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1.
[目的]建立一种可临床应用的并能稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,用于检测视神经脊髓炎患者血清中的AQP4抗体.[方法]构建有AQP4基因的表达载体,利用脂质体将载体转入HEK293细胞,G418筛选,RT-PCR、间接免疫荧光检测稳定细胞系中水通道蛋白4的表达及分布.细胞间接免疫荧光检测20例NMO患者、20例MS患者、30例健康对照血清中的AQP4抗体,并同鼠脑间接免疫荧光检测法比较.[结果]限制性酶切消化、PCR、测序结果证明载体构建成功.间接免疫荧光证实稳定细胞系中有AQP4表达.且主要分布在细胞膜上.20例NMO患者血清中11例NMO-IgG阳性,18例AQP4抗体阳性,滴度在1:60-1:15 360之间,而MS患者仅检测到1例阳性,健康对照未检测到阳性.[结论]成功构建稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,并检测出国人NMO患者血清中存在AQP4抗体,且敏感性高于鼠脑法,可以有效的鉴别视神经脊髓炎和多发性硬化. 相似文献
2.
【目的】 建立NMO-IgG/anti-AQP4抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),细胞分析法(CBA)和荧光免疫沉淀法(FIPA)法;研究并比较不同的检测方法对中国人群NMO疾病谱的检测效率｡【方法】 建立3种检测NMO-IgG/anti-AQP4抗体的方法,包括IIF､CBA和FIPA｡应用盲法检测病人血清106例,其中视神经脊髓炎(NMO)组24例,纵形扩展性脊髓炎(LETM)组22例,多发性硬化(MS)组30例,健康对照(HC)组30例;对其检测的阳性率进行分析｡【结果】 通过3种方法检测,发现NMO组NMO-IgG/anti-AQP4抗体阳性率分别为IIF (62.5%,15/24), CBA (91.7%,22/24) 及FIPA(75.0%,18/22),LETM组为IIF (59.1%,13/22), CBA (86.4%,19/22) 及FIPA (72.3%,16/22),MS组IIF､ CBA及FIPA均为(3.3%,1/30)｡正常对照组未见该抗体阳性表达｡NMO组及LETM组血清NMO-IgG/anti-AQP4抗体阳性率明显高于MS和健康对照组｡【结论】 在中国人群NMO疾病谱患者中,IIF､CBA和FIPA的检测效率基本和美欧报道一致｡IIF 是该抗体检测的基础方法;CBA法看起来最为敏感;FIPA检测可以量化该抗体,可用于临床高通量大样品筛查｡ 相似文献
3.
【目的】 制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞｡ 【方法】 逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrx cDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞｡白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测｡【结果】 克隆出hTrx开放阅读框cDNA并制备出重组逆转录病毒,感染真核细胞后可分泌融合表达的hTrx并具有生物学活性｡制备出hTrx基因修饰大鼠肝细胞,免疫组化SABC法显示肝细胞功能正常,MTT比色法检测具有较强的抗氧化应激能力(P < 0.05),并可有效增殖｡【结论】 成功制备出一种具有较强抗氧化应激的hTrx基因修饰肝细胞｡ 相似文献
4.
【目的】 了解基层医院眼科医生在接受中山眼科中心手把手培训期间所施行的白内障手术的患者术后视力以及影响视力的常见手术并发症｡【方法】 选取韶关市曲江区中医院和郁南县中医院两家县级医院作为目标医院,两名从无任何手术经验的术者,在接受培训期间对患者施行了手法小切口白内障摘除联合人工晶状体植入手术｡对所有手术后超过3个月的患者并进行眼部临床检查｡【结果】 在518名符合入选条件的白内障术后患者中,共342名患者(66.02%,共385例术眼)来诊｡其中26眼因存在与手术无关的视神经视网膜病变或晚期青光眼改变而不加入进一步数据分析｡342名患者平均年龄为73.2(S 8.8)岁,女性占62.28%｡单眼手术301(77.19%)人,双眼手术41(12.2%)人｡术后非矫正视力(UCVA)范围为0.1 ≤ UCVA < 0.3和UCVA < 0.1者分别占9.74%和9.0%｡术后针孔视力(做为最佳矫正视力, BCVA)范围为0.1 ≤ BCVA < 0.3和BCVA < 0.1者分别占3.15%和4.3%｡影响术后UCVA的原因主要包括屈光不正(56.34%)､无人工晶状体眼(18.31%)､散光(9.86%)､后囊膜混浊(8.45%),黄斑水肿(5.63%)及角膜混浊(1.41%)｡【结论】 基层医院医生接受手把手培训期间所施行的白内障手术的治疗效果良好｡屈光不正是术后视力不良的主要原因｡术前重视眼底疾病的诊断以及人工晶状体度数的准确测定有助于提高白内障手术的治疗质量和效果｡ 相似文献
5.
