端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

雌激素受体阴性乳癌细胞株中Cyclin D1和Ki-67表达与细胞凋亡的关系

本研究应用雌激素受体 (ＥＲ)阴性乳癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ 435ｓ探讨在ＥＲ阴性乳癌细胞中ＣｙｃｌｉｎＤ1及Ｋｉ 67表达与细胞凋亡的关系。1　材料与方法1 .1　材料ＥＲ阴性乳癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ 435购于中科院上海细胞生物研究所 ,凋亡检测试剂盒、ＣｙｃｌｉｎＤ1单抗及Ｋｉ 67单抗购于ＭａｘｉｍＢｉｏｔｅｃｈ公司 ,ＵＳＡ。1 .2　检测指标及方法1 .2 .1　细胞周期和凋亡率测定　将 2× 1 0 5个 /ｍｌ浓度的ＭＤＡ ＭＢ 435ｓ细胞接种于 2 4孔板中 ,再将 1 0 - 8ｍｏｌ/Ｌ的 1 ,2 5(ＯＨ) 2 Ｄ3加入 2 4孔板中 ,于 1、2、3、4、5天作流…     

高糖诱发施万细胞损伤时自噬与Nrf2信号通路的关系

目的:探讨高糖诱发施万细胞损伤时自噬与核因子E2相关受体2(Nrf2)信号通路的关系。方法:将原代细胞株RSC96体外培养制成单细胞原液,分别接种于96孔板(1×10 4个/ml,200 μl/孔)或6孔板(1×10 6个/ml,2 ml/孔),培养48 h。采用随机数字表法分为3组( ...     

Fas系统与药物诱导结肠癌细胞株凋亡的关系

本实验旨在阐述肿瘤细胞表面Ｆａｓ/Ｆａｓ配体 (ＦａｓＬ)的表达与细胞凋亡的关系 ,并用于判断化疗药物的抗癌效果。一、材料与方法1.细胞株 :结肠腺癌Ｌｓ 174 ｔ细胞株 (中国科学院细胞库提供 )置于由ＲＰＭＩ 16 40培养基和体积分数为 10 %的小牛血清组成的细胞培养液中 ,ＣＯ2培养箱中孵育。2 .化疗药物 :分别将 5 氟脲嘧啶(5 Ｆｕ)、表阿霉素 (ＥＰＩ)、顺铂 (ＤＤＰ)、丝裂霉素 (ＭＭＣ )以血浆峰浓度(ＰＰＣ) [1] 1/ 10×ＰＰＣ、1/ 5×ＰＰＣ、5×ＰＰＣ、10×ＰＰＣ加入培养液内 ,与细胞共孵 2 4、48ｈ。 5 Ｆｕ、ＥＰＩ、ＤＤ…     

白藜芦醇与化疗药物体内体外合用对小鼠肝癌细胞生长的影响

本实验检测白藜芦醇单用及与化疗药物合用对体外培养鼠肝癌细胞株H2 2(腹腔接种传代 )生长的影响 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :白藜芦醇购自Sigma公司(用二甲基亚酚溶解 ) ;小鼠肝癌H2 2细胞由本校免疫病理教研室提供 ,在含10 %小牛血清RPMI 164 0 (购于Gibco公司 )中培养 ;76只BALB/C小鼠 (购于西安交通大学医学院实验动物中心 )雌雄兼用 ;体重 (2 0± 2 ) g。 5 Fu购于西安交通大学第一医院西药房。2 .方法 :(1)将肝癌细胞H2 2细胞数(2× 10 4/孔 )接种在 96孔培养板上 ,在5 %CO2 、3 7.0℃培养箱中温育 12h后 ,分…     

细胞素及合用异博定对人乳腺癌细胞多药耐药性逆转作用的研究

我们利用人乳腺癌耐药细胞系以流式细胞术及噻唑蓝 (ＭＴＴ)法检测肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)、白细胞介素 (ＩＬ) 2、α 干扰素 (α ＩＦＮ)单用及与异博定合用对细胞耐药性的调节作用 ,结果报道如下。一、材料与方法1.细胞 :人乳腺癌亲代ＭＣＦ 7细胞及对阿霉素耐药的ＭＣＦ 7/ＡＤＲ细胞来源于美国国立癌症研究院 ,常规培养。2 .ＭＣＦ 7/ＡＤＲ细胞的抑制率测定 :将细胞调整至 3× 10 8个 /Ｌ浓度 ,取2 0 0 μｌ加入 96孔板中过夜 ,去掉培养基 ,加入含不同药物浓度的新培养基 ,培养 48ｈ收集细胞 ,ＭＴＴ法检测半抑制浓度 (ＩＣ50 )。3.细…     

