNA拓扑异构状态(三维结构)的酶,称为DNA拓扑异构酶(DNAT、opoisomerases)。按其在反应中暂时断裂一条或二条DNA链的不同,可分为Ⅰ型和Ⅱ型DNA拓扑异构酶。这类酶在DNA的复制和转录过程中起着非常重要的作用,它们控制DNA     

拓扑异构酶抑制剂治疗白血病的研究进展

 DNA拓扑异构酶是参与细胞基本活动的重要核酶,其抑制剂主要通过形成"DNA-药物-酶"三聚复合物干扰DNA的复制发挥抗肿瘤作用。重点阐述以拓扑异构酶Ⅰ为靶点的新药在白血病治疗中应用现况、拓扑异构酶表达水平与临床疗效及预后的关系和白血病细胞对拓扑异构酶抑制剂产生耐药的发生机制等方面研究进展。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ的影响

背景与目的:华蟾素注射液是传统抗肿瘤中药制剂,目前药效机制尚不明确.本研究旨在探讨华蟾素注射液对DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoisomerase Ⅰ,TOPO Ⅰ)的影响.方法:采用噻唑蓝还原法(MTT)观察华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测对HepG-2细胞周期的影响;采用RT-PCR法检测对HepG-2细胞TOPO Ⅰ mRNA表达的影响;采用TOPO Ⅰ介导的负超螺旋PBR322 DNA解旋反应检测华蟾素对TOPO Ⅰ酶活性的影响;采用负超螺旋PBR322 DNA检测华蟾素对DNA的直接抑制作用.结果:华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;并将HepG-2细胞阻滞于S期;RT-PCR检测表明,华蟾素注射液可下调TOPO Ⅰ mRNA表达,表现浓度依赖效应;对TOPO Ⅰ介导的负超螺旋PBR322 DNA解旋反应有抑制作用:对负超螺旋PBR322 DNA没有直接抑制作用.结论:华蟾素注射液能够抑制HepG-2细胞增殖,影响DNA拓扑异构酶Ⅰ酶的mRNA表达及活性可能为机制之一.     

DNA拓扑异构酶Ⅱ在妇科恶性肿瘤中的研究进展

DNA拓扑异构酶Ⅱ(DNA topoisomerase Ⅱ，Topo Ⅱ)是生物体内广泛存在的一类核蛋白，通过调节核酸结构动态变化，在DNA复制、修复、转录、重组以及染色体分离等生命活动中发挥重要作用；同时，Topo Ⅱ与肿瘤的发生发展、治疗及预后也有密切关系。本文重点就近年来TopoⅡ与妇科恶性肿瘤的研究进展做一综述。     

榄香烯联合热疗对Raji细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:观察榄香烯(elemene,ELE)联合热疗(hyperthermia,HTM)对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞增殖及DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ(TOPOⅠ,TOPOⅡ)表达的影响。方法:采用噻唑蓝还原法(MTT)观察ELE联合HTM对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达;Western Blot法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡ蛋白表达。结果:与单纯HTM和单纯ELE比较,ELE联合HTM对Raji细胞增殖的抑制作用增强(P<0.05),呈时间和剂量依赖性,而ELE联合HTM作用Raji细胞24h、48h和72h后,IC50值(93μg/ml、68μg/ml和41μg/ml)小于单纯ELE IC50值(116μg/ml、84μg/ml和60μg/ml);ELE联合HTM阻滞Raji细胞于S期[(35.40±1.27)%、(42.38±2.50)%VS(48.88±1.93)%,P<0.05],并下调TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA及蛋白的表达。结论:ELE联合HTM可增强对Raji细胞增殖的抑制作用,下调TOPOⅠ、TOPOⅡ表达可能是其机制之一。     

国产盐酸拓扑替康对小细胞肺癌疗效的初步研究

盐酸拓扑替康（ topotecan）是具有抑制拓扑异构酶Ⅰ活性的抗肿瘤新药。其作用机制是拓扑异构酶Ⅰ可诱导 DNA单链可逆性断裂，使 DNA螺旋链松解。盐酸拓扑替康与拓扑异构酶Ⅰ -DNA复合物结合并阻止这些单股断链的重新连接，其细胞毒作用是在 DNA的合成中。盐酸拓扑替康、拓扑异构酶 I和 DNA形成的三元复合物与复制酶相互作用产生双股 DNA的损伤，而哺乳动物的细胞不能有效地修复这些双股 DNA链的中断。国外研究表明盐酸拓扑替康对多种肿瘤有效 [1～ 3]，本研究采用国产盐酸拓扑替康对小细胞肺癌的疗效进行临床研究，报告如下。     

拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与肿瘤耐药的相关性研究进展

TOPO Ⅰ是调节核酸拓扑构型的关键酶,已成为重要的抗癌药物研究新靶点。肿瘤对细胞TOPOⅠ抑制剂产生耐药是一个相当复杂的细胞生理化过程,也是化疗失败的重要原因。喜树碱类药物是经典的TOPO Ⅰ抑制剂,一些非喜树碱类TOPO Ⅰ抑制剂也见报道。     

榄香烯对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶Ⅰ的影响

背景与目的:榄香烯(elemene,ELE)是传统抗肿瘤中药制剂,目前药效机制尚不明确.本研究旨在探讨ELE对人肝癌HepG-2细胞增殖及DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoisomerase Ⅰ,TOPO Ⅰ)的影响.方法:采用四甲基偶氯唑蓝还原法(MTT)观察ELE对HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测ELE对HepG-2细胞周期的影响;采用RT-PCR法检测ELE对HepG-2细胞TOPO Ⅰ mRNA表达的影响;采用TOPO Ⅰ介导的负超螺旋PBR322DNA 解旋反应检测ELE对TOPO Ⅰ酶活性的影响;采用负超螺旋PBR322DNA检测ELE对DNA的直接抑制作用.结果:ELE能抑制HepG-2细胞增殖,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期,呈剂量依赖性;下调TOPO Ⅰ mRNA表达,呈剂量依赖特性;对TOPO Ⅰ介导的负超螺旋PBR322DNA解旋反应有抑制作用;对负超螺旋PBR322DNA没有直接抑制作用.结论:ELE能够抑制HepG-2细胞增殖;影响TOPO Ⅰ的表达及活性可能是其作用机制之一.     

抗VEGF抗体诱导K562细胞凋亡及其机制的研究

目的 观察抗VEGF抗体对K562细胞凋亡的影响,探讨VEGF抑制白血病细胞凋亡的机理.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测抗VEGF单抗对拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）表达的影响;采用低浓度溴乙啶荧光测定法检测细胞TOPOⅡ的活性;应用琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡的情况.结果 抗VEGF抗体能抑制K562细胞TOPOⅡ的表达,降低TOPOⅡ的活性,促进DNA解旋、断裂;抗VEGF单抗作用于K562细胞后,电泳结果显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带.结论 抗VEGF单抗能引起白血病细胞凋亡,其原因可能是抗VEGF单抗抑制了白血病细胞TOPOⅡ基因的表达.     

核基质成分-拓扑异构酶Ⅱ与肿瘤耐药

DNA拓扑异构酶(topoisomerase,Topo)是核基质成分之一,是一种调整DNA拓扑结构的核酶,在DNA的复制和转录过程中发挥着重要作用,故而成为许多抗肿瘤化疗药物的靶.针对Topo Ⅱ的抗肿瘤化疗药物同样面临着耐药问题.简要综述了近年来Topo Ⅱ与肿瘤耐药关系方面的研究进展.     

肿瘤化疗的重要靶点—DNA拓扑异构酶

DNA 拓扑异构酶是近年来新发现的肿瘤化疗的重要靶点,它涉及到抗癌药作用的许多环节,如 DNA 复制、DNA 损伤与修复、基因的重组和转录、细胞有丝分裂及分化等。本文列举了一些临床上广泛使用的以 DNA 拓扑异构酶为靶点的化疗药物,着重介绍了拓扑酶抑制剂作用的分子基础及其与耐药的关系。事实证明拓扑酶抑制剂能促进酶介导的 DNA 切割复合物的形成,阻断正常基因及癌基因的表达。另一方面,对拓扑酶抑制剂耐药的细胞常表现为酶活性及酶量的下降,这种变化与拓扑酶基因的突变有关。     

CPT-11在妇科肿瘤中的应用

盐酸喜树碱 ( Irinotecan hydrochloride,以下简称 CPT- 1 1 )是从喜树中提取的一种半合成水溶性生物碱的衍生物。于 1 950年被发现对癌细胞有细胞毒作用。目前经过大量临床试验证明了它对转移性结肠癌、卵巢癌、进展期宫颈鳞状上皮癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、黑素瘤、小细胞肺癌等具有一定的疗效。CPT- 1 1是一种拓扑异构酶 抑制剂 ,同类药物还有拓扑特肯、9-氨基喜树碱等。拓扑异构酶是DNA复制中必需的酶。 DNA复制双螺旋打开过程中 ,在复制叉附近的未复制的 DNA单链上造一个切口 ,使未复制的 DNA单链中小一部分围绕另一条没有切…     

