高效液相色谱-质谱联用测定大鼠体内西罗莫司血药浓度

 目的 建立测定SD大鼠体内雷帕霉素（RAPA）血药浓度的HPLC-MS/MS联用方法。方法 色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈（2.0 mm×250 mm,5 μm）;以甲醇-水（90∶10）为流动相;流速0.25 mL·min-1;柱温55 ℃。选用ESI源,以多反应采集模式（MRM）进行正离子检测,RAPA m/z 936.6→409.2和丙酸睾酮（内标）m/z 345.4→109.1。取全血样品经液-液萃取后,HPLC进样10 μL。结果 RAPA的线性范围为0.54～108.00 μg·L-1,定量下限为0.54 μg·L-1,日内、日间精密度（RSD）均小于12％。结论 本方法精密、准确,适用于RAPA在大鼠体内的药动学研究。     

SPE-LC-ESI-MS/MS测定人血浆中咪达普利拉浓度及其在药动学研究中的应用

 目的 建立测定人血浆中咪达普利拉浓度的固相萃取高效液相串联质谱电喷雾检测法(SPE-LC-ESI-MS/MS)。方法 以美国 Agilent Eclipse plus C₁₈（4.6 mm×150 mm,3.5 μm）为色谱柱,流动相为甲醇-水（含 0.005 mol·L-1 甲酸铵,含 0.1% 甲酸）（87∶13）;流速：0.5 mL·min-1;柱温：40 ℃。样品用Agilent C8固相小柱净化。经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM )对咪达普利拉(m/z 378.2→206.2)和内标依那普利拉(m/z 349.1→206.1)进行测定。结果 咪达普利拉的高(20 μg·L-1)、中(10 μg·L-1 )、低(1 μg·L-1。)3个质量浓度的方法回收率分别为102.44％,102.46％和105.69％,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15％;分析方法的最低定量限为0.5 μg·L-1。线性范围为0.5~25 μg·L-1,回归方程为y=0.480 7x+0.008 7×10-4,r=0.997 6（n=6）。结论 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血药浓度监测和药动学研究。     

LC-MS/MS方法同时测定人血浆和尿液中乌头碱与次乌头碱的含量

 目的 建立同时测定血浆和尿液中乌头碱（aconitine）与次乌头碱（hypaconitine）含量的LC-MS/MS分析方法。 方法 采用Phenomenex Gemini C₁₈柱 (4.6 mm×150 mm,5 μm) 为色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸（70∶30）为流动相,流速为0.5 mL·min-1,以乙醚提取血浆和尿液中乌头碱与次乌头碱。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过API3200三重四级杆串联质谱仪,采用多反应离子监测（MRM）对乌头碱(m/z 646.3→105.2)与次乌头碱(616.3→105.2)进行测定。结果 生物样品中乌头碱在0.5~40 μg·L-1内、次乌头碱在0.25~25 μg·L-1内线性关系良好;乌头碱与次乌头碱最低定量限分别为0.5和0.25 μg·L-1,在尿液中的平均提取回收率76.54%~81.25%,血浆中的平均提取回收率73.22%~80.31%;日间和日内精密度均小于15%。结论 本方法简便、灵敏可靠,适用于血浆、尿液中乌头碱与次乌头碱的分析。     

HPLC-MS测定人血浆中奥美拉唑浓度及药动学

 目的 建立测定人血浆中奥美拉唑的HPLC-MS方法,并应用于药动学研究。方法 血浆样品经蛋白沉淀法处理后,采用Alltima C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,3 μm）,以乙腈-0.05%甲酸溶液（50∶50）为流动相,流速为0.2 mL·min-1,通过电喷雾电离源,以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,通道分别为m/z 346→198（奥美拉唑）和m/z 324→127（内标,格列齐特）,用非室模型计算药动学参数。结果 奥美拉唑的线性范围为0.002 5～2.0 mg·L-1,最低检测限为0.5 μg·L-1,日内、日间精密度均小于15%。低、中、高3个浓度提取回收率均大于95%,其主要药动学参数t_max为（2.5±0.7）h,ρ_max为（1.3±0.3）mg·L-1,AUC_0-t为（2.8±1.2）mg·h·L-1,t_1/2为（1.1±0.3）h。结论 该法操作简便,分析快速,灵敏度高,可用于人血浆中奥美拉唑的测定和药动学研究。     

