阿尔茨海默病β淀粉样肽40人单链抗体的生物活性

目的测定重组表达的抗β淀粉样肽(Aβ)40的人单链抗体的生物活性。方法通过基因重组表达方式获得抗Aβ40人单链抗体,应用常规ELISA和竞争性ELISA鉴定抗Aβ40人单链抗体的抗原结合活性,以人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞为模型检测抗Aβ40人单链抗体的神经元保护作用。结果重组表达的抗Aβ40的人单链抗体主要位于细菌不溶性内涵物中,经过尿素溶解和金属亲和层析纯化后具有结合Aβ40或Aβ42的活性。与Aβ42组相比,Aβ42加等摩尔抗体组可显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05)。与Aβ40组相比,Aβ40加等摩尔抗体组亦显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01)。结论从大肠杆菌系统中重组表达的抗Aβ40人单链抗体可以部分对抗β淀粉样肽的神经毒性。     

阿尔茨海默病Aβ40人单链抗体在毕赤酵母的表达

目的 重组表达抗Aβ40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法 将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗Aβ40人单链抗体基因,突变BamHI酶切位点,克隆连接到T载体,经过PCR和酶切鉴定。EcoRI和NotI双酶切pT-scFvAβ40质粒,连接到经过同样酶切的pPIC9K载体构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,经过基因测序验证。线性化pPIC9K-scFvAβ40,转化GS115毕赤酵母,经0．5％甲醇诱导表达抗Aβ40的人单链抗体。结果 基因测序证实pPIC9K-scFvAβ40序列正确,转化GS115获得重组菌株。经过0．5％甲醇诱导,重组菌株分泌表达分子质量大小约为33kD的蛋白质。结论 成功构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,Aβ40的人单链抗体在毕赤酵母系统得以重组表达。     

阿尔茨海默病：自噬与β淀粉样肽关系的研究进展

自噬是机体利用溶酶体清除受损细胞器和功能障碍蛋白质, 以维持蛋白质平衡和细胞内环境稳态的重要途径。而阿尔茨海默病作为一种以异常蛋白聚集为主要特征的中枢神经系统退行性疾病, 自噬在其发病机制中的作用尚不明确, 本文试以Aβ为切入点, 探讨自噬对阿尔茨海默病的影响。     

腺相关病毒介导β淀粉样肽单链抗体对动物阿尔茨海默病的治疗效果

目的 观察携带β淀粉样肽单链抗体基因的腺相关病毒对阿尔茨海默病动物模型的治疗效果.方法 给突变淀粉样蛋白前体转基因阿尔茨海默病模型小鼠腿部肌肉注射携带 AB 单链抗体基因的腺相关病毒,在药物注射前和注射后3、7、10个月用 Morris 水迷宫测定潜伏期,并在药物注射后 10 个月取大脑做组织切片,行免疫组织化学染色,观察淀粉样斑块在海马的沉积.结果 注射基因治疗药物后3个月,阿尔茨海默病模型小鼠的学习和记忆能力明显改善,注射基因治疗药物后 10 个月,模型小鼠海马淀粉样斑块的沉积减少.结论 肌肉注射携带 AB 单链抗体基因的腺相关病毒对阿尔茨海默病模型有治疗作用.     

β-淀粉样肽与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年人群中最常见的一种痴呆症,为病因和发病机制尚不清楚的神经系统退行性病变。AD的组织病理学表现主要为老年斑(senile plaques,SP),神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),以及由凋亡引起的区域性神经细胞死亡等。患者脑内老年斑主要是由具有神经毒性和血管毒性的β淀粉肽(β-amyloid,Aβ)生成。由于AD为多因异质性疾病,目前Aβ-淀粉样肽级联假说引起广泛关注和重视,本文就近年关于Aβ与AD的关系作一综述。     

抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定

目的:运用噬菌体展示技术构建抗人β-淀粉样肽(Aβ)特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定.方法:从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,分离纯化mRNA,经逆转录合成其总cDNA.以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起,克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库,SDS-PAGE鉴定纯度.结果:经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350bp和325 bp,与预期VH,VL基因片段理论值相符.经重组PCR得到大小约750 bp的ScFv基因片段.ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为1.1×10<'8>的噬菌体抗体库,经SDS-PAGE鉴定,得到M,约为30000 ku,纯度较好的scFv抗体.结论:成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库,为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和治疗应用打下基础.     

