脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的：研究脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内的分布及反义显像诊断结肠癌的可能性,为反义显像和反义治疗的临床应用提供实验依据。方法：制作荷瘤裸鼠模型,每只小鼠尾静脉注射约0.30MBq脂质体包裹的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸,于不同时间眼眶静脉采血后处死小, 测定不同组织中及标准源的放射性计数。荷瘤裸鼠尾静脉注入脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸（30－90mg),于注射后不同时间显像,观察其在肿瘤组织的浓聚情况,并以脂质体介导的^99Tc^m标记的正义和无义寡聚核苷酸为对照。结果：胃、网状内皮系统和肿瘤组织放射性浓聚较高,其次为心和血,余组织中放射性分布较少。肿瘤组织中放射性在2h时达到高峰,以后迅速降低。在2h时,脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸能清晰显示肿瘤部位,而对照组则不能。结论：脂质体介导的^99Tc^m-反义寡聚核苷酸可用于结肠癌的诊断,但临床应用前还需进行大量的研究。     

脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义肽核酸在荷SKOV3卵巢癌裸鼠体内的分布及显像

目的 评价脂质体介导对^99Tc^m-表皮生长因子受体（EGFR） mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内特异显像及生物学分布的影响.方法 利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFRmRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交,再以配体交换法对反义探针进行^99Tc^m标记,然后以脂质体包裹反义探针,用HPLC法鉴定标记物的标记率.分析脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA在体外人卵巢癌SKOV3细胞中的摄取率及滞留率的差别,同时分析两者在荷SKOV3卵巢癌裸鼠模型体内生物学分布及显像情况的差异.数据分析采用两样本t检验（或t＇检验）及Wilcoxon秩和检验.结果 脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA6h内标记率均在95％以上.两者在注射后1、2、4、6、12及24 h后的细胞摄取率分别为（28.90±1.12）％、（32.76±1.20）％、（38.20±3.11）％、（41.23±1.60）％、（46.63±1.55）％和（46.78±2.14）％,（3.51±0.39）％、（3.90±0.40）％、（4.69±0.18）％、（5.91±0.26）％、（5.30±0.22）％和（5.39±0.17）％,差异有统计学意义（t＇=47.11～58.67,Z=2.80,均P＜0.05）,两者滞留率差异亦有统计学意义（t＇=7.25～11.55,Z=2.80,均P＜0.05）.注射两探针后1h荷瘤裸鼠肿瘤部位均可显像,但脂质体介导使肿瘤显像更为清楚,肿瘤摄取高峰T/NT由3.95上升至5.02,并明显增加注药后各时间点T/NT（t=3.96,t＇=12.65～ 14.69,Z=2.83～5.29,均P＜0.05）.分子探针主要分布在肿瘤、肾脏及肝脏组织中.肿瘤摄取量随时间逐渐增加,1h时非介导组为（1.49±0.09） ％ID/g,介导后为（2.15±0.21） ％ID/g;6 h时分别为（3.90±0.65） ％ID/g和（5.00±0.10） ％ID/g;脂质体介导后可增加注药后各个时间点的肿瘤/肌肉（t=11.24,t＇=3.96～ 11.94,均P＜0.05）.结论 脂质体介导可以明显促进^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA进入细胞,并提高对EGFR高表达肿瘤的显像效?     

反义显像技术的研究

反义显像是利用放射性核素标记的反义寡核苷酸,通过体内核酸杂交而显示目的基因表达的一种显像方法,具有设计简便,合成简易,安全性高,免疫原性低等特点,成功的反义显像要求反义寡核苷酸易被细胞摄取,耐酸酶,杂交稳定,标记简单,脂质体,受体等介导的反义RNA转移,反义寡核苷酸的化学修饰以及标记方法的改进将大大加快反义显像的临床应用。     

