肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体诱导人胶质瘤细胞U87的凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-inducing Ligand,TRAIL)诱导胶质瘤细胞凋亡的机制。方法 以人重组可溶性TRAIL蛋白(human recombinant soluble TRAIL,rsTRAIL)处理人胶质瘤细胞U87;用AnnexinV-FITC-PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;用DiOC6荧光染色流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm);比色法测定细胞Caspase-3、8、9活性的变化;ELISA法检测胞浆cyt C浓度;观察Caspase-8阻断剂(Z-IETD-fmk)对U87细胞凋亡、ΔΨm和Caspase-3、8、9活性变化的影响。结果 rsTRAIL以时间依赖方式诱导U87细胞凋亡,同时导致U87细胞ΔΨm进行性下降、Caspase-3、8、9活性及胞浆内cyt C浓度的升高;Caspase-8阻断可明显减弱rsTRAIL对U87细胞的上述生物学效应。结论 TRAIL通过激活caspase-8间接启动线粒体凋亡途径诱导恶性胶质瘤细胞U87凋亡。     

20008/肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体联合美伐他汀增加对人胶质瘤细胞SWO-38的抑瘤作用及其机制

目的 研究肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-inducing Ligand,TRAIL)单独或联合美伐他汀(mevastatin)对人胶质瘤SWO-38细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 人胶质瘤SWO-38细胞株以人重组可溶性TRAIL蛋白(human recombinant soluble TRAIL,rsTRAIL)、美伐他汀及两者联用处理;用MTT法检测细胞增殖;用双染色流式细胞仪检测细胞凋亡;用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R1/DR4和TRAIL R2/DR5分子表达;RT-PCR方法检测TRAIL R1/DR4和TRAIL R2/DR5 mRNA表达。 结果 rsTRAIL和美伐他汀在单用或联用时均可以抑制SWO-38细胞增殖,并在一定范围内呈时间、剂量依赖性;联合用药组抑制率显著高于单用rsTRAIL或美伐他汀组(P<0.01)。rsTRAIL和美伐他汀在单用或联用时均可以诱导SWO-38细胞凋亡,联合用药组细胞凋亡率显著高于单用rsTRAIL或美伐他汀组(P<0.01)。美伐他汀单独或联合rsTRAIL作用于SWO-38细胞72h后,死亡受体TRAIL R1/DR4和TRAIL R2/DR5在细胞表面的表达明显上调(P<0.01),其mRNA表达水平亦相应增加(P<0.01)。 结论 rsTRAIL与美伐他汀均对人胶质瘤SWO-38细胞具有一定的增殖抑制和凋亡诱导效应,而两者联合使用可以增强这种抗瘤效应,其机制可能是美伐他汀增加SWO-38细胞TRAIL R1/DR4和TRAIL R2/DR5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加其对rsTRAIL的敏感性。     

白藜芦醇通过Fas-线粒体双途径诱导U-87脑胶质瘤细胞凋亡

目的研究白藜芦醇（Res）对人脑胶质瘤细胞系U-87细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法以人脑胶质瘤细胞系U-87细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性;AnnexinV/碘化丙啶（PI）双标记和细胞形态学法检测U-87细胞凋亡;流式细胞仪（FCM）检测细胞Fas蛋白表达水平、线粒体跨膜电位（Δψm）、细胞色素C（Cytc）释放和Caspase-3活性变化。结果Res明显抑制U-87细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性（P〈0.01）;20μmol/L和40μmol/LRes处理U-87细胞,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,细胞凋亡率分别为42.57%和62%,同时细胞出现典型的凋亡形态改变;FCM检测显示Fas蛋白表达增高1.6～2.2倍,线粒体Δψm降低15%～63%,胞浆Cytc含量增加2.5～7.3倍,Caspase-3被激活,活性增高25%～112%。结论Res体外明显抑制U-87细胞的增殖,通过Fas-线粒体双途径诱导U-87细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导U87胶质瘤细胞凋亡及caspase-3的激活

目的探讨白藜芦醇(Res)抑制体外脑胶质瘤细胞系U87生长并诱导其凋亡,激活 caspase-3的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制不同浓度Res作用6 h、24 h、48 h后的细胞生长曲线,流式细胞仪Annexin V—FITC和PI双染检测凋亡率,Hoechst 33342荧光染色及透射电镜 (TEM)观察细胞增殖改变:Western-blot分析caspase-3酶原的变化,半定量RT—PCR检测caspase-3 mRNA水平的改变,比色法测定caspase-3的相对活性。结果 Res明显抑制U87细胞的增殖 (P<0．01),呈浓度及时问依赖性反应;Res可诱导U87胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。用不同浓度 Res处理U87细胞24 h,随药物浓度增加,caspase-3酶原的蛋白水平减少,caspase-3 mRNA水平增加 (P<0．01)。用200 μmol／L Res分别处理细胞0．5、2、6、12、24 h,caspase-3活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P<0．01);用不同浓度的Res处理细胞12 h,caspase-3活性呈浓度依赖性的升高(P<0．01)。结论 Res明显抑制U87细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有caspase-3的激活。     