LC-MS/MS研究新型酪氨酸酶抑制剂UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学

 目的 建立并验证测定大鼠肝微粒体孵育液中UP302含量的高效液相色谱-串联质谱法,研究UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学。方法 经大鼠肝微粒体孵育的UP302样品,经色谱柱分离,电喷雾离子化负离子检测,扫描方式为选择反应监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 301.1→135.2（UP302）和m/z 252.9→132.0（内标大豆苷元）。考察不同孵育时间、底物浓度和微粒体浓度对UP302代谢的影响,确定最佳反应条件。结果 标准曲线线性范围为0.1～20 μmol·L-1,线性关系良好,日内日间准确度在86.42%～112.59%,日内日间精密度均小于9.09%,回收率在100.50%～109.91%之间。确定了酶动力学参数,最大反应速度V_max为196.08 μmol·L-1·min-1·g-1 ,米氏常数K_m为14.98 μmol·L-1,内在代谢清除率CL_int为13.09 mL-1·min-1·g-1。结论 该检测方法快速、专属、灵敏度高,可满足酶动力学检测要求。     

RP-HPLC固相萃取内标法测定猪血浆中亚甲蓝的浓度

 目的 建立高效液相色谱法测定血浆中亚甲蓝浓度的方法。方法 血浆样品经Varian C₂ 柱固相萃取后采用高效液相-紫外检测法（HPLC-UV测定。色谱条件：分析柱：Kromasil-C₁₈（4.6 mm×250 mm, 5 μm;柱温：40 ℃;流动相：乙腈-0.3%三乙胺溶液（磷酸调pH 至2.07=31∶69;流速：1.0 mL· min-1;检测波长：在同一通道中采用可变波长,0~6.7 min中检测波长设定为668 nm来检测亚甲蓝;6.7~10 min检测波长设定为254 nm来检测内标非那西丁。采用内标法定量,以非那西丁为内标物。结果 亚甲蓝浓度在8.55~855 μg·L-1内线性关系良好（r=0.999 5,最低定量限为8.55 μg·L-1。萃取回收率为81.08%~93.57%,批内精密度为3.93%～6.75%,批间精密度为10.16%～13.36%。结论 本方法简便、灵敏、准确、所需血浆量少,为临床开发亚甲蓝的新应用提供了研发基础。     

HPLC-荧光检测法测定大鼠血浆伊伐布雷定浓度

 目的 建立测定血浆中伊伐布雷定浓度的高效液相-荧光(FLU)测定方法,用于临床血浆伊伐布雷定浓度的测定。方法 血浆样品经Varian C₂柱固相萃取后采用HPLC-FLU法在Kromasil C₁₈柱分离,流动相采用乙腈-10 mmol·L - 1磷酸二氢钾（含0.3%10 mmol·L-1盐酸）（28∶72）,流速为1 mL ·min- 1,柱温为25 ℃,荧光检测波长：λ₁=328 nm,λ₂=283 nm。结果 内源性杂质不干扰测定,伊伐布雷定在0.5～50 μg·L-1内线性良好（r=0.999 6）,最低定量限为0.5 μg·L-1。萃取回收率为78.74%～90.77%（n=5）,批内和批间精密度（RSD%）分别为2.53～6.33（n=6）和6.38～8.91（n=3）。结论 建立的固相萃取-HPLC-FLU方法简便、灵敏、准确、所需血浆量少,可以用于临床血药浓度测定。     