β-淀粉样蛋白对小胶质细胞分泌白细胞介素1β的影响

探讨阿尔茨海默病（AD）发病的免疫炎性机制。方法体外培养小胶质细胞，免疫细胞化学方法进行小胶质细胞鉴定；用0.1～20μg／ml聚集状态的β-淀粉样蛋白（Aβ）激活小胶质细胞，观察其形态变化．ELISA法检测培养基中白细胞介素1β（IL-1β）的浓度。结果0.1μg／ml Aβ1-12实验组，小胶质细胞形态无明显改变．培养基中IL-1β浓度无明显升高；1μg／ml和20μg／ml Aβ1-12实验组。小胶质细胞胞体变大，形态由分枝状转变成“阿米巴样”，培养基中IL-1β浓度升高；与对照组比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论Aβ可激活小胶质细胞，诱导其释放IL-1β，并呈剂量依赖性，提示小胶质细胞介导的免疫炎性机制在AD发病中起着重要的作用。     

β-淀粉样肽激活小胶质细胞分泌TNFα的研究

目的研究β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞分泌TNFα的合适方案。方法分离纯化小胶质细胞,再以不同浓度可溶性β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生存率,光学显微镜下观察不同时间点的细胞形态,同时以酶联免疫吸附法检测不同时间点小胶质细胞分泌TNFα的含量。结果细胞生存率试验结果显示β-淀粉样肽对小胶质细胞无明显的毒性作用。在浓度分别为0.1、1.0、10、50、100μmol/L时,β-淀粉样肽均可诱导激活小胶质细胞分泌TNFα,TNFα分泌量随β-淀粉样肽的浓度增加而升高,但在β-淀粉样肽浓度高于10μmol/L后TNFα分泌量的增加并不显著。β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞2h后开始分泌TNFα,24h达到高峰,此后逐渐下降。结论β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞具有浓度及时间依赖性,以10μmol/Lβ-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞24h是合适的激活方案。     

不同聚集形式β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞发动蛋白Ⅰ和突触素表达的影响

目的探讨不同聚集形式的β-淀粉样肽(Aβ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)发动蛋白Ⅰ(DynⅠ)和突触素(Syn)表达的影响。方法制备不同聚集形式的Aβ1～42处理SH-SY5Y细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞中DynⅠ及Syn蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色方法检测10例阿尔茨海默病(AD)患者及8例老年同龄对照者尸解后脑海马结构中β-淀粉样肽寡聚体(AβOs)表达水平。结果 Aβ单体或Aβ纤丝体处理SH-SY5Y细胞未见DynⅠ及Syn蛋白表达水平显著变化,AβOs处理细胞可见DynⅠ及Syn蛋白表达水平降低(P<0.05);AD患者海马及内嗅区皮质神经元内AβOs的表达显著高于老龄对照者(P<0.05)。结论细胞内表达的AβOs可能是引起AD患者脑中网格蛋白内吞调节蛋白———DynⅠ表达下降及突触丧失的主要Aβ神经毒性形式,该改变可能与AD发病机制中学习记忆能力减退有关。     