99Tcm—survivinmRNA反义肽核酸制备及荷瘤裸鼠基因显像研究

目的制备99Tcm标记的survivinmRNA反义肽核酸（PNA）探针,并进行荷瘤裸鼠体内基因显像,研究其对肿瘤早期诊断的价值。方法化学合成survivinmRNA的反义、无义PNA,在5’端连上4个氨基酸[Gly一（D）Ala—Gly—Gly],形成1个类似N。结构的强螯合基团;为消除空间阻碍,引入1个1一氨基丁酸（Aba）作为隔离物,利用配体交换法进行99Tcm标记。用HPLC及ITLC对标记物的标记率、放化纯进行鉴定。并对反义、无义组各5只人肺癌A549荷瘤裸鼠行99Tcm一survivinmRNA反义、无义PNA体内显像。注药后1,2和4h分别显像,利用ROI测得肿瘤与对侧组织的rr／NT比值。结果分析采用SPSS13．0软件进行成组t检验。结果99Tcm一survivinmRNA反义PNA即刻标记率为（95．48±1．92）％,放化纯〉95％,且标记物体外稳定性好,与血清保温24h后标记率仍〉85％。无义PNA标记率与之基本一致。99Tcm一survivinmRNA反义PNA在肿瘤组织内特异性浓聚,随时间延长,浓聚程度逐渐增加,1,2和4hT／NT值分别为2．70±0．28,3．44±0．35和4．21±0．63。无义PNA在肿瘤组织中稍有浓聚,但在4h内变化不大,4h时T／NT值（3．12±0．50）与反义组差异有统计学意义（t=2．918,P：0．019）。结论99TcmsurvivinmRNA反义PNA即刻标记率高,稳定性好,无需纯化即可用于显像,在肿瘤组织中特异性浓聚,对肿瘤的早期诊断有潜在价值。     

99Tcm-RGD-4CK在动物体内的分布及显像

目的探讨^99Tc^m-环形精氨酸．甘氨酸-天冬氨酸九肽（RGD-4CK）在健康小鼠体内的生物分布及在健康家兔体内的动态显像表现。方法采用预锡化法以^99Tc^m直接标记RGD-4CK，3MM色谱纸层析测定^99Tc^m-RGD-4CK标记率，并计算其比活度。研究^99Tc^m-RGD-4CK于1、5、20、60、90、120、180和240min在健康小鼠体内的生物分布特性；通过SPECT显像，结合感兴趣区（ROI）时间-放射性曲线分析，观察240min内^99Tc^mmRGD-4CK在健康家兔体内的动态分布变化。结果^99Tc^mmRGD-4CK的标记率为（97．80±0．28）％，比活度为（11．91±0．04）TBq／mmol。小鼠血液放射性清除迅速，通过肾脏排泄较快，其余组织器官放射性均随时间逐渐降低，而脑放射性水平始终最低。家兔各组织器官放射性均随时间逐渐下降，与同一时间肾、心、肝相比，肺、胃、肌肉放射性呈低水平；1min双肾即显影，5min心、肝影开始减淡，肺放射性分布均匀，强度低于肝脏，膀胱显影；5min后膀胱影持续增浓，20min后软组织影逐渐减淡；胆囊始终未显影，腹部放射性呈持续低水平，胃区放射性始终缺损，颈部未见明显放射性浓聚。结论^99Tc^m-RGD-4CK制备方法简便，标记率高，体内稳定性好，具有比较珲椒并符合实际的动物体内动力学表现。     

99Tcm-c-myc mRNA反义肽核酸荷结肠癌裸鼠显像

目的 制备99Tcm-c-myc mRNA反义肽核酸(PNA)显像探针,通过反义显像研究99Tcm-c-myc mRNA反义PNA早期诊断结肠癌的可行性.方法 利用化学合成法在c-myc mRNA反义PNA片段的5'端连上4个氨基酸[G-(D)-A-G-G]和1个氨基丁酸(Aba),再利用配体交换法对c-myc mRNA反义PNA行99Tcm标记.并用同样的方法制备99Tcm-c-myc mRNA无义PNA.进行人结肠癌LS174-T荷瘤裸小鼠显像.采用SAS 6.12软件进行统计学处理.结果 99Tcm-c-myc mRNA反义PNA 6h内标记率＞95%.血清孵育5h后标记率为91.1%.无义PNA的标记率与反义PNA基本一致.1h时反义组荷瘤裸鼠右后肢肿瘤部位可清晰显影,4h内未见明显变化.无义组肿瘤部位始终未见明显放射性摄取.注射99Tcm-c-myc mRN反义PNA 1h后,反义组与无义组肿瘤与对侧组织的放射性(T/N)比值分别为5.06±1.35和1.53±0.30,差异有统计学意义(t=4.47, P=0.04).结论 99Tcm-c-myc mRNA反义PNA可在荷瘤裸鼠活体内与高表达c-myc基因的人结肠癌LS174-T肿瘤组织特异结合,在肿瘤反义显像中有潜在的应用价值.     