TRAIL联合美伐他汀增强对SWO-38细胞的抑瘤作用及其机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)单独或联合美伐他汀对人胶质瘤细胞SWO-38增殖和凋亡的影响及其作用机制. 方法 人胶质瘤细胞SWO-38分别用人重组可溶性TRAIL蛋白(rsTRAIL)、美伐他汀及两者联用处理;MTT法检测细胞增殖情况;双染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5分子表达;RT-PCR方法检测TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5 mRNA表达. 结果 rsTRAⅡ,和美伐他汀在单用或联用时均可抑制SWO-38细胞增殖,诱导其凋亡,并在一定范围内呈时间、剂量依赖性;联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单用rsTRAIL或美伐他汀组,比较差异有统计学意义(P<0.05).美伐他汀单独或联合rsTRAIL作用于SWO-38细胞72 h后,死亡受体TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5在细胞表面的表达明显较对照组细胞增强,其mRNA表达水平亦相应增加,比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 rsTRAIL与美伐他汀联合使用可增强对人胶质瘤细胞SWO-38的增殖抑制和凋亡诱导效应,其机制可能是美伐他汀增加SWO-38细胞TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加其对rsTRAIL的敏感性.     

人突变型TRAIL体外诱导脑恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的观察人突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)体外诱导人脑胶质瘤细胞的凋亡作用。方法设计90个碱基突变的人TRAIL全长基因,分四段合成,然后拼接获得全长寡核苷酸,插入原核表达载体pGEX-2T,转化E.coliDH-5α,丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析法分离、纯化融合蛋白,凝血酶切得到单纯的TRAIL蛋白。MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物体外对人A172、U87、U251和鼠C6脑恶性胶质瘤细胞的凋亡作用。结果突变型TRAIL原核表达产物为可溶性,体外可明显诱导人A172、U87、U251脑胶质瘤细胞凋亡,而对C6鼠胶质瘤细胞无明确的凋亡诱导作用。结论原核表达突变型TRAIL在体外具有明显诱导脑胶质瘤细胞凋亡的作用。     

TRAIL与硝普钠联合诱导胶质瘤细胞株U251凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)与硝普钠(SNP)联合诱导U251细胞凋亡的协同作用.方法 将TRAIL和SNP单药或联合作用于U251胶质瘤细胞系.MTT比色法、流式细胞术检测细胞生长抑制率、凋亡率;Western blot法检测DR5、Caspase-3、Bcl-2、Survivin 蛋白表达.结果 TRAIL和SNP单药组对U251细胞活性均有抑制作用;联合作用组细胞凋亡率明显高于单药组和对照组(P＜0.01),并存在协同作用;联合作用组较对照组DR5、Caspase-3蛋白表达明显上调,Survivin、Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 TRAIL和SNP可显著抑制U251细胞增殖,具有协同细胞凋亡诱导作用.其机制与上调DR5、Caspase-3,下调Bcl-2、Survivin 蛋白表达有关.     

Notch受体阻断剂MW167抑制U87胶质瘤细胞增殖的作用研究

目的 探讨Notch受体阻断剂MW167对胶质瘤细胞系U87增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MW167对体外培养的胶质瘤细胞系U87的增殖抑制作用.流式细胞仪AnnexinV-FITC和PI双染检测凋亡率.结果 MTT法检测显示MW167能明显抑制U87细胞的增殖并呈剂量依赖关系:流式细胞仪检测显示MW167可诱导U87胶质瘤细胞发生凋亡并呈剂量依赖关系.结论 MW167明显抑制U87胶质瘤细胞的增殖并诱导其发生凋亡,提示Noah受体阻断剂MW167对人脑胶质瘤的治疗具有潜在的临床应用价值.     

