应用双亲株灭活原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

目的：选育高产优质林可霉素产生菌。方法：将林可霉素产生菌S78－1^#,N65-2^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将两种灭活原生质体用PEG融合，从融合株中筛选高产优质菌种。结果：获得82－201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65－2^#,S78-2^#提高17％和52％，且色素分泌少，传代稳定性强。结论：双亲株灭活原生质体融合选育林可霉素高产菌株是值得推广的一种选育方法。     

非对称灭活原生质体融合法选育头孢菌素C高产菌株

目的选育高产头孢菌素C产生菌。方法分别以紫外线和加热灭活头孢菌素C产生菌Cephalosporium acremonium 18-U5和Cephalosporium acremonium 18-M6原生质体,并将两种灭活的原生质体经PEG4000融合,从融合株中筛选头孢菌素C高产菌株。结果获得高产头孢菌素C的顶头孢霉融合株Cephalosporium acremonium F20,发酵单位达4 655 mg.L-1。与双亲菌株相比分别提高了42.4%和34.9%。结论非对称灭活原生质体融合法选育头孢菌素C高产菌株的方法值得推广。     

原生质体诱变及高通量筛选选育链霉素高产菌株

目的 通过诱变和筛选方法的研究,提高灰色链霉菌(Streptomyces griseus)生产链霉素的水平。方法 优化灰色链霉菌的原生质体的生成和再生条件,并对得到的原生质体进行紫外诱变,然后利用微孔板高通量方式对获得菌株进行筛选。结果经过诱变选育获得一株菌NP-11703,其链霉素产量在100L罐上比出发菌株提高了21.8%。结论 用紫外诱变原生质体,可以有效提高灰色链霉菌产链霉素的能力。结合高通量筛选模型的应用,可大大加快高产菌株的筛选效率。     

复合诱变筛选avermectins高产菌株

由Streptomyces avermitilis初始菌株经过自然分离可以得到三种不同类型的菌株，即灰色粉末型、白色和光秃型。其中灰色粉末型产素水平最高，摇瓶发酵效价达到6835．1μg／ml，B1组分达到56．3％。经过紫外线和亚硝基胍对初始菌株的孢子的诱变及对其原生质体的诱变再生。并且经过异亮氨酸和链霉素的定向筛选，得到的高产菌株摇瓶发酵效价达到8542．9μg／ml，B。组分达到64．9％；同时通过对高产菌株进行传代培养检验其传代稳定性，结果表明，传代3代后，菌株开始退化，并且其发酵效价有比较显著的下降。     

原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株

目的 筛选获得阿维拉霉素A含量高的菌株,进一步提高绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogene)发酵阿维拉霉素的水平。方法 对绿色产色链霉菌AVL4(S. viridochromogene AVL4)菌株原生质体制备及再生条件进行了优化,并在此基础上,采用ARTP诱变系统对其原生质体进行了诱变研究。结果 S. viridochromogene AVL4原生质体制备和再生的最佳条件为：以活化斜面转接至种子摇瓶培养24h的菌丝体为出发菌丝体,以SMM溶液作为渗透压稳定剂,采用12mg/mL的溶壁酶,30℃酶解反应60min。以原生质体为诱变对象,ARTP处理40s后的菌株经菌落形态初筛和摇瓶发酵复筛,获得一株编号S251的菌株,其摇瓶发酵阿维拉霉素的生物效价较出发菌株提高19.3%,其中,阿维拉霉素A占组分含量81%,较原始出发菌株AVL4含量提高6.4%,而且斜面连续转接五代遗传相对稳定。另外,成功实现变株S251的50L罐发酵验证,其产素水平最高达到4500U/mL,较对照菌株AVL4提高27.4%。结论 ARTP处理AVL4菌株原生质体,能够有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力,获得的变株S251具有非常好的生产阿维拉霉素的工业化应用潜力。     

应用原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

将林可霉素产生菌N65—2^#、S78—1^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将灭活原生质体用PEG融合，从中获得92-201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65—2^#、S78—1^#提高17％、52％，且色素分泌少，传代稳定性强。     

通过原生质体融合获得青霉素高产菌株

采用两株分别带有不同抗药性标记的产黄青霉原生质体以1:1相混合,用30％的聚乙二醇(MW6000)原生质体融合处理。将混和物涂布在补给有两种药物同时存在的高渗性分离培养基上,培养后获得异核体菌落。洗下异核体分生孢于继续分离在补给有两种药物同时存在的分离培养基上,得到了同时带有两种抗性标记的重组体。纯化后,进行抗性稳定性和摇瓶效价的测定,将一株具有双重抗性、摇瓶发酵效价较高的菌株作出发菌株,经诱变因子处理后,获得了一株43u7c—57菌株,在摇瓶中效价比生产菌株平均提高4.94％,该菌株在40吨发酵罐试生产后,发酵效价平均提高4.4％,产量则平均增加12.15％。     