小鼠双微体扩增基因反义探针用于荷人前列腺癌裸鼠的显像研究

目的探讨^99Tc^m标记针对小鼠双微体扩增基因（MDM2）mRNA的ASON（MDM2反义探针）用于前列腺癌无创性基因显像的价值。方法以HYNIC为螯合物,对含MDM2mRNA某段序列的ASON、错义寡核苷酸（ASONM）进行^99Tc^m标记,检测标记率及放化纯。建立荷人前列腺癌LNCaP裸鼠肿瘤模型,分为3组（每组10只）,进行^99Tc^m-HYNIC—ASON和^99Tc^mHYNIC—ASONM、^99Tc^mO4^-（对照）肿瘤显像。测量肿瘤／对侧肢体（T／M）比值,采用单因素方差分析对测量数据进行统计学分析。结果ASON的^99Tc^m标记率为（65．15±2．05）％,ASONM的^99Tc^m标记率为（64．93±2．18）％。^99Tc^m-HYNIC—ASON和^99Tc^m-HYNIC—ASONM经纯化后,放化纯均达90％以上。不同探针注射后1、4和10h时,^99Tc^m-HYNIC—ASON组T／M比值分别为3．217±0．125、3．749±0．201和4．028~0．186;^99Tc^m HYNIC—ASONM组分别为1．579±0．128、1．715±1．140和1．683±0．139;对照组分别为2．146±0．132、1．847±0．124和1．528±0．152.^99Tc^m-HYNIC—ASON1、4、10hT／M比值与对照组和错义组差异均有统计学意义（F=213．37～235．41,t=3．527～4．738,均P〈0．01）,而^99Tc^m-HYNIC—ASONM组各T／M比值与对照组差异均无统计学意义（t=2．154、2．287和2．236,均P〉0．05）。结论^99Tc^m标记的MDM2反义探针可在荷人前列腺癌裸鼠模型的肿瘤组织中特异性聚集,可以在早期对前列腺癌进行无创性的基因诊断。     

99Tcm标记反义肽核酸探针的制备及其荷瘤裸鼠体内分布

目的 探讨99Tcm标记反义肽核酸(PNA)探针的新方法及其在生物体内的分布.方法 合成12mer且5'端含有四肽G-(D)-A-G-G的c-myc mRNA反义、无义PNA片段,利用G-(D)-A-G-G形成的N4结构为螯合基团进行99Tcm标记,用聚酰胺薄膜层析法和高效液相色谱仪法(HPLC)测定其标记率和标记物的稳定性,并行人结肠癌荷瘤裸鼠体内分布[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)]及显像研究.采用SAS 6.22软件对数据进行分析.结果 反义、无义PNA片段合成物的纯度>95%.99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的标记率>95%,标记物室温放置18 h测定其标记率仍可达95%以上.c-myc mRNA反义、无义PNA片段4～8℃下放置3个月标记率仍>95%.HPLC测定标记物呈单峰.99Tcm标记c-myc mRNA反义PNA主要分布在荷瘤鼠肾、脾、肿瘤、肠道、肝组织中,99Tcm标记c-myc mRNA无义PNA在荷瘤鼠血液、脾、肾、肝及肺组织中分布较多;注射后4 h两者在荷瘤鼠肿瘤组织中的分布差异有统计学意义[(1.11±0.12)%ID/g和(0.14±0.02)%ID/g;t=14.75,P<0.01].99Tcm标记c-mycmRNA反义PNA在小鼠体内肿瘤/肌肉、肿瘤/肺的摄取比值较高,肿瘤显像明显.结论 用99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的方法简单,标记率高,标记物稳定,前者有望成为一种新型肿瘤显像剂.     

