4-氨基水杨酸对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成的影响

目的：观察4-氨基水杨酸（4-ASA）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞一氧化氮（NO）的生成及诱生型一氧化氮合酶（iNOS）基因和蛋白表达的作用。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的4-ASA,采用一步法测定细胞上清中NO释放量;采用实时定量PCR法测定iNOSmRNA的表达;采用Western blot法测定目的蛋白iNOS的表达。结果100μg/mL和1000μg/mL4-ASA能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌及iNOS基因和蛋白的表达（P＜0.05）。结论4-ASA可明显降低LPS 诱导的RAW264.7细胞NO的产生以及iNOS基因和蛋白的表达,从而发挥抗炎作用。     

巴马汀对LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO分泌及iNOS表达的影响

目的：观察巴马汀对脂多糖（LPS）诱导的RAW264．7小鼠巨噬细胞一氧化氮（NO）的分泌及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的作用。方法：采用LPS诱导RAW264．7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用Griess法测定NO的分泌量;采用Westernblot法检测iNOS蛋白的表达。结果：巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌,以及iNOS蛋白的表达,并呈现出浓度依赖性。结论：巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌及iNOS的表达,从而发挥抗炎作用。     

黄药子甲醇提取物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放NO及iNOS表达的影响

研究黄药子甲醇提取物(EED)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细(Mφ)一氧化氮(NO)的生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。采用Griess试剂法检测NO含量和RT-PCR检测iNOSmRNA的表达。发现EED能够计量依赖性减少LPS刺激Mφ的NO生成,其中EED50μg/ml和100μg/ml能显著抑制腹腔Mφ释放NO;同时EED也能够计量依赖性抑制LPS刺激Mφ的iNOSmRNA的表达。说明黄药子甲醇提取物具有抑制LPS诱导的巨噬细胞NO生成和iNOSmRNA的表达的药理学效应。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000～10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。     

葛根素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨葛根素（puerarin, PUE）在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞中的抗炎作用,并揭示其分子机制。方法 采用CCK-8比色法分别设置不同浓度的LPS和PUE,观察对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出合适的LPS造模浓度及PUE的给药浓度。将细胞分为正常对照组、模型组（1μg/mL）、PUE给药组（12.5、25、50μmol/L）。Griess法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）释放量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的含量;qRT-PCR法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2) mRNA水平;Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, i NOS）、COX-2、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平。结果 与正常对照组比...     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响

目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用改良Allen’S撞击法制备脊髓损伤模型;成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组,其中损伤组和药物治疗组各50只,分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死;假损伤组10只,于手术后14天处死,采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：褪黑素可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

芍药苷对LPS诱导的RAW264.7细胞HMGB1表达的影响

目的:观察芍药苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞株(RAW264.7)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放和表达的影响.方法:体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞培养三代后,转种于放置了无菌处理盖玻片的6孔培养板中,将细胞分为对照组、LPS刺激组(100 ng/mL)、芍药苷组(LPS 100 ng/mL+芍药苷0.625 mg/mL);LPS刺激20 h后,免疫细胞化学法检测各组培养细胞HMGB1的表达水平.结果:LPS刺激RAW 264.7细胞20 h后,LPS组细胞核HMGB1特异性染色变淡,胞浆染色加深,表明HMGB1从胞核转移到胞浆; 芍药苷组大部分细胞核HMGB1特异性染色深,而胞浆染色浅,表明芍药苷抑制HMGB1从胞核转移到胞浆.对HMGB1免疫组化数字图像的累积光密度值分析显示,HMGB1含量在三个实验组间差异有统计学意义(F=918.67,P<0.01),LPS刺激组和芍药苷组间差异有统计学意义(q=22.66,P<0.01).结论:芍药苷可能通过抑制HMGB1的核转位和释放,对LPS诱导的肝损伤起保护作用.     

iNOS、p53在幽门螺杆菌相关胃病中的表达

目的 :研究幽门螺杆菌 (H pylori)感染时不同胃粘膜病变中诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)与p5 3的表达情况 ,探讨H pylori感染与胃癌形成的分子机制。方法 :采用免疫组化法检测 12 6例患者胃粘膜iNOS与p 5 3的表达情况。H pylori检测采用尿素酶试验法和Warthin—Starry银染法。结果 :12 6例患者中H pylori阳性 72例 ,H pylori阴性 5 4例。iNOS在炎性细胞的表达率CSG和CAG组明显高于DyS和GC级 (P <0 0 5 )。iNOS在腺上皮细胞的表达率DyS和GC组明显高于CSG和CAG组 (P <0 0 5 )。结论 :炎性细胞来源的iNOS起引发凋亡的作用 ,而腺上皮细胞产生的iNOS有抑制凋亡的作用。H pylori感染激活iNOS通过p5 3介导凋亡可能是H pylori诱发癌变的机制之一。     