华蟾素诱导人胶质瘤U87细胞凋亡的作用机制研究

目的 探讨华蟾素(Cinobufacini)对人胶质瘤U87细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U87细胞分为对照组、华蟾素组(依华蟾素水平不同分为3个亚组),MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤U87细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平。结果 华蟾素对胶质瘤U87细胞增殖有抑制作用; 流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测显示,随着华蟾素作用浓度的递增,胶质瘤U87细胞凋亡率呈剂量依赖性递增; 华蟾素作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平升高。结论 华蟾素通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平来抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进其凋亡。     

miR -21抑制替莫唑胺诱导U87细胞凋亡的体外实验研究

目的 探讨miR -21过表达在替莫唑胺诱导胶质瘤U87细胞凋亡中的作用及其机制.方法 miR - 21过表达载体转染U87细胞,Hoechst 33258染色和流式细胞分析凋亡,Westem blot验证Bax和Bcl -2表达及检测Caspase -3活性.结果 替莫唑胺可显著诱导U87细胞凋亡,上调Bax 表达、下调Bcl-2表达及增加Caspase -3活性.U87细胞预转染miR -21过表达载体后,替莫唑胺的这种效应可部分被抑制.结论 miR -21过表达可通过下调Bax/Bcl -2比率及Caspase -3活性部分抑制替莫唑胺诱导的U87细胞凋亡,提示胶质瘤中miR -21过表达可能是胶质瘤对替莫唑胺耐药的一大新的因素.     

TRAIL诱发人脑H4神经胶质瘤细胞凋亡的研究

目的研究TRAIL对H4神经胶质瘤细胞的凋亡诱导作用，并探讨其可能机制。方法利用显微镜、透射电镜、流式细胞仪，观察和检测TRAIL对传代培养的肿瘤细胞的凋亡诱导作用，用MTT法检测easpase-8抑制剂zIETD—fmk对TRAIL凋亡诱导作用的抑制情况。结果TRAIL作用后镜下可见到H4细胞凋亡的典型表现；在流式细胞仪检测PI荧光直方图上，出现典型的亚二倍体峰，随着作用时间的延长，H4细胞凋亡率明显增加；zIETD—fmk能显著抑制TRAIL对H4细胞的凋亡诱导作用。结论TRAIL可有效的诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡；easpase-8在H4瘤细胞的凋亡过程发挥着重要作用，TRAIL可能是通过激活caspase系统而诱发H4瘤细胞凋亡的。     

人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞U87MG凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rh2对胶质瘤细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法 将培养的人胶质瘤细胞U87MG随机分为人参皂甙Rh2组、人参皂甙Rh2+尼莫地平组和对照组。人参皂甙Rh2组在常规培养细胞时加入20 μg/ml的人参皂甙Rh2，人参皂甙Rh2+尼莫地平组在人参皂甙Rh2组培养细胞时加入浓度为10 μmol/L的尼莫地平。利用流式细胞仪检测U87MG细胞凋亡，利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测U87MG细胞内钙离子浓度。结果 与对照组相比，人参皂甙Rh2促进U87MG细胞凋亡（P<0.05），且增加细胞内游离钙离子浓度（P<0.05）；尼莫地平显著减少人参皂甙Rh2引起的U87MG细胞凋亡（P<0.05）。结论 人参皂甙Rh2可以通过增加细胞内游离钙离子浓度促进U87MG细胞凋亡。     

利福平对鱼藤酮诱导的分化PC12细胞线粒体损伤的保护作用

目的 探讨利福平(RFP)对鱼藤酮(Rot)诱导的分化PC12细胞活性、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(AWm)及凋亡的影响. 方法 利用Rot诱导的分化PC12细胞建立帕金森病(PD)细胞模型,应用不同浓度RFP(100、200、300 μmol/L)预先干预,分别采用MTT法检测PC12细胞活性、流式细胞仪检测胞内ROS生成量、荧光显微镜和流式细胞仪检测△ψm及凋亡的变化.结果 2.5 μmol/L Rot可使PC12细胞活性降低.ROS生成、△ψm去极化程度和细胞凋亡率增加;100、200、300 μmol/L RFP预处理对上述变化有抑制作用,且浓度越大,作用越明显. 结论 RFP可能通过稳定△ψm、降低细胞内ROS生成来对抗Rot对分化PC12细胞的损伤,且这种作用呈浓度依赖性.     

下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养U87细胞,转染pEGFP-BAG3-shRNA质粒构建BAG3低表达胶质瘤U87细胞株（低表达组）,转染pEGFP-shRNA对照质粒为对照组;利用RT-PCR和免疫印迹法鉴定;利用CCK8和EdU检测U87细胞增殖,利用流式细胞术检测U87细胞凋亡。结果 与对照组相比,RT-PCR和免疫印迹法检测结果显示低表达组BAG3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,低表达组24、48、72 h细胞增殖水平均明显降低（P<0.05）,低表达组细胞凋亡率明显增高（P<0.05）。结论 下调胶质瘤U87细胞BAG3表达显著抑制其增殖、促进其凋亡。