黑暗链霉菌原生质体融合

报道了黑暗链霉菌原生质体制备和融合的方法。将一原养型亲株原生质体经紫外线灭活2分钟,与另一苯丙氨酸缺陷型突变株原生质体等量混合,40％PEG处理,32℃保温3分钟,获得了重组后代,经分析,融合子的代谢产物中次组分的含量有所降低。     

原生质体再生法选育耐自身代谢产物的卡那霉素链霉菌高产菌株

以卡那链霉菌株KA01为出发菌株,酶法制备原生质体,在含有高浓度的卡那霉素的培养基再生或经UV诱变处理后再生,从再生菌落中分离突变菌株。从中获得一高产突变株KA02,其摇瓶相对效价比出发株提高18%,大罐生产水平提高8%。     

阿维菌素产生菌的诱变育种

目的提高产生菌B1a组分的产量。方法采用诱变剂亚硝基胍处理菌种 ,以含 1g·L-1甲硫氨酸的分离培养基作为定向筛选的分离平板 ,挑选生长快的菌落进行初筛、复筛。结果筛选得到高产菌株中B组分含量显著提高 ,其中得到的突变株M— 2 0经摇瓶初、复筛和传代实验表明是稳定的B组分高产变异株 ,其B组分含量达 82 1% ,较出发菌株提高 14 6 % ,其中B1组分达5 2 4 % ,较出发菌株提高 19 3%。结论采用NTG诱变结合使用含 1g·L-1甲硫氨酸的平板进行筛选可以获得阿维菌素B组分显著提高的菌株     

链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株

为提高菌株avermectin的产量，本文以链霉素抗性为选择压力，对除虫链霉菌Streptomyces avermi-tilis进行紫外诱变（253.7nm,30w，照射时间45s)，得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高25%以上的4株突变株，其中2株提高水平达30%以上，实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时，对其机理和意义作了一些探讨。     

Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育

用紫外线处理ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ（ＡＶＭ）产生菌ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓＸＣ１－２５，并在含有Ｌ－异亮氨酸（Ｌ－Ｉｌｅ）的平板培养基上筛选Ｌ－Ｉｌｅ诱导变种。结果表明：Ｉｌｅｉ变株发酵产生的ＡＶＭＢ１ａ效价高于自然分离株与紫外线诱变株，其中Ｉｌｅｉ变株ＸＣ２－２６的ＡＶＭＢ１ａ效价较亲株提高２２％。该变株经自然分离获得菌株ＸＣ３－８，其ＡＶＭＢ１ａ效价比出发菌株提高５０％以上，传代试验表明菌株ＸＣ３－８的形态和高产性能稳定，它在７ｍ３发酵罐生产试验，产生ＡＶＭＢ１ａ效价与发酵指数均比出发菌株提高５６％。     

恩拉霉素高产菌株选育的研究#br#

目的 进一步提高恩拉霉素发酵生产水平。方法 对杀真菌链霉菌RN16-7进行ARTP(常压室温等离子体)等离子与庆大霉素复合处理。结果 经大量筛选,得到了恩拉霉素高产突变株RN16-242,其遗传性状稳定,发酵效价达7423u/mL,比出发菌株RN16-7(4703u/mL)提高了57.8%。菌株保存,采用甘油管低温保藏法、沙土管保藏法和冷冻真空干燥保藏法进行了比较,结果是甘油管低温保藏法最好。     

链霉菌种内融合重组子产生新活性物质的分离和初步鉴别

从农抗５１０２产生菌（吸水链霉菌应城亚种）的种内融合中筛选到１株融合重组子ＦＲ－００５，它除了产生亲本所产生的３种抗生素外，尚能产生亲本没有的一种新活性物质。通过正丁醇萃取从发酵滤液中分离到这种对苏云金芽孢杆菌和啤酒酵母有抑制活性的物质，再经过硅胶柱、氧化铝柱和微晶纤维素柱依次连续分离，进一步又用硅胶Ｇ薄层层析分离，即得到纯度相当高的只对苏云金芽孢杆菌有活性的精制品。精制品经过稳定性、呈色反应、紫外可见光谱、纸层析谱、氨基酸组成等检测，表明该物质是一种多肽类抗生素     

原生质体再生与诱变在硫霉素产生菌选育中的应用

以硫霉素产生菌卡特利链霉菌３５８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｔｌｅｙａ３５８）为原始菌株,用原生质体形成与再生结合物理、化学诱变的方法进行菌种选育。在最适条件下原生质体释放浓度和再生率分别为１．６×１０９／ｍｌ和２９．５％。原生质体再生处理后,硫霉素产量变异向正方向移动,筛选到１株ＰＲ－１１７,相对效价提高６０％。分别以菌株ＰＲ－１１７的孢子和原生质体进行紫外线及亚硫酸氢钠诱变,原生质体对诱变剂的敏感性强于孢子,致死率增加,效价分布更分散。原生质体与孢子紫外线诱变正变率分别为１６．５％和９％,亚硫酸氢钠诱变的正变率都为４％。从原生质体紫外线诱变株中筛选到１株ＰＲｕ－３３６,相对效价比原始菌株提高９０％。