甘草酸二铵对溃疡性结肠炎大鼠SOD和iNOS表达的影响

目的观察甘草酸二铵（DG）对溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠黏膜超氧化物歧化酶（SOD）活性和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法50只雄性Wistar大鼠分为正常对照组，模型对照组，5-氨基水杨酸（5-ASA）组，DG组和5-ASA＋DG组，每组10只。用2，4-二硝基氯苯和乙酸联合建模法制备UC大鼠模型。观察各组大鼠疾病活动指数（DAI）、组织学损伤评分SOD活性，免疫组织化学法分析结肠黏膜iNOS表达。结果与模型对照组相比，5-ASA组和DG组大鼠DAI、组织学损伤评分及iNOS表达显著降低，SOD活性显著升高（P〈0．01）。但5-ASA组和DG组相比各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。BG＋5-ASA组与正常对照组相比各指标差异也无统计学意义（P〉0.05）。结论DG可用于治疗大鼠UC，其机制可能是通过清除氧自由基，抗氧化损伤，抑制NO生成来减轻UC大鼠结肠黏膜的组织损伤。与5-ASA联用其治疗效果优于两者单独用药。     

iNOS及其在组织创伤后的表达

一氧化氮(nitric oxide,NO) 是目前公认的一种信息传递分子,在各类疾病和急性损伤中的作用日益受到人们的关注.由于NO化学性质活泼,不易准确定量测定,因而其合成酶一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)成为近年各类疾病和急性损伤研究的热点.NOS因基因定位于不同的染色体上,可分为3种亚型:神经型NOS(neuronal NOS,nNOS,又称Ⅰ型NOS)、诱导型NOS(inducible NOS,iNOS,又称Ⅱ型NOS)、内皮型NOS(endothelial NOS,eNOS,又称Ⅲ型NOS),其中nNOS和eNOS又被称为组成型NOS (constitutive NOS,cNOS).     

热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白60、70及iNOS表达的影响

目的 观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白(heat shock protein ,HSP)(HSP60、HSP70)和诱生型一氧化氮合酶(induced nitric oxidase synthase,iNOS)表达的影响,探讨热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜的保护作用机制.方法 将Wistar大鼠分为烫伤组及热休克预处理后烫伤组2个大组,观察不同处理组大鼠胃黏膜损伤指数(ulcer index,UI)变化.同时应用RT-PCR技术检测各组大鼠胃黏膜HSP70 mRNA表达,免疫组化染色分析胃黏膜组织中HSP60 、HSP70、iNOS表达变化.结果 正常大鼠严重烫伤后iNOS表达显著增强,胃黏膜损害明显,热休克预处理能显著减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害;与烫伤组比较,经热休克预处理后再烫伤大鼠胃黏膜HSP60 和HSP70基因表达水平升高(P＜0.05),尤以HSP70为甚(P＜0.01),而iNOS表达受抑(P＜0.01).结论 热休克预处理对大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害具有保护作用,其保护机制可能与HSP60、70诱导表达增强及iNOS表达受抑等机制有关.     

PPAR-γ配体对特发性血小板减少性紫癜模型小鼠NO生成诱导时间效应的影响

目的探讨ITP模型小鼠体内,过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）对一氧化氮（NO）生成的影响及意义。方法90例ITP模型小鼠随机分成罗格列酮试验组、正常对照组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,每组30例。罗格列酮试验组用20μmol／L的罗格列酮进行灌胃。硝酸还原酶法检测小鼠血液NO含量,RT-PCR法检测血液淋巴细胞PPAR-γmRNA表达情况。结果血清中NO在第6h,12h,18h,24h和30h的含量罗格列酮试验组高于正常对照组及PBS对照组（均P〈0．05）。在罗格列酮试验组中,NO含量及PPAR-γmRNA的表达随着用药时间的延长而增加（均P〈0．05）,NO表达量与PPAR-γ的表达呈正相关（r=0．89,P〈0．05）。结论在ITP小鼠模型内,PPAR-γ活化剂能够以时间依赖的形式增加NO的生成,PPAR-γ可能通过NO途径来发挥相应的生理功能。     