脑多巴胺转运蛋白99Tcm-TRODAT-1显像研究

目的探讨99Tcm-2β-[N,N′-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(TRODAT-1)多巴胺转运蛋白(DAT)显像剂的生物学行为和体内分布及显像条件.方法正常志愿者13例.根据99Tcm-TRODAT-1自定制备程序和质量标准,制备99Tcm-TRODAT-1,放化纯(Rp)>85%,注射量925 MBq/ml.所有受检者行动态显像、全身显像和断层显像.结果 99Tcm-TRODAT-1"弹丸"样静脉注射后约2 min脑内放射性趋向稳定.99Tcm-TRODAT-1入脑量仅为(1.91±0.43) %ID;放射性主要分布在肝脏(27.60±11.15) %ID,胃肠道(14.13±2.24) %ID,肺(11.90±1.67) %ID;而心肌、肾脏、胆囊、甲状腺分布较少,分别为(4.62±0.98) %ID、(3.21±1.10) %ID、(2.37±0.67) %ID和(0.50±0.07) %ID.软组织内分布大量的放射性,为(32.00±11.32) %ID.99Tcm-TRODAT-1主要从消化系统清除,部分经肾脏清除.在99Tcm-TRODAT-1注射后150～170 min断层显像示纹状体和周围脑组织反差最明显.结论 99Tcm-TRODAT-1注射液达到临床使用标准.     

99Tcm-DTPA-DG显像对乳腺癌荷瘤裸鼠化疗疗效的评价

目的 探讨99Tcm-DTPA-脱氧葡萄糖(DG)对乳腺癌荷瘤裸鼠化疗疗效的评价.方法 建立乳腺癌荷瘤裸鼠模型.取裸鼠25只,体质量20～25 g,分为5组,接种乳腺癌MCF-7细胞9 d后进行化疗.对照组:注射0.1 ml生理盐水;联合化疗1组:分别按体质量注射紫杉醇11 mg/kg和阿霉素4.7 mg/kg;联合化疗2组:分别按体质量注射紫杉醇5 mg/kg和阿霉素2.3 mg/kg;顺铂1组:按体质量注射顺铂8 mg/kg;顺铂2组:按体质量注射顺铂4 mg/kg.裸鼠化疗后分别于即刻和第7,14,21及28天注射99Tcm-DTPA-DG 3.7 MBq/只,0.5 h后显像,勾画感兴趣区(ROI),计算肿瘤/健侧对应部位放射性(T/NT)比值,并测量肿瘤体积.第28天完成显像后,处死裸鼠,测量肿瘤/血液及肿瘤/肌肉放射性比值,计算抑瘤率.结果 肿瘤组织吸收99Tcm-DTPA-DG较多,肿瘤/肌肉放射性比值对照组为5.65,高于联合化疗1组(0.98,t=8.735,P＜0.01)、联合化疗2组(1.13,t=4.826,P＜0.01)和顺铂1组(0.84,t=3.198,P＜0.05).肿瘤/血液放射性比值对照组为3.1,高于联合化疗1组(0.83,t=7.652,P＜0.01)、联合化疗2组(1.29,t=3.976,P＜0.05)和顺铂1组(0.96,t=3.945,P＜0.05);顺铂2组因不完全缓解,肿瘤/血液放射性比值为2.66,与对照组差异无统计学意义(t=2.496,P＞0.05).99Tcm-DTPA-DG可使肿瘤组织清晰显像,联合化疗1组肿瘤体积400.0 mm3,与对照组(1132.8 mm3)差异有统计学意义(t=3.952,P＜0.01);联合化疗2组肿瘤体积633.9 mm3(t=4.592,P＜0.05),顺铂1组肿瘤体积699.4 mm3(t=4.837,P＜0.05),这2组与对照组差异有统计学意义.除顺铂2组外,余各化疗组与对照组间T/NT比值差异有统计学意义(F=1018.165,P＜0.01).结论 化疗效果好的肿瘤,99Tcm-DTPA-DG显像示肿瘤体积较小,瘤体内放射性分布较少;而化疗效果差的肿瘤体积逐渐增大,瘤体内放射性分布较多.99Tcm-DTPA-DG显像可用于指导荷瘤裸鼠的化疗.     

