TBB对乳腺癌细胞miR-411表达及细胞凋亡的影响

目的 观察TBB作用下乳腺癌细胞中miR-411的表达,研究过表达miR-411对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期改变的影响。方法 Real-time PCR验证生物芯片检测的差异miRNAs,流式细胞术分析转染前后细胞周期及细胞凋亡情况,针对miR-411进行下游靶基因预测,以real-time PCR验证预测结果。结果 TBB作用下MCF-7细胞株中miR-411显著升高;与对照组相比,转染组早期凋亡细胞比例升高;FoxO1 mRNA表达含量显著增高。结论TBB能够改变乳腺癌MCF-7细胞株中miR-411的表达,过表达miR-411能够抑制乳腺癌细胞株的凋亡,其机制可能与通过影响FoxO1表达有关。     

miR-373抑制剂对乳腺癌细胞生长的影响

目的探索miR-373抑制剂对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响。方法设计并合成miR-373抑制剂,通过脂质体转染至MCF-7细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应检测转染后细胞内miR-373的表达水平,同时检测Caspase-3与Caspase-8的表达情况,并应用MTT实验检测miR-373抑制剂对MCF-7细胞生长的影响。结果 miR-373抑制剂能有效抑制MCF-7细胞中miR-373的表达。转染后,MCF-7细胞中Caspase-3与Caspase-8的mRNA水平均升高（P〈0.05）。miR-373抑制剂对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率随浓度升高而增加（P〈0.05）。结论 miR-373抑制物可有效抑制MCF-7细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH2 3’非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达

目的重组过表达EZH2基因3’非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组
细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名
称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、
miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar 和TargetScan 无法预测。Real-time PCR发现,与
乳腺癌细胞MCF-7 相比,正常乳腺细胞株HBL-100 中miR-217、miR-329-1、miR-487b 高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b 及
miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论在重组过表达EZH2 3’-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株
中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组
织中存在差异表达。
     

miR-378通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞系的增殖和迁移

目的 探究miR-378在乳腺癌细胞系中的表达及作用机制。方法 利用TargetScan分析miR-378的作用靶基因RAB11A。利用RT-PCR检测乳腺癌细胞系中miR-378和RAB11A的mRNA水平表达。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞miR-378,NC(normal control)对照,采用MTT法和Transwell法检测乳腺癌细胞增殖和迁移能力的变化;采用RT-PCR和Western blot检测RAB11A的表达。荧光素酶报告分析miR-378与靶基因RAB11A之间的信号。结果 miR-378在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达上调;RAB11A在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达下调;在MCF-7,MDA-MB-231细胞中敲降miR-378后,乳腺癌细胞增殖和迁移能力与对照组相比被显著抑制,RAB11A的mRNA和蛋白表达水平明显增加,荧光素酶活性增加。结论 在乳腺癌细胞中,miR-378可通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。     

miR-149对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-149对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法应用miRanda,Tar Base v.5c靶基因预测网站分析miR-149与FOXM1 miRNA的可能结合位点,分别将miR-149模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到MCF-7细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞FOXM1蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果Western blot结果显示,miR-149 mimics转染组的MCF-7细胞中FOXM1蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-149 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论 miR-149能促进乳腺癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制FOXM1的表达有关。     

血浆miR-106b表达水平对乳腺癌的诊断价值

目的探讨miR-106b对乳腺癌的诊断价值。方法荧光定量PCR检测正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435的miR-106b表达水平。收集30例乳腺癌患者临床病例资料,采集患者血浆,以健康人血浆作为对照,应用RT-PCR方法分析血浆miR-106b相对表达量与乳腺癌临床特征的关系,评估血浆miR-106b对乳腺癌的诊断效能。结果MCF-10A细胞miR-106b相对表达量为(1.00±0.08),MCF-7细胞为(5.15±0.45),MDA-MB-231细胞为(6.86±0.57),MDA-MB-435细胞为(3.86±0.29)。乳腺癌患者血浆及健康人血浆miR-106b相对表达量分别为(4.13±2.47)和(1.00±0.75)(P0.05)。乳腺癌患者血浆miR-106b相对表达量与患者年龄、肿瘤大小无相关性(P0.05),而与肿瘤分化程度、临床分期相关(P0.05)。经ROC曲线分析,miR-106b对乳腺癌患者和健康对照者诊断乳腺癌的AUC为0.831(95%CI:0.719~0.942),敏感性和特异性分别为86.67%和76.67%。结论乳腺癌患者血浆miR-106b异常高表达可能成为乳腺癌诊断的新靶点。     

miR-145对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药逆转的作用机制研究

目的:探讨miR-145对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR阿霉素耐药的影响及可能的作用机制。方法:采用实时定量PCR方法检测miR-145在乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/ADR中的表达差异;脂质体转染法将构建好的miR-145 mimics,miR-145inhibitor成功转染进MCF-7/ADR细胞中,MTT法检测转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,流式细胞仪检测耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的影响,Western blot检测转染前后抗凋亡蛋白Bcl-2、多药耐药基因MDR1表达蛋白P-gp的表达差异。结果:miR-145在人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中表达下降;上调miR-145可以增强MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,显著抑制MCF-7/ADR细胞增殖,并促进阿霉素诱导的细胞凋亡,同时显著抑制了耐药细胞中Bcl-2和P-gp的表达。结论:miR-145通过抑制Bcl-2和P-gp蛋白的表达来增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性和凋亡。     

miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制

目的 探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法 选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(SAMR1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和miR-9*的模拟物和抑制物转染N2a细胞,采用流式细胞术检测过表达和敲低miRNA对细胞周期的影响;生物信息学预测miR-9和miR-9*靶基因并进行双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠海马区的表达低于SAMR1小鼠。敲低miR-9和miR-9*都可以增加N2a细胞G1期细胞在群体中的比例,减少S期细胞在群体中的比例,过表达则相反。生物信息学预测并通过文献筛选miR-9的靶基因有PSEN1、SCN2B、MAP3K3和BACE1,miR-9*的靶基因有CDKn1c。荧光素酶报告基因实验证实miR-9的靶基因是MAP3K3,miR-9*的靶基因是CDKn1c。结论 miR-9和miR-9*可能是分别通过其靶基因MAP3K3和CDKn1c在SAMP8小鼠衰老进程中发挥重要作用。     

miR-384增加乳腺癌MCF-7细胞多西他赛敏感性

【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛（DOC）敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组（空白对照）、miR-NC组(转染模拟物阴性对照）、miR-384组(转染miR-384模拟物）、miR-NC+DOC组（转染模拟物阴性对照,DOC处理）、miR-384+DOC组（转染miR-384模拟物,DOC处理）,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。     

miR-29a促进人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的机制

探讨微小核酸miRNA-29a对人乳腺癌细胞MCF-7体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-29a模拟物及miR-29a抑制剂分别上调和下调miR-29a的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测miR-29a对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Targetscan7.1数据库预测miR-29a的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-29a的靶基因;Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明:miR-29a可显著促进MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。Targetscan软件预测HBP1可能为miR-29a的靶基因,荧光素酶报告实验显示miR-29a靶向HBP1基因的3′-UTR区。Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,miR-29a下调了HBP1蛋白水平的表达,而mRNA水平则无明显变化。研究结果揭示在乳腺癌中高表达的miR-29a通过下调HBP1,从而使乳腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进乳腺癌的转移。     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的：探讨miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法：检测乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-367相对表达水平。将miR-NC或miR-367-inhibitor转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-inhibitor组,检测2组MCF-7细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。将miR-NC或miR-367-mimic转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-mimic组,检测2组MCF-7细胞集落数、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。结果：与癌旁组织或MCF-10A细胞比较,乳腺肿瘤组织和MCF-7细胞中miR-367相对表达水平均明显升高（P<0.01）。与阴性对照组比较,miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显降低（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显升高（P<0.01）;与阳性对照组比较,miR-367-mimic组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞集落数、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显升高（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显降低（P<0.01）。结论：miR-367可促进MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制KLF4的表达有关。     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

miR-125b靶向调控HK2表达增强乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的研究

目的探讨miR-125b靶向调控HK2对乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响。方法将miR-125b模拟物及其阴性对照转染至乳腺癌MCF-7细胞,分别记为miR-125b组和miR-NC组,采用RT-PCR检测MCF-7细胞中miR-125b和HK2 mRNA的表达,Western blotting检测HK2蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-125b和HK2的靶向关系。另外将miR-125b模拟物和pcDNA3.1-HK2质粒共转染至MCF-7细胞中,记为miR-125b+HK2组,通过克隆形成实验和流式细胞仪检测miR-NC组、miR-125b组和miR-125b+HK2组细胞的存活分数和凋亡率。结果与miR-NC组相比,转染miR-125b模拟物后MCF-7细胞中miR-125b表达升高（P < 0.01）,而HK2 mRNA和蛋白的表达降低（P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实HK2是miR-125b的潜在靶基因。与miR-NC组相比,miR-125b组细胞的存活分数降低、凋亡率升高（P < 0.01）;与miR-125b组相比,miR-125b+HK2组存活分数降低明显升高而凋亡率降低（P < 0.01）。结论miR-125b可通过靶向调控HK2表达增强乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性。     

miR-210对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨microRNA-210(miR-210)对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 采用RNA干扰技术,构建针对miR-210的shRNA真核表达载体,转染MCF-7细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测转染后miR-210的表达情况,观察转染后MCF-7细胞的增殖、侵袭和凋亡情况.结果转染后MCF-7细胞中miR-210表达明显下降,同时细胞增殖和侵袭能力减弱、凋亡率上升.结论 miR-210能够影响乳腺癌的生物学行为.     

miR-363-5p靶向TRIM14对化疗药物诱导的乳腺癌细胞系凋亡的影响

目的探究抑制IL-17A的表达对脓毒血症小鼠急性肾脏损伤的影响。 方法24只小鼠按照随机数字表法均分为对照组、模型组和抑制剂组。模型组和抑制剂组小鼠腹腔注射高剂量LPS(10 mg/kg)建立脓毒血症急性肾损伤模型,抑制剂组给与IL-17A抑制剂SGC-CBP30(30 mg/kg)。检测血清肌酐、尿素氮和炎症因子水平,分析肾功能的变化,通过HE染色和过碘酸雪夫染色分析肾脏病理变化,分析肾脏炎症因子水平和细胞凋亡蛋白的变化。 结果IL-17A抑制剂处理能够显著下调脓毒血症小鼠血清肌酐、尿素氮和炎症因子IL-6和TNF-α水平(P＜0.05);抑制IL-17A的表达能够显著改善脓毒血症小鼠肾脏的损伤,下调肾脏炎症因子和细胞凋亡蛋白的表达。 结论抑制IL-17A的表达能够改善脓毒血症小鼠急性肾损伤。