【目的】 应用miRNA芯片技术筛选乳腺癌及癌旁组织差异表达的miRNA,发现与乳腺癌相关的miRNA,为进一步阐明其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。【方法】 收集8例新鲜的乳腺癌及其癌旁组织,抽提总RNA并分离出小RNA进行Cy3荧光标记,将标记的小RNA在miRNA芯片上进行杂交反应,应用实时定量RT-PCR方法验证miRNAs芯片结果的可靠性。【结果】 对芯片数据进行SAM分析,结果筛选获得16个乳腺癌相关miRNAs, 相对于癌旁组织,在乳腺癌组织中9个miRNAs表达上调,7个miRNAs表达下调。其中显著上调的有miR-21,miR-365,显著下调的有miR-497,miR-31。【结论】 筛选得到乳腺癌miRNA差异表达谱,其可能与乳腺癌的发生发展有关。 相似文献
6.
【目的】 回顾性评估一种新的脊柱转移瘤治疗策略———“流程表”的有效性和不足之处｡【方法】 研究对象为自1996年2月至2009年1月在我科接受治疗的脊柱转移性肿瘤77例患者,这些患者为生存期明确的死亡病例｡对每个病例按照Tomita脊柱转移瘤评分系统和Tokuhashi脊柱转移瘤评分系统(2005年修订版)进行评分,推断其相应的治疗方式,并应用脊柱转移瘤治疗新策略———流程表进行治疗方式判定｡将由3种脊柱转移瘤治疗策略所判定的治疗方式与实际治疗方式相比较,分为实际治疗方式与判定治疗方式相一致和不一致两组｡再根据流程表策略判定的治疗方式,将病例进一步分成保守治疗､姑息手术和切除手术3组,再将每组中按照实际治疗方式与判定治疗方式一致性分成两小组｡然后再应用t检验,一致和不一致两组间进行比较｡【结果】 按照Tomita脊柱转移瘤评分系统判定治疗和实际治疗的一致组生存时间(11.18个月)虽长于不一致组(9.70个月),但组间无显著差异(P > 0.05);按照Tokuhashi脊柱转移瘤评分系统判定治疗和实际治疗的一致组生存时间和不一致组几乎相同(分别为10.18个月和10.31个月, P > 0.05);而按脊柱转移瘤流程表策略判定治疗和实际治疗的一致组生存时间(10.62个月)明显长于不一致组(7.70个月, P < 0.01)｡根据脊柱转移瘤流程表策略判定的治疗方式中,保守治疗和姑息手术组间比较均无显著性差异(P > 0.05),而只有清除手术组间比较有显著性差异(P < 0.05)｡【结论】 与评分系统比较,脊柱转移瘤治疗新策略———流程表在改善患者生存时间方面的作用较明显｡但该策略仍存在一定不足,如某些评价指标准确性不很高､指标的细化程度不够等,需进一步发展和完善｡ 相似文献
7.
【目的】 探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型与肝细胞癌(HCC)临床病理学的相关性｡【方法】 采用多重PCR对89例已行手术治疗的伴HBV感染肝细胞癌患者进行HBV基因亚型分型,并比较不同基因亚型患者临床及病理学特征｡【结果】 89例肝细胞癌患者中,感染C1 亚型HBV者49例(55.06%),感染B2亚型者35例(39.33%),感染C2亚型者5例(5.61%)｡B2亚型患者术前甲胎蛋白(AFP)和血清谷草转氨酶(AST)平均水平､子灶形成和包膜不完整的发生率､血管侵犯比例均高于C1亚型患者(P = 0.002,P = 0.007,P = 0.046,P = 0.029,P = 0.044)｡但C1亚型患者肝组织纤维化分期高于B2亚型患者(P = 0.022)｡【结论】 感染B2亚型HBV的HCC患者肿瘤侵袭性较强,复发风险较高,C1亚型者肝纤维化较重｡ 相似文献
8.