^99Tc^m—hTERT mRNA反义分子探针荷MCF-7乳腺癌裸鼠显像

目的制备^99Tc^m-人端粒酶催化亚单位（hTERT）mRNA反义寡核苷酸（ASON）显像分子探针并验证其在荷MCF-7乳腺癌裸鼠早期诊断中的价值。方法采用双功能螯合剂法制备^99Tc^m-hTERT mRNA无义寡核苷酸（SON）、ASON探针。建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,运用阳离子脂质体介导法进行活体显像。采用SPSS12．0软件进行单因素方差分析。结果^99Tc^m-hTERT mRNA ASON标记率达到（76±5）％,放化纯〉96％,比活度达到1850kBq／μg。室温放置和健康人血清孵育24h后的放化纯均〉93％。SON与ASON的标记率基本一致。注射后4h反义组荷瘤裸鼠右上肢接种肿瘤部位可见放射性摄取,6～8h后显影清晰;无义组始终未见肿瘤部位放射性浓聚。反义组有和无脂质体介导的肿瘤／非肿瘤组织放射性（T／NT）比值分别为8．02±0．03和7．55±0．12,差异无统计学意义（t=-1．99,P〉0．05）;无义组有和无脂质体介导的T／NT比值分别为1．23±0．06和1．33±0．15,差异无统计学意义（t=0．42,P〉0．05）。但是分别比较反义组与无义组、脂质体介导组与无介导组间差异均有统计学意义（t=26．30和28．71,P均〈0．001）。结论^99Tc^m-hTERT mRNA ASON在荷瘤裸鼠活体内可与高表达hTERT基因的人乳腺癌MCF－7肿瘤组织特异靶向结合,在肿瘤分子功能显像中具有潜在应用价值。     

P-糖蛋白对荷瘤裸鼠体内摄取18F-FDG的影响

目的 研究Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠在依克立达(GH20918)干预前后的18F-FDG摄取变化,在活体内评价P-gp对18F-FDG摄取的影响.方法 分别用人乳腺癌Bcap37细胞及转MDR1基因的Bcap37(Bcap37/MDR1)细胞建立荷瘤裸鼠模型.荷瘤裸鼠培F-FDG microPET动态采集:10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只)经尾静脉给予7.4 MBq 18F-FDG,给药后立即采集,共采集90 min,得到各个时间段的动态显像图,绘制ROI的TAC.隔日相同采集及处理方法,尾静脉给予含GF120918(按体质量2.0 mg/kg)的18F-FDG 7.4 MBq,获得GF120918干预后肿瘤组织18F-FDG摄取的TAC,观察GF120918干预前后TAC的变化.另取10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只),行18F-FDG microPET静态显像,并比较GF120918干预前后肿瘤组织的SUV mean的变化.数据分析采用两样本t检验.结果 Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织在GF120918干预前后的TAC差异元统计学意义,GF120918可明显增加Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织平台期18F-FDG的摄取水平.荷瘤裸鼠静态microPET显像示,GF120918干预前后Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织的SUVmean分别为1.028±0.045、1.052±0.028和0.712±0.031、1.015±0.043,前者干预前后的SUVmean差异无统计学意义(t=1.792,P＞0.05),后者干预前后的SUVmean差异有统计学意义(t=3.365,P＜0.05).在无GF120918存在情况下,Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织的18 F-FDG摄取要高于Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠(t=3.952,P＜0.05);在给予GF120918后,两者间18F-FDG摄取水平差异无统计学意义(t=1.835,P＞0.05).结论 18F-FDG是P-gp的底物之一,18F-FDG联合GF120918可能是一种有效、无创检测肿瘤MDR的方法.     

Pharmacokinetic study of radiolabeled anti-colorectal carcinoma monoclonal antibodies in tumor-bearing nude mice

Monoclonal antibodies (MoAbs) 17-1A and 19-9, which specifically bind human colorectal carcinoma (CRC) cells, were tested for their usefulness in localizing colorectal tumors in nude mice. One of the ¹³¹I-labeled MoAbs and an irrelevant ¹²⁵I-labeled immunoglobulin of the same isotype were injected into nude mice simultaneously bearing a human CRC and a human melanoma. The percentage of the injected dose of antibody per gram of tissue, the CRC/tissue ratios of antibody distribution, and the localization indices were calculated at various time intervals (2 h to 9 days). For both MoAbs, labeling to a specific activity of 10 Ci/g by the iodogen method gave optimum immunoreactivity. The accumulation of MoAb 17-1A in CRC reached its maximum at 5 days and remained at this level for up to 9 days postinjection. For MoAb 19-9, which detects a circulating antigen shed by the tumor into the serum, the accumulation in the CRC was maximum at 24 h, and decreased thereafter. The CRC/organ ratios and localization indices for both MoAbs increased with time in the CRC tissue, but remained low and unchanged in the melanoma and normal tissues. Using F(ab)₂ antibody fragments, faster kinetics with earlier maximum accumulation, higher tumor/organ ratios, and better localization indices were achieved than with intact MoAbs. The data obtained was useful in defining parameters which must be considered before radiolabeled MoAbs are used in cancer patients for diagnostic purposes.