DNA嵌入剂和DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂与抗癌作用的关系——介绍两种抗癌药物的筛选方法

本文介绍两种抗癌药物的筛选方法。实验表明,对pBR322 DNA能起嵌入和断裂作用或对DNA拓扑异构酶Ⅱ有抑制作用的化合物可能具有抗癌作用。吖啶衍生物9-(2-4-二氯苯氧乙酰氨基)吖啶,9-(2-4-5-三氯苯氧乙酰氨基)吖啶和9-(对-氯苯氧乙酰氨基)吖啶对pBR322 DNA能起嵌入和断裂作用。它们对体外生长细胞显示强力的细胞毒作用。山茶A和山茶C化合物对拓扑异构酶Ⅱ有强力的抑制作用,对体外培养细胞亦具有细胞毒作用。     

以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的一种抗癌药筛选的新方法

借鉴文献方法,我们以小鼠L_(1210)白血病细胞为村料,提取DNA拓扑异构酶Ⅱ,鉴别了其生物学特性,并观察了十多种已知及未知的抗癌药物对其活性的影响,初步建立了以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的新抗癌药筛选方法。实验表明DNA拓扑异构酶Ⅱ对DNA链切割反应是可逆的,并且高浓度的氯化钠对其活性有抑制作用。许多药物能促进拓扑酶Ⅱ引起的DNA链断裂如ADM、DNR、Vp16及ACM—B等,而另一些药物如萜类化合物BC_1、BC_4等则能抑制链断裂反应。     

核基质成分-拓扑异构酶II与肿瘤耐药

DNA拓扑异构酶 (topoisomerase ,Topo)是核基质成分之一 ,是一种调整DNA拓扑结构的核酶 ,在DNA的复制和转录过程中发挥着重要作用 ,故而成为许多抗肿瘤化疗药物的靶。针对TopoII的抗肿瘤化疗药物同样面临着耐药问题。简要综述了近年来TopoII与肿瘤耐药关系方面的研究进展     

孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病相关性研究的现状

目的:探讨黄酮类化合物作为DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂以及孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病间的关系.方法:应用PubMed、万方和维普科技期刊数据库检索系统,以“黄酮类化合物、白血病和拓扑异构酶Ⅱ抑制剂”为关键词,检索1987-01-2012-09的相关文献,共检索到英文文献7条,中文文献0条,以任意2个关键词搜索,共检索到英文文献1 445条,中文文献108条.纳入标准:1)黄酮类化合物的基本资料介绍.2)婴幼儿白血病的基本资料介绍.3)拓扑异构酶及拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的基本资料介绍.4)拓扑异构酶Ⅱ抑制剂与白血病的关系.5)黄酮类化合物与婴幼儿白血病的关系.根据纳入标准精选46篇文献,最后纳入分析32篇.结果:黄酮类化合物广泛存在于日常食物中,对人类健康有许多积极作用.但是,黄酮类化合物作为拓扑异构酶Ⅱ抑制剂也存在遗传毒性、细胞毒性,某些实体瘤患者在应用DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂治疗后可继发白血病,其细胞遗传学异常多与原发急性髓系白血病(AML)有关,其中最常见的是位于染色体11q23的混合系白血病(MLL)基因异位.孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿某种类型白血病的发生风险增高有一定的关系.在急性婴幼儿白血病患者中,＞80％都包括位于染色体11q23的MLL基因异位或异常重组.样本量均超过200例的5个病例对照研究显示,孕期摄入大量含DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的食物(主要为含黄酮类化合物的水果和蔬菜等)后,MLL重排引起的AML的发病风险增高.结论:了解黄酮类化合物作为DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂以及孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病间的关系,有助于孕妇膳食指导及膳食指南的修订与完善.     

顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响。对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP鄄16联合应用具有协同效应。本研究通过DDP与VP鄄16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP鄄16疗效的作用机制。方法:采用VP鄄16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理。应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP鄄16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率。半定量RT鄄PCR法和Westernblot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平。结果:VP鄄16与DDP合用具有明显的协同效应。两药合用后,细胞凋亡率明显增加。单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/mlDDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5μg/mlVP鄄16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%。5μg/mlVP鄄16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高。TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/mlVP鄄16与30μg/mlDDP联合应用时比单用VP鄄16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%。Western印迹检测结果与RT鄄PCR结果相符。结论:DDP在化疗中与VP鄄16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP鄄16提供更多的靶酶,使VP鄄16杀伤K562细胞效果明显提高。