脑尔康对阿尔茨海默病模型大鼠海马β淀粉样肽1-42及脑啡肽酶表达的影响

目的：观察复方中药脑尔康对阿尔茨海默病（Alzheimers disease, AD）模型大鼠海马β淀粉样肽1-42（β-amyloid peptide 1-42,Aβ1-42）及其降解酶——脑啡肽酶（neprilysin, NEP）表达的影响,探讨其抗痴呆的作用机制。 方法：48只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和大、中、小剂量脑尔康组,每组8只。除空白对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态Aβ1-425 μL（2 μg/μL）制备AD模型,空白对照组注射等体积生理盐水。3个剂量脑尔康组大鼠给予脑尔康［60、30、15 g/（kg·d）］连续灌胃28 d,吡拉西坦组给予吡拉西坦［0.375 g/（kg·d）］灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。采用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测海马内Aβ1-42和NEP的表达。 结果：大鼠海马注射Aβ1-42后,与空白对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,海马内Aβ1-42表达明显增多（P＜0.01）。用药干预28 d后,与模型组比较,吡拉西坦组和各剂量脑尔康组大鼠学习记忆能力改善（P＜0.05,P＜0.01）,海马内Aβ1-42的表达下降（P＜0.05,P＜0.01）,NEP的表达增加（P＜0.05,P＜0.01）,其中以大剂量脑尔康组效果最佳。 结论：复方中药脑尔康可能通过上调AD模型大鼠海马NEP的表达来降低Aβ1-42的含量,改善其学习记忆能力,发挥抗痴呆作用。     

β-淀粉样肽研究进展

阿尔茨海默病(AD)是发生于老年期的一种以认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，旧称老年痴呆，是引起老年期痴呆的主要原因。在西方国家AD已成为排在心脏病、肿瘤、脑卒中之后的第4位威胁人类健康的杀手。β-淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者的老年斑中它能较早地有选择地沉积，它是各种原因诱发AD的共同途径，是AD形成和发展的关键因素。Aβ的出现早于神经原纤维缠结、     

β淀粉样蛋白与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病是老年人常见的神经系统变性疾病,是痴呆中最常见的一种类型。目前认为β淀粉样蛋白的异常沉积是阿尔茨海默病主要发病机制之一,这里就目前β淀粉样蛋白与阿尔茨海默病的研究进展作一综述。     

β淀粉样肽40与2型糖尿病下肢大血管病变的相关性研究

目的:初步探讨血清β淀粉样肽40(β-amyloid peptide 40,Aβ40)和2型糖尿病下肢大血管病变有无联系。方法:临床筛选研究对象共155例,其中单纯糖尿病组55例,2型糖尿病合并下肢大血管病变组50例,正常对照组50例,检测血清β淀粉样肽40、血脂、血糖、糖化血红蛋白等生化指标进行对比分析。结果:糖尿病病人β淀粉样肽40高于对照组(P<0.05),糖尿病有并发症组病人β淀粉样肽40高于无并发症组(P<0.05)。结论:β淀粉样肽40水平可能与2型糖尿病下肢大血管病变有联系。     

β淀粉样肽22—35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ     

H102衍生物对β淀粉样蛋白聚集的抑制作用

目的:比较6种β片层阻断肽(H102、H102-1、H102-2、H102-3、DH102、LD-7)对β淀粉样蛋白(Aβ)聚集及纤维形成的影响,并进行药物筛选.方法:运用硫磺素T(ThT)荧光法以及傅里叶变换红外光谱法(FT-IR)分析6种β片层阻断肽对Aβ1-42聚集的影响.结果:6种β片层阻断肽及对照组维生素E对Aβ1-42聚集和纤维抑制率分别为:( 14.168±0.038)％、(9.725±0.023)％、(22.535±0.013)％、(8.586±0.035)％、(5.37±0.019)％、(9.599±0.012)％、( 12.736±0.026)％,提示H102-2的效果最佳;FT-IR结果也以H102-2的效果最佳.结论:H102-2对β淀粉样蛋白聚集和纤维抑制效果最佳.     

