中波紫外线对人永生化表皮细胞株凋亡和死亡的影响

观察不同剂量的中波紫外线(UVB)辐射对体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞株)凋亡和死亡的影响.600 J/m2、900 J/m2紫外线照射HaCaT细胞24 h后凋亡率、死亡率均明显高于0 J/m2组(对照组).600 J/m2紫外线照射HaCaT细胞4、8、12、24、48、72 h后凋亡率明显比对照组高,但4、8 h后死亡率与对照组无显著性差异;12 h后死亡率比对照组高;24、48、72 h后死亡率明显比对照组高.随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长,凋亡率和死亡率升高,呈时间和剂量依赖性.     

凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中的表达

目的 观察慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)的调控效应.方法 健康昆明小鼠30只,雌雄各半,鼠龄6～8周,按性别随机分成慢性紫外线损伤组(20只)和对照组(10只),每组雌雄各半,根据性别将小鼠分笼饲养.采用模拟日光紫外线(UVA+ UVB)光源对实验小鼠进行照射,从最小红斑量(UVB 0.07 J/cm2,UVA 0.7 J/cm2)开始,每周增加0.5个最小红斑量,每日1次,每周照射5d,共9周,UVB总剂量达9.45 J/cm2,UVA总剂量达94.5 J/cm2.通过组织学观察、特殊化学染色和表皮厚度测量确定皮肤损伤,应用免疫组化法分别对照射前(W0)和实验9周末(W9)Bax、Bcl-2、Beclin-1和caspase3的表达进行检测,表达强度以免疫反应强度分布指数(IRIDI)表示,并与对照组进行比对分析.分别采用配对t检验和Wilcoxon符号秩和检验对各参数进行比较.结果 慢性紫外线照射后,小鼠表皮厚度明显增加.肉眼观察、组织学观察和胶原纤维、弹性纤维特殊染色均显示损伤组小鼠皮肤临床表现和组织学改变均与慢性紫外线光损伤的人类皮肤较为吻合.在损伤组,照光前Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的表达计分均值分别为0.30、0.25、0.35、0.25,照光后分别为2.70、3.30、3.35、0.25.Beclin-1、caspase3、Bax蛋白表达显著升高,且差异有统计学意义(Z值分别为4.034、4.001、3.970,均P＜ 0.05),Bcl-2蛋白表达变化不明显(Z=0,P＞ 0.05).对照组小鼠Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的均值在W0时和W9时表达差异均无统计学意义(Z值分别为0、0.577、0、0.577,均P＞0.05).结论 慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞中凋亡和自噬的交互调控元件Beclin-1和Bax具有上调表达的作用,而对Bcl-2表达调控效应不显著.这一系列的调控效应可能参与了凋亡和自噬在慢性紫外线皮肤损伤中的交互调控.     

中波紫外线对人永生化表皮细胞株凋亡和死亡的影响

观察不同剂量的中波紫外线（UVB）辐射对体外培养的人角质形成细胞（HaCaT细胞株）凋亡和死亡的影响。600J／m^2、900J／m^2紫外线照射HaCaT细胞24h后凋亡率、死亡率均明显高于0JJ/m^2组（对照组）。600J／m^2紫外线照射HaCaT细胞4、8、12、24、48、72h后凋亡率明显比对照组高，但4、8h后死亡率与对照组无显著性差异；12h后死亡率比对照组高；24、48、72h后死亡率明显比对照组高。随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长，凋亡率和死亡率升高，呈时间和剂量依赖性。     

葡萄籽原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的: 明确葡萄籽原花青素（ GSPE）对 UVB损伤角质形成细胞的保护作用。方法: 体外培养HaCaT细胞,分为正常对照组、UVB组、UVB+GSPE高剂量(200 μg/mL) 、中剂量(100 μg/mL)和低剂量组(50μg/mL)。CCK-8法检测HaCaT细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)和LDH水平。DCFH-DA染色法测定细胞内活性氧水平;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位水平。Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达。结果: UVB+GSPE组与UVB组比较,细胞SOD和GSH-Px活性、Bcl-2 表达量和线粒体膜电位水平增高,MDA、LDH水平、凋亡细胞数、Bax、Cleaved-caspase-3表达和细胞内活性氧水平明显降低。结论: GSPE对中波紫外线辐射诱导的表皮角质形成细胞凋亡、氧化损伤具有一定的保护作用。     

p53蛋白在UVB诱导凋亡的富集表皮干细胞的角质形成细胞中的表达

目的研究p53蛋白在中波紫外线(ultraviolet lightB,UVB)诱导凋亡的富集表皮干细胞的角质形成细胞群中的表达情况。方法分离富集人表皮干细胞的角质形成细胞群和正常角质形成细胞群,使用UVB诱导两种细胞群凋亡,蛋白印迹法比较不同剂量UVB诱导前后两组细胞的p53蛋白表达的差异。结果两种细胞在不同剂量的UVB照射后p53蛋白表达均比照射前显著增加,在20mJ/cm2与40mJ/cm2照射剂量时,富集人表皮干细胞的角质形成细胞群p53蛋白表达高于正常角质形成的细胞群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论富集人表皮干细胞的角质形成细胞p53蛋白表达比其它角质形成细胞对中波紫外线的照射易感。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线辐射后小鼠表皮细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]脂质体对急、慢性中波紫外线（UVB）辐射后BALB／c小鼠表皮细胞凋亡的影响。方法：EGCG脂质体局部外用于BALB／c小鼠背部皮肤,将小鼠分为5组,分别给予中波紫外线180mJ／cm^2照射1次为急性损伤组：30mJ／cm^2每天照射1次,持续30d,为慢性损伤组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：急性损伤组中接受UVB照射的小鼠表皮中大部分细胞发生凋亡,EGCG脂质体未表现出对表皮细胞凋亡的影响;慢性损伤组中照光加药组的凋亡细胞多于其他组,EGCG脂质体表现为促凋亡作用（P〈0．05）。结论：EGCG脂质体不影响急性大剂量UVB辐射所致的表皮细胞凋亡;对慢性低剂量UVB辐射有促凋亡作用。     