大鼠血浆中伊伐布雷定及其活性代谢物的HPLC测定法和药动学研究

 目的 建立HPLC-荧光检测法来同时测定大鼠血浆中伊伐布雷定及其活性代谢物N-去甲基伊伐布雷定的浓度,研究单剂量口服伊伐布雷定在大鼠体内的药动学。方法 以盐酸曲马多为内标,采用C₂柱固相萃取法处理血浆。色谱条件：色谱柱： Kromasil-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：乙腈-10 mmol·L-1的磷酸二氢钾溶液（含0.1%的1.2 mol·L-1盐酸）（22∶78）;流速：1.8 mL· min-1;柱温：25 ℃;荧光检测波长：激发波长λ_ex=283 nm,发射波长λ_em=328 nm。大鼠灌胃给予伊伐布雷定水溶液1.5 mg·kg-1后,按规定时间点取血并测定血浆中的伊伐布雷定及代谢物N-去甲基伊伐布雷定的浓度,绘制药-时曲线,采用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果 伊伐布雷定及其活性代谢物N-去甲基伊伐布雷定的血药浓度线性范围分别为0.5～80,0.8～100 μg·L-1;相关系数（r）均大于0.999,最低定量限分别为0.5和0.8 μg·L-1;方法回收率分别为96.67%～103.47%,90.5%～101.25%;批内精密度分别为9.34%～13.73%,9.14%～12.35%;批间精密度分别为5.9%～10.42%,4.18%～11.39%。伊伐布雷定及其活性代谢物N-去甲基伊伐布雷定在大鼠体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型,其主要药动学参数：t_1/2分别为（2.84±1.43）和（5.732±2.89） h,ρ_max分别为（217.83±86.04）和（9.76±2.79）μg·L-1,t_max分别为（0.57±0.16）和（0.54±0.13）h,AUC_0-t分别为（534.46±179.20）和（25.93±4.34）μg·h·L-1。结论 本实验所建立的同时测定血浆中伊伐布雷定及其活性代谢物N-去甲基伊伐布雷定的HPLC-固相萃取-荧光测定的方法简便、快速、灵敏、准确、可靠,能够满足血药浓度和药动学研究的需要。     

LC-ESI-MS/MS测定人血浆中氨氯地平的含量

 目的建立高灵敏度的LC-ESI-MS/MS测定人血浆中氨氯地平浓度的方法。方法血浆样品经氢氧化钠溶液碱化,乙醚液-液萃取后进行分析。色谱柱COSMOSIL C₁₈柱(2.0mm×150mm,5μm),流动相甲醇-水-甲酸(60∶40∶0.1),流速0.25mL·min^-1,通过电喷雾离子化四极串联质谱,以选择离子反应监测(SRM)扫描方式进行检测。用于定量分析的监测离子分别为m/z409→238(氨氯地平)和m/z237→194(内标,卡马西平)。结果回收率为86%～95%,线性范围为0.1～6μg·L^-1,定量下限为0.1μg·L^-1,检测限为0.01μg·L^-1,应用此法测定了20名健康受试者交叉口服5mg氨氯地平剂量的试验制剂和参比制剂后的血药浓度经时过程。结论该法具有更高的灵敏度,适用于测定口服低剂量药物后人血浆中氨氯地平的浓度。     

高效液相色谱-质谱联用测定大鼠血浆中齐墩果酸质量浓度

 目的建立HPLC-MS/APCI测定SD大鼠血浆中齐墩果酸质量浓度的方法。方法色谱柱为Thermo BDS Hypersil C₁₈(4.6mm×150 mm,5μm)。流动相为甲醇-水(含1‰甲酸),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温40℃,地塞米松为内标,APCI源选择正离子监测,齐墩果酸m/z 439.1,地塞米松(内标)m/z374.0。样品处理采用100μL异丙醇及4 mL氯仿液液萃取,有机层于50℃下氮气吹干,100μL甲醇定容,HPLC进样量为5μL。结果测定齐墩果酸的线性范围为0.063～2.500 mg·L^-1,最低检测限为0.016 mg·L^-1。日内精密度RSD<9.38%,日间精密度RSD<8.96%。方法回收率范围为97.00%～99.69%。结论本方法精密、准确,适用于齐墩果酸在大鼠体内的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱联用测定人血浆中伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬和苯海拉明的浓度

 目的建立同时测定人血浆中伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的液相色谱-串联质谱方法。方法血浆中加入内标酚妥拉明后,进行固相萃取,以甲醇-0.5%甲酸水溶液(55∶45)为流动相,经C₁₈柱分离后;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z 166.4→m/z 115.2(伪麻黄碱),m/z258.2→m/z157.1(O-去甲基右美沙芬),m/z256.2→m/z167.2(苯海拉明),m/z282.2→m/z212.2(内标,酚妥拉明)。结果线性范围为伪麻黄碱1.0～200μg·L^-1(r=0.9993),O-去甲基右美沙芬为0.05～10μg·L^-1(r=0.9991),苯海拉明为1.0～200μg·L^-1(r=0.9988);提取回收率为伪麻黄碱在67.4%～73.4%之间,O-去甲基右美沙芬在74.6%～75.7%之间,苯海拉明在81.9%～83.9%之间,日内、日间RSD均小于6.2%,伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的最低定量浓度分别为1.0,1.0和0.05μg·L^-1。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确,适用于伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬、苯海拉明的临床药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中布洛芬