国人外周血抗β-淀粉样蛋白抗体水平的依龄性变化

[目的]主动和被动免疫可以显著改善阿尔茨海默病(AD)的病理和临床过程,抗Aβ抗体在AD预防和治疗中的作用已得到肯定,测定健康人群外周血中的抗Aβ抗体的水平将有助于了解AD发病机制.[方法]收集1～89岁共210例健康人群的血清标本,以10岁为一个年龄组,共9组.采用间接ELISA法测定所收集人群的血清中抗Aβ抗体的相对滴度,并用Western blot法检测其抗Aβ抗体的特异性.[结果]健康人外周血中普遍存在抗Aβ抗体,并且随年龄血清中抗Aβ抗体水平逐渐增加,回归分析呈现线性关系;在60岁以上年龄组,抗体水平显著高于60岁以下的各年龄组(P<0.01).Western blot的结果显示抗Aβ抗体可以识别β-淀粉样蛋白.[结论]健康人群血清中存在着特异性的抗Aβ抗体,抗体的滴度呈依龄性增加.     

慢性脑血流低灌注大鼠血和脑内β-淀粉样肽的变化

目的研究慢性脑血流低灌注对大鼠血和脑内β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)含量的影响。方法老年(10月龄)雄性SD大鼠双侧颈总动脉结扎,分别于手术后10d、30d、90d和180d进行Morris水迷宫实验;用放射免疫分析法检测血清、大脑皮质及海马的Aβ含量;用Western blot方法检测大脑皮质和海马的β-淀粉样肽前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的含量。结果Morris水迷宫实验显示,大鼠在术后30d、90d、180d均出现学习记忆功能下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);血清Aβ水平在术后10d显著增高(P<0.01),30d、90d、180d血清Aβ水平仍高于对照组(P<0.05);术后90d和180d海马的Aβ和APP增高(P<0.05),180d皮质的Aβ和APP增高(P<0.05)。结论慢性脑血流低灌注引发大鼠脑及血中Aβ的升高,可能在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)早期发病过程中有重要意义。     

β-淀粉样肽氧化应激损伤在大鼠Alzheimer病中的作用

目的　探讨氧化应激在阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)发病中的作用 .方法　参照Nabeshima方法 ,用立体定向方法将β 淀粉样肽 (β AP1 4 0 ,10 μg)注入大鼠侧脑室建立大鼠AD模型 ,分别于 1,2和 3wk时测定血液和脑组织中过氧化氢酶 (CAT)、总抗氧化能力 (T AOC)、胆碱酯酶(ChE)的含量及其学习记忆能力 ,并进行相关分析 .结果　β AP注射后 1wk ,脑组织中ChE ,CAT ,T AOC较对照组明显降低 (10 .1± 4.1) ,(6 .8± 0 .8)和 (3.4± 1.0 )kU·g-1(P <0 .0 1) .随时间延长 ,3wk时CAT和T AOC下降越显著 ,机体的抗氧化能力越低 (6 .5± 4.4) ,(2 .0± 1.2 )和 (2 .4± 1.2 )kU·g-1,同时ChE的减少 (6 .5± 4.4)kU·g-1,动物的学习记忆能力亦明显降低 ,且两者间呈正相关 .而在外周血中ChE和CAT下降不明显 (P >0 .0 5 ) ,T AOC自 1wk始较对照组呈下降趋势 ,至 3wk时明显降低 (6 .8± 1.2 ,P <0 .0 1) .结论　β AP能诱发氧化应激反应 ,在AD的形成过程中起着非常重要的作用 ,是AD形成的一个重要因素     

β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病

随着人均寿命的延长,阿尔茨海默病（俗称老年痴呆）的发病率逐年上升,已成为现代社会老年人的主要致死疾病之一。本文就β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病的关系进行文献综述,提示：人们的焦虑、紧张和抑郁等不良情绪会引起人体的应激反应,从而激活细胞膜上的β-2-肾上腺素受体,进而引起β-淀粉样蛋白的生成增加,使细胞外产生老年斑和脑血管淀粉样变性,细胞内发生神经元纤维缠结,导致神经元变性乃至形成痴呆。