三氧化二砷诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用的研究

背景与目的：胶质母细胞瘤的预后较差，本文旨在观察三氧化二砷（As2O3）诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用，为胶质瘤的诱导分化治疗提供实验依据。方法：低剂量不同浓度的As2O3诱导BT325细胞系3周后．常规HE染色及电镜观察细胞形态学改变，免疫细胞化学染色观察肿瘤分化标记物GFAP，S-100，Vimentin表达的改变，流式细胞仪分析细胞周期时相分布的变化。结果：BT325细胞在As2O3作用3周后，细胞形态类似正常星形细胞，肿瘤分化标志物GFAP，S-100表达均增高，并且呈剂量依赖效应，细胞周期时相分布G0／G1期比例升高，符合诱导分化现象。结论：三氧化二砷以剂量依赖形式诱导BT325细胞分化，是治疗脑胶质瘤的潜在诱导分化剂。     

脑星形胶质细胞瘤增殖与分化

 本文应用免疫组化方法在40例呈形胶质细胞瘤中研究PCNA和GFAP两种标记表达，原位观察与比较瘤细胞的增殖与分化。结果表明脑星形胶质细胞瘤中PCNA与GFAP表达率均为100％，PCNA表达强度与肿瘤分级呈正相关（P＜0．05），GFAP表达强度与肿瘤分级呈负相关（P＜0．01）。提示PCNA与GFAP的表达对于判断脑星形胶质细胞瘤的增殖活性，分化程度及判断肿瘤的恶性程度有一定的价值。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

羟基喜树碱对SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱（HCPT）体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖并诱导其凋亡的作用。方法：体外培养的胰腺细胞以不同浓度的HCPT处理20至24h后,用MTT法测定细胞增殖,以Annexin V早期凋亡检测试剂盒,电子显微镜,流式细胞仪和原位末端标记分析以及bcl-2免疫细胞化学标记分析检测细胞凋亡情况,结果：MTT细胞增殖,在浓度为3．125ug/ml-100ug/ml各组,药物作用24h,后,肿瘤细胞的增殖抑制率显著高于对照线。（2）原位末端标记及流式细胞仪检测,在0．05mg./ml浓度下,作用20h后,肿瘤细胞的凋亡率在13．2－15．3％之间,在0．1mg/ml浓度下,作用20h后,凋亡率在26．1－30．4％之间。（3）电镜及Annexin V荧光检测：在0．05mg/ml浓度下,凋亡以早期表现为主,早期凋亡率约为15％,（4）bcl-2免疫细胞化学表达：经0．05mg/ml浓度作用24h后,bcl-2表达较对照组明显减少,结论：HCT在体外可抑制SW1990细胞的增殖,部分作用机制是诱导细胞凋亡,可作为细胞凋亡诱导剂用于胰腺癌治疗。     

转铁蛋白受体的单克隆抗体 OX26偶联三氧化二砷免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞系的体外抑制作用

目的：探讨转铁蛋白受体单克隆抗体（ OX26）偶联三氧化二砷（ As2 O3）免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞株的体外抑制作用。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,实验分为盐水组,As2 O3（6μmol· L－1）组和OX26偶联As2 O3脂质体（6μmol· L－1）组;采用四唑盐比色法（MTT）,检测OX26偶联As2O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用, DAPI染色观察OX26偶联As2 O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞促凋亡的影响。免疫印迹法检测OX26偶联As2 O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞胶质瘤胶质纤维酸性蛋白（ GFAP ）蛋白表达的影响。结果 MTT比色法检测显示：OX26偶联As2 O3免疫脂质干预对脑胶质瘤生长的抑制率为40．21％,显著高于As2 O3组的25．77％,比较差异有统计学意义（ P＜0．05）;核染显示：与盐水组和As2 O3组比较,OX26偶联As2 O3免疫脂质组脑胶质瘤细胞的光密度和面密度值显著减少,比较差异有统计学意义（P＜0．01）;Westernblot检测显示：OX26偶联As2O3免疫脂质组脑胶质瘤细胞GFAP蛋白的表达较盐水组和As2 O3组少。结论 OX26偶联As2 O3免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞具有明显的体外抑制作用,其作用机制可能与促进脑胶质瘤细胞凋亡和GFAP蛋白的表达相关。     

咖啡因与苯巴比妥联合对顺铂的体外抗癌增效作用

目的：研究咖啡因（CAF）对顺铂（DDP）的抗癌增效作用及苯巴比妥（PBT）是否抑制咖啡因的抗癌增效作用。方法：以SPC－A－1细胞为,要用MTT法研究甲基黄嘌呤类药物－CAF及其与PBT联合应用对DDP的体外细胞毒作用的影响,结果：120ug/ml的CAF及10ug/ml PBT对细胞生长无明显的细胞毒作用,120ug/ml的CAF可明显增强DDP对SPC－A－1细胞的细胞毒作用（P＜0．05）,10ug/ml PBT对DDP无增效作用（P＞0．05）,120ug/ml CAF与10ug/ml PBT的混合物也能增强DDP的细胞毒作用（P＜0．01）,其增效作用与单纯CAF的增效作用比较无显著性差异（P＞0．05）,。结论：咖啡因可明显增强DDP对SPC－A－1细胞的体外抗癌效应,而苯巴比妥对咖啡因的体外抗癌增效作用无拮抗作用,提示苯巴比妥作为降低咖啡因副反应的成分,有可能与咖啡因联合作用作为化疗增效剂用于肺癌治疗。     