 目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定人血浆中布洛芬。方法血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-甲醇-5 mmol·L^-1醋酸铵-甲酸(450∶450∶100∶0.062 5)作为流动相,采用Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱分离,通过电喷雾电离源以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z205→m/z161(布洛芬)和m/z229→m/z185(内标,萘普生)。结果人血浆中布洛芬测定的线性范围为50.0～25 000μg·L^-1,定量下限为50.0μg·L^-1,日内、日间精密度(RSD)均小于8.5%,准确度(RE)在±2.5%以内,每个样品测试时间仅为4.0 min。结论pH值是影响布洛芬色谱行为和质谱响应的主要因素,优化后的方法具有快速、灵敏等特点,适用于布洛伪麻片中布洛芬的生物利用度和生物等效性研究。     

HPLC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮浓度及人体药动学

 目的建立测定人血浆中丁螺环酮的LC-MS/MS方法,并用于缓释盐酸丁螺环酮胶囊的临床药动学试验。方法血浆样品经固相萃取后,以10mmol·L^-1的甲酸铵溶液-含0.5‰甲酸的乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,经Symmetry C₁₈色谱柱(2.1mm×150mm,5μm)分离。通过电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 386→121.7(丁螺环酮)和409→237.7(内标,氨氯地平)。结果LC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮的线性范围为0.025～12.8μg·L^-1,r=0.9993。该方法的绝对回收率为74.97%～77.83%,相对回收率为93.67%～102.0%,日内、日间精密度(RSD)分别为0.9%～5.1%和1.9%～6.7%。在临床药动学研究中,应用此法测试了10名受试者口服盐酸丁螺环酮缓释胶囊后血浆中丁螺环酮的浓度。结论本法快速、准确,灵敏度高,重现性好,可以满足本试验低浓度药物测定及药动学研究要求。     

LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林的浓度

 目的建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林浓度的方法。方法以盐酸帕罗西汀为内标,采用乙腈-0.1%甲酸溶液(50∶50)为流动相,以Discovery C₁₈色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z306.0→274.9(盐酸舍曲林)和m/z 330.1→191.9(盐酸帕罗西汀)。结果盐酸舍曲林线性范围0.332～66.400μg·L^-1,定量下限为(0.334±0.002)μg·L^-1(n=5)。日内、日间精密度(RSD)小于9%,平均回收率大于95%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于盐酸舍曲林临床药动学研究。     

LC-MS/MS测定人血浆中格列本脲的浓度

 目的建立LC-MS/MS测定人血浆中格列本脲浓度的方法。方法以格列齐特为内标,采用0.1%甲酸-乙腈(35∶65)为流动相,以ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 494.2→368.9(格列本脲)和m/z 324.0→126.9(格列齐特)。结果格列本脲线性范围6.67～500μg·L^-1,定量下限为(6.67±0.3)μg·L^-1(n=5)。日内、日间精密度(RSD)小于8%,平均回收率大于90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于格列本脲临床药动学研究。     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中水苏碱

 目的应用LC/ESI-ITMS检测大鼠血浆中水苏碱的含量。方法取血浆样品0.2mL,经3 mL乙腈-甲醇(90∶10)混合液沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-水-甲酸(70∶30∶1,pH 3.5)为流动相,用Agilent zorba Extend-C₁₈色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z144→m/z84(水苏碱)和m/z166→m/z148(内标,麻黄碱)。结果水苏碱线性范围为0.02～5.00 mg·L^-1,定量限20μg·L^-1,最低检测限为1μg·L^-1,日内、日间测定值RSD小于5.4%。在大鼠体内药动学研究中,应用此法测定了6只大鼠给予盐酸水苏碱后血浆中水苏碱的浓度。结论该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内水苏碱的药动学研究。