中波紫外线诱导皮肤角质形成细胞凋亡机制的研究进展

紫外线照射表皮后引起DNA损伤的表皮细胞通过日晒伤细胞(凋亡的角质形成细胞)的形成来清除。p53、Fas、Trp53等基因的表达促进角质形成细胞凋亡,而survivin的表达则抑制角质形成细胞凋亡。紫外线照射后皮肤可产生环丁烷嘧啶二聚体和6-4光产物,这两种光产物可以作为UVB诱导凋亡的起始信号。凋亡在清除DNA损伤的皮肤起着重要作用。在皮肤中通过凋亡清除DNA损伤的细胞,防止日光诱导癌变,而不是依赖于DNA损伤的校正修复。silibinin对中波紫外线引起人HaCaT永生化角质形成细胞凋亡具有双向调控作用。对UVB引起角质形成细胞凋亡的调控药物,值得进一步研究。     

青海黑果枸杞原花青素对小鼠光老化皮肤的保护作用

目的研究黑果枸杞原花青素对紫外线照射(UV)引起的小鼠皮肤光老化的保护作用。方法 SPF级昆明小鼠50只随机分成5组:正常对照组、模型组、阳性对照组(维生素E组)、原花青素低剂量组、原花青素高剂量组。除了正常对照组,其余组每日颈背部皮下注射5%D-半乳糖(10 ml/kg),同时进行UV[长波紫外线(UVA)+中波紫外线(UVB)]照射。造模第11天开始,正常对照组、模型组每日给予生理盐水灌胃,原花青素低剂量组、原花青素高剂量组每日按剂量[50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)]灌胃黑果枸杞原花青素,阳性对照组每只给予维生素E滴剂0.5 ml,连续用药30 d。肉眼观察各组小鼠皮肤外观及皮下血管变化;以酶生化法测定皮肤组织活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定皮肤组织Bax、Bcl-2及血清中白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。结果与正常对照组相比,模型组皮肤组织中Bax、IL-1、IL-6、TNF-α含量显著上升,ROS、CAT活力,Bcl-2的含量下降(P0.05);与模型组比较,黑果枸杞原花青素低、高剂量组皮肤组织中Bax、IL-1、IL-6、TNF-α含量的表达水平显著下降,ROS、CAT活力,Bcl-2含量上升,差异具有统计学意义(P0.05)。模型组皮肤颜色变暗、粗糙肥厚,出现皱纹,并伴有脱屑;黑果枸杞原花青素组皮肤外观较模型组明显改善。结论黑果枸杞原花青素对UV引起的小鼠皮肤光老化具有保护作用,其机制可能与黑果枸杞原花青素抑制细胞内活性氧产生,降低线粒体通透性,抑制细胞色素C释放,抑制细胞凋亡,减轻炎症反应有关。     

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响.方法:采用45.00 mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及免疫组化检测紫外线照射及经羟氯喹和篙甲醚处理后HacaT细胞活性变化及其Fas和Bcl-2蛋白水平的变化.结果:①羟氯喹及小剂量(≤50mg/L)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100mg/L蒿甲醚增加细胞活性.但浓度超过200mg/L,可见大量细胞悬浮于培养液上;②与未照射组相比UVB照射可使HaCaT细胞表达Fas增加;③与UVB组相比,UVB 羟氨喹(Q)组、UVB 25 mg/L蒿甲醚(H1)组、UVB 50mg/L蒿甲醚(H2)组、UVB 100mg/L蒿甲醚(H3)组使HaCaT细胞表达Fas减少;④与未照射组相比,UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;⑤与UVB组相比,UVB Q组、UVB H1组、UVB H2组、UVB H3组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加.结论:小剂量(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用.蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡.     

UVA联合UVB照射对原代人角质形成细胞增殖的影响

目的 探讨95％长波紫外线(UVA)联合5％中波紫外线(UVB)照射对原代人表皮角质形成细胞(HEK)增殖的影响,为构建日光对人工皮肤光损伤模型提供实验依据.方法 用总剂量分别为0、2.5、5、10、20、30、40、60 J/cm2的紫外线(含95％UVA和5％UVB),分别照射体外培养的HEK,继续培养24 h后,用噻唑蓝(MTr)法检测细胞活力,用SPSS软件计算引起HEK半数损伤时的紫外线照射剂量.结果 8种剂量紫外线照射后,HEK相对抑制率分别为0、1.03％、6.60％、17.28％、31.28％、49.59％、59.67％、70.99％,当总照射剂量≥10 J/cm2时,HEK相对抑制率与对照组相比,差异有统计学意义(F=62.11,P＜0.05);HEK相对抑制率为50％时的紫外线照射总剂量为31.31 J/cm2.结论 随着紫外线照射剂量的加大,HEK增殖活力降低,31.31 J/cm2为HEK半数死亡的照射剂量.