苯丁酸钠对BT325细胞的生长抑制和分化诱导

目的研究非毒性分化诱导剂苯了酸钠（phenylbutyrate，NaPB）在体外对人脑胶质细胞瘤BT325细胞的生长、分化的影响。方法应用形态学观察法、MTT分析法、流式细胞仪对在体外经不同浓度的NaPB处理过的BT325细胞进行检测。结果1．电子显微镜观察，在NaPB处理过的BT325细胞中，线粒体、内质网、弹力丝丰富，而在NaPB未处理的细胞中，有大量游离核糖体，上述细胞结构却未能观察到；2．NaPB在2mM时就能明显抑制BT325细胞的生长．并且有时间依赖关系及剂量依赖关系；3．应用流式细胞仪测定发现，经NaPB处理的细胞其S期在11．99％或13．17％．而未经处理的细胞其S期在20．17％。结论NaPB在体外不仅能够抑制人脑胶质细胞瘤的生长，而且能诱导细胞的分化，为NaPB分化治疗胶质瘤提供了实验依据。     

地塞米松对人胶质瘤细胞系诱导分化作用的初步观察

目的：探讨地塞米松对人胶质瘤细胞有无诱导分化作用。方法：将人胶质瘤细胞质SHG－44在含1mg/L地塞米松,10％小牛血清的R1640培养基中培养48h,进行形态学观察和凝集实验,并计算分裂指数和AgNOR个数,免疫组化法检测细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达量的变化,。结果：加入地塞米松组细胞贴壁更加牢固,胞体肥大,突起增多,棱形细胞由87％下降到41％;凝集程度明显下降,分裂指数由11．20％降至4．90％,AgNOR明显萎缩,消失,数量也由1．31个／核减少到0．77个／核;GFAP含量增加,结论：初步表明地塞米松对人胶质瘤细胞具有诱导分化作用。     

CD133~+胶质母细胞瘤细胞的分离与恶性行为特征

背景与目的:在恶性胶质瘤中存在一类恶性度极高的前体细胞,它们控制着肿瘤的生长与恶性演进,也是肿瘤复发的根源。本研究对胶质母细胞瘤进行肿瘤干细胞的分离与恶性行为特征分析,旨在验证胶质瘤干细胞的存在,并为未来该领域研究打下基础。方法:充分消化术中切除的胶质母细胞瘤组织块至单细胞悬液,流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率,免疫磁珠分选法分离CD133+和CD133-胶质母细胞瘤细胞;免疫荧光法检测两类细胞中巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平;Transwell双室培养体系检测两类瘤细胞的侵袭能力,血清依赖实验检测两类瘤细胞在低营养条件下的生存能力,软琼脂克隆形成实验检测瘤细胞的克隆形成能力;去胸腺小鼠腹股沟皮下接种瘤细胞,观察成瘤率。结果:流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率为(2.31±0.57)%。CD133+细胞高表达nestin,低表达GFAP和NSE;CD133-细胞则相反。与CD133-细胞比较,CD133+细胞具有更高的细胞侵袭能力、低营养耐受能力和克隆形成能力。CD133+细胞在小鼠体内成瘤率为87%(26/30),CD133-细胞为7%(2/30)。结论:CD133+胶质母细胞瘤细胞具有更高的恶性细胞表型,提示其具有高度研究价值。     

华蟾素诱导人红白血病细胞K562凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察华蟾素对白血病细胞的凋亡诱导作用并探讨其机制。方法通过MTT法观察华蟾素对K562细胞的生长抑制作用。通过DNA电泳、流式细胞术、AnnexinV标记法检测华蟾素作用后K562细胞的凋亡状况。流式细胞术分析Caspase-3表达的影响。结果华蟾素能明显抑制K562细胞生长，且有浓度依赖关系，作用48小时的IC50值为（0．152±0．012）ug／ml。K562细胞经0．5ug／ml的华蟾素作用48小时后，DNA琼脂糖电泳可见凋亡的特征性梯形条带。0、0．0625、0．125、0．25、0．5ug／ml的华蟾素作用K562细胞48小时后的凋亡率分别为（3．78±0.09）％、（3.84±0．19）％、（39．43±1．90）％、（64．55±2．70）％、（81．05±4．23）％。华蟾素作用后K562细胞Caspase-3表达增高在0．0625±0．5ug／ml的浓度范围内具有一定的量效关系。结论华蟾素对红白血病细胞K562具有凋亡诱导作用，其机制与提高Caspase-3表达有关。