【目的】 本研究旨在探讨PLC delta1 在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义｡【方法】 采用免疫组化方法,检测PLC delta1在223例上皮性卵巢肿瘤(183例卵巢癌和对照组40例交界性卵巢肿瘤)组织芯片中的表达;结合患者的临床资料,分析PLC delta1的表达与上皮性卵巢癌的关系｡【结果】 在有效检测的197例上皮性卵巢肿瘤标本中,大多数(25例,80.6%)交界性肿瘤呈现正常表达,而在卵巢癌中,多数(91例54.8%)肿瘤出现PLC delta1的过度表达,两者存在显著差异(P < 0.000 1);而且PLC delta1在卵巢癌中表达与肿瘤的临床分期､患者年龄有显著的相关性(P < 0.000 1)｡【结论】 PLC delta1在卵巢癌组织中的过度表达与肿瘤的恶性进展密切相关,可能是未来检测卵巢癌的一种有价值的新肿瘤标志物｡ 相似文献
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【目的】 探讨白细胞介素-17(IL-17)在中重度儿童哮喘发病､气道中性粒细胞炎症反应中的作用｡【方法】 中重度持续哮喘发作期儿童45例,其中中度持续组(20例)与重度持续组(25例);以健康儿童20例为对照组｡以酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患儿外周血单个核细胞(PBMC)在CD3和CD28单克隆抗体刺激下分泌的IL-17水平,检测诱导痰中性粒细胞数量;对以上病例进行联合治疗3个月后随访,达到临床缓解的病例20例纳入哮喘缓解组,复查其IL-17水平｡比较不同病情间IL-17的表达水平,了解IL-17与儿童哮喘临床病情､气道炎症反应的关系｡【结果】 哮喘患儿PBMC表达IL-17水平显著高于正常对照组(2 685 ± 1 081) pg/mL,其中哮喘发作组 (5 355 ± 813) pg/mL显著高于哮喘缓解组(4 504 ± 687) pg/mL (P均 < 0.05);重度持续组患儿PBMC表达IL-17水平(5 830 ± 807) pg/mL显著高于中度持续组(4 962 ± 751) pg/mL (P < 0.05);急性发作期哮喘患儿IL-17水平(5 355 ± 813) pg/mL与诱导痰中性粒细胞比例(Xmin = 0, Xmax = 98.8, M = 44.73)%､血中性粒细胞比例(51.72 ± 13.43) %成正相关(r = 0.820､0.736, P < 0.001)｡【结论】 中重度哮喘患儿外周血单个核细胞IL-17表达水平升高,并与哮喘临床病情､气道炎症反应密切相关｡ 相似文献
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【目的】 评价异丙酚复合瑞芬太尼全凭静脉麻醉对鼻内镜(FESS)手术应激反应及麻醉复苏的影响｡【方法】 ASAⅠ~Ⅱ级择期行FESS手术病人60例,年龄23 ~ 57岁,随机分为静吸复合麻醉组(A组)和异丙酚瑞芬太尼麻醉组(B组),每组30例｡检测术中不同时点血浆皮质醇(Cor)､去甲肾上腺素(NE)､肾上腺素(E)､促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度并观察平均动脉压(MAP)和心率(HR)的变化,记录术毕停药后拔管时间,拔管后即刻和离开术后恢复室(PACU)的意识状态(OAAS)评分以及离开PACU时间;观察恶心呕吐等不良反应并记录术中知晓的发生率｡【结果】两组手术开始后各时点Cor､NE､E､ACTH浓度与术前相比均显著增高(P < 0.05),A组各指标显著高于同时点B组(P < 0.05);MAP和HR的变化无统计学差异(P > 0.05)｡B组术后拔管时间明显快于A组(P < 0.05);B组在拔管后即刻及离开PACU时OAAS评分高于A组(P < 0.05);B组离开PACU时间早于A组(P < 0.05);两组术后恶心､呕吐发生率无统计学差异(P > 0.05)｡所有病人术后随访均未出现术中知晓｡【结论】 FESS手术使用异丙酚复合瑞芬太尼全凭静脉麻醉可有效抑制应激反应,病人苏醒质量明显改善｡
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【目的】 本研究检测hIRS-1 mRNA和hIRS-2 mRNA在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达,分析其与临床病理参数之间的关系,评价hIRS-1和hIRS-2的临床意义｡【方法】 应用实时荧光定量PCR法对hIRS-1及hIRS-2基因在43例肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达进行检测,分析其与临床病理指标的关系｡【结果】 hIRS-1 mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,hIRS-1基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较无显著差异(0.612 ± 0.127 vs 0.645 ± 0.116,P > 0.05);而hIRS-2基因在肾透明细胞癌中存在高表达,hIRS-2基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较有显著差异(1.016 ± 0.143 vs 0.792 ± 0.136,P < 0.05);hIRS-1 mRNA的表达与患者年龄､性别､肿瘤大小､病理分级及临床分期无关(P > 0.05);hIRS-2 mRNA的表达与肿瘤大小及临床分期有关(P < 0.05),与患者年龄､性别､及病理分级无关(P > 0.05)｡【结论】 hIRS-1 mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,两者比较差异无统计学意义;hIRS-2 mRNA在肾透明细胞癌中存在高表达,提示hIRS-2基因在肾透明细胞癌细胞癌变过程中可能发挥重要作用｡ 关键词: 肾透明细胞癌; 实时荧光定量PCR; 胰岛素受体底物 相似文献
12.