缺血对胰腺癌及癌周胰腺组织病理形态学的影响

我们在建立人胰腺癌细胞株裸小鼠胰腺原位移植瘤模型的基础止 ,结扎荷瘤裸鼠胃十二指肠动脉、胰十二指肠下动脉及背胰动脉 ,诱导胰腺右叶区域性缺血 ,观察缺血对移植瘤及瘤周胰腺组织病理形态学的影响 ,为缺血疗法[1] 在胰腺癌的临床应用提供实验依据。一、材料与方法1.模型建立及分组 :ＢＡＬＢ/Ｃ ｎｕ/ｎｕ裸小鼠 35只 ,无特殊病原体条件下饲养 ,鼠龄 6～ 8周 ,体重 (2 0± 2 )ｇ。人胰腺癌细胞株ＰＣ 3[2 ] 培养于ＲＰＭＩ16 40培养基中 ,取指数生长期细胞以ＲＰ ＭＩ16 40培养基液调配成 10× 10 9个活细胞 /Ｌ的细胞悬液。裸小鼠以质…     

肝素及聚维酮碘预防穿刺孔转移瘤的实验研究

自腹腔镜应用于恶性肿瘤的诊断、分期和治疗以来,穿刺孔转移瘤(PSM )已成为影响患者生存率和生存质量的主要并发症。我们利用腹腔镜肿瘤细胞悬浮液模型在气腹条件下评价肝素及聚维酮碘预防穿刺孔转移瘤的效果。一、材料和方法1.材料:SD大鼠(广东医学动物实验中心) ,RH 3 5大鼠肝癌细胞株(中科院细胞生物研究所) ,培养基及相应的培养试剂(广州威佳生化试剂公司) ,肝素稀释液( 40U/ 2ml) ,10 %无醇型聚维酮碘稀释液,腹腔镜及相应的手术器械(美国Stryker公司)。2 .实验方法:将RH 3 5大鼠肝癌细胞株培养在DMEM培养基中,2～3d后用0 .1%Try…     

应用旋转生物反应器和微载体技术体外大规模扩增人骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞 (ＭＳＣｓ)因其自身所具有的特殊性而日益受到关注[1,2 ] 。我们采用微载体技术在旋转生物反应器内扩增人骨髓间充质干细胞。一、材料与方法1.试剂 :细胞培养基ＤＭＥＭ购自美国Ｇｉｂｃｏ公司 ;旋转生物反应器购自美国Ｓｙｎｔｈｅｃｏｎ公司。2 .ＭＳＣｓ的分离与培养 :骨髓来源于正常献髓者 ,将人骨髓经ＤＭＥＭ稀释后用一种细胞分离液Ｐｅｒｃｏｌｌ分离 ,Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液的比重为 10 73 ｇ/Ｌ。分离后收获单个核细胞 ,ＤＭＥＭ洗 2次 ,接种于 2 4孔板内 ,浓度为 2 .0× 10 5个 /ｃｍ2 ,各孔内加入 10 %胎牛血清 …     

D-甲硫氨酸联合化疗对胃癌细胞株代谢周期的影响

目的:通过体外实验观察D-甲硫氨酸(D-Met)合并应用细胞周期特异性化疗药物对胃癌细胞株代谢周期的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901分别置于含L-Met、D-Met或以同型半胱氨酸替代Met(Met-Hcy+)的不同培养基中,或在上述诸培养基中分别加入5-氟脲嘧啶(5-FU)。培养48h后,应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞的比例。结果:G0/G1期和G2/M期细胞的比例均示D-Met和Met-Hcy+组低于L-Met组,而S期细胞比例则示D-Met组最高,凋亡细胞比例也以D-Met组诸组为最高;与未加入化疗药物诸组相比,联合应用5-FU后,各组的G0/G1期细胞比例增高,S期和G2/M期细胞比例降低,凋亡细胞比例有所增高。结论:D-Met可干扰人胃癌细胞株的代谢周期,趋向阻滞肿瘤细胞于S期,有助于周期特异性化疗药物5-FU对此期肿瘤细胞的杀份。