南药益智仁对糖尿病肾病氧化应激iNOS及PARLmRNA影响的实验研究

目的：探讨益智仁对STZ造模的糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠治疗后的血清诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及早老素相关菱形样蛋白(PARL)mRNA表达的影响,以期确定益智仁的抗氧化应激作用。方法：大鼠高糖高脂饮食联合链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造模4周。大鼠随机分为6组,每组10 只,分别为空白组,益智仁低、中、高剂量组（低、中、高剂量分别为100、300、900 mg·kg-1）,缬沙坦组（缬沙坦胶囊25 mg·kg-1·d-1）,模型组。给药4周后用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测血清iNOS,荧光定量PCR法测PARLmRNA。结果：益智仁不同浓度药物均能下调血清iNOS及增加PARLmRNA的表达（P<0.05）。结论：益智仁能通过干预iNOS及PARLmRNA的表达治疗氧化应激引起的DN。     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）时胰腺组织一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的变化。方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组。SAP组（n=18）以逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型;对照组（n=18）以同法注射等剂量生理盐水。造模后6、12、24 h每组随机处死大鼠6只,检测血淀粉酶、胰腺组织病理组织学改变、胰腺组织NO水平及iNOS活性以及腺腺组织iNOS mRNA表达的变化。结果与对照组相比,SAP组在6 h时间点上,胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高（P〈0.01）,免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOS mRNA表达增高（P〈0.01）;随时间延长,在12 h和24 h各指标到达高峰,24 h仍维持在较高水平（P〈0.01）。结论在SAP时,随着时间的延长,iNOS表达增高,从而产生高浓度的NO,加重胰腺组织的损伤。     

ERK1/2信号通路参与LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的调节

目的：探讨ERK1/2信号通路与LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的关系。方法：采用RT-PCR和蛋白免疫印迹方法观察ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059对LPS诱导的iNOS表达的影响。结果：PD98059能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达。结论：LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达部分依赖了ERK1/2信号通路。     

七氟烷后处理对脂多糖致急性肺损伤大鼠iNOS/NO通路的影响

目的: 探讨七氟烷后处理对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致急性肺损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）/NO通路的影响及作用机制。方法： 将30只大鼠随机均分为5组,生理盐水组和脂多糖组分别于气管内滴注生理盐水(1 mL/kg)或脂多糖(5 mg/kg);七氟烷0.5,1,2 h组于气管内滴注脂多糖4 h后,即急性肺损伤发生,分别吸入2.4%七氟烷0.5,1,2 h,模拟“后处理”方案。6 h后处死大鼠,取肺组织,行HE染色,观察病理变化;免疫组织化学法测iNOS表达;硝酸还原酶法测NO含量。结果： 与生理盐水组相比,脂多糖组肺泡腔内有大量炎性细胞浸润,肺间质及肺泡腔有严重的水肿、出血,肺泡结构破坏严重。七氟烷组肺组织损伤较脂多糖组明显减轻。脂多糖组肺组织内iNOS蛋白表达和NO含量较生理盐水组明显升高(P均<0.01);七氟烷组iNOS蛋白表达和NO含量较脂多糖组明显降低(P<0.01或P<0.05),以七氟烷1 h组和七氟烷2 h组下降更明显(P<0.05)。结论： 七氟烷后处理可减轻脂多糖所致大鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制iNOS/NO信号通路的激活,减轻炎症反应有关。     

卡托普利对SHR大鼠eNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)在高血压发展进程中,卡托普利对SHR内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的改善作用。方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠为空白对照,SHR为模型进行分组实验,7～24周龄SHR灌服卡托普利(3.375 g/(kg·d)),后停药观察至32周龄。测量血压、左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)、主动脉舒张功能、血清亚硝酸根离子(NO₂^-)含量、iNOS、eNOS mRNA以及蛋白含量变化。结果 (1)不同周龄的SHR左室质量指数、血清NO₂^-浓度均高于WKY,主动脉的舒张度均显著低于WKY。(2)mRNA表达含量变化：与WKY相比,不同周龄的SHR的心肌和动脉eNOS和iNOS mRN...     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞COX-2/PGE2、iNOS/NO表达的影响

本实验旨在观察粉防己碱（Tet）对脂多糖（LPS）诱导下RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用 LPS 1 μg/mL刺激生长良好的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型。在不同浓度Tet（1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6mol/L）作用下,用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2（COX-2）和诱导性一氧化氮激酶（iNOS）的表达,用NO检测试剂盒检测细胞培养液中NO的含量,酶免疫分析法检测培养液中前列腺素E₂（PGE₂）含量。结果显示Tet剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE₂、NO的表达,同时抑制其合成酶COX-2和iNOS的表达。表明Tet具有抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达,从而抑制其下游炎性介质NO、PGE₂的表达有关。