【目的】 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用及对Apaf-1､APC基因表达的影响｡ 【方法】 采用3 × 10-4 mmol/L TSA作用T24细胞,MTT法检测TSA对T24细胞生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测TSA作用前后T24细胞周期和凋亡的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TSA作用前后膀胱癌细胞中Apaf-1､APC mRNA表达的变化｡【结果】 TSA对T24细胞的生长具有明显的抑制作用;TSA作用后T24细胞的G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞凋亡率增加(P < 0.05);RT-PCR结果显示TSA处理能明显诱导Apaf-1､APC基因表达增加｡【结论】 TSA能抑制T24细胞体外生长,诱导细胞周期阻滞和凋亡,其可能通过诱导Apaf-1､APC基因表达增加而发挥体外抗膀胱癌作用｡ 相似文献
13.
【目的】 观察椎管内麻醉时咪达唑仑复合布托啡诺镇静对患者血糖､皮质醇及焦虑情绪的影响,以探讨椎管内麻醉时复合静脉镇静的临床意义｡【方法】 40例在椎管内麻醉下手术的成年患者,随机分入镇静组(n = 20)与对照组(n = 20):镇静组按首量咪哒唑仑40 μg /kg +布托啡诺15 μg/kg及维持量每小时咪哒唑仑20 μg/kg +布托啡诺7.5 μg/kg给药;对照组为生理盐水按盲法要求给药｡测定术前1 d上午9时､入手术室后10 min､手术开始后30 min及手术结束时的血糖､血清皮质醇浓度;入手术室后15 min､术后24 h分别调查患者术前､术中的焦虑程度;记录麻醉前､给药后0､5､10､20､30､60 min以及手术结束后0､10､20､30 min患者的脑电双频谱指数(BIS)､镇静警觉评分(OAA/S)｡ 【结果】 麻醉前各项指标组间无统计学差异(P > 0.05);镇静组患者术中OAA/S 3 ~ 4分,BIS 70 ~ 90,处于浅镇静状态;术中､术毕镇静组的血糖､皮质醇浓度明显低于对照组(P < 0.05);镇静组术中的焦虑评分明显低于对照组(P < 0.05)｡【结论】 椎管内麻醉期间咪达唑仑复合布托啡诺浅镇静能明显减轻患者的应激水平及焦虑程度｡ 相似文献
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【目的】 通过小鼠侧脑室注射卡介苗(BCG)致中枢神经系统结核分枝杆菌(MTB)感染,检测小鼠血清中是否有视神经脊髓炎(NMO)-IgG/水通道蛋白4(AQP4)-Ab的表达? 【方法】 雌性C57BL/6J小鼠40只,6 ~ 8周,随机分为4组:5 × 106 CFU BCG组?1 × 106 CFU BCG组?0.01 mol/L PBS组?正常组?右侧侧脑室注射,注射后1周脑室注射追加1次?小鼠BCG注射后第7?14?21?28天,分别取血并检测血清中NMO-IgG/AQP4-Ab?注射后第28天处死小鼠行抗酸杆菌培养,并对脑和脊髓进行HE?抗酸?LFB髓鞘染色,免疫组化检测病灶处AQP4?GFAP的表达及C5b9沉积情况?【结果】 脑室注射后,BCG组小鼠行为活动降低,出现肢体瘫痪,甚至死亡,其中5 × 106 CFU BCG组表现严重,死亡率高?注射卡介苗21 d时小鼠血清检测发现5 × 106 CFU BCG组中2 只小鼠血清NMO-IgG/AQP4-Ab阳性,1 × 106 CFU BCG组中4只小鼠血清中抗体阳性?第28天时5 × 106 CFU BCG组的两只血清阳性的小鼠死亡,1 × 106 CFU BCG组中原抗体阳性的小鼠血清中抗体仍为阳性?病理检测显示脑和脊髓出现炎性细胞浸润,病灶处抗酸染色阳性,出现脱髓鞘改变?组织培养3周后可见MTB生长,免疫组化显示病灶区域AQP4?GFAP表达降低,部分炎性细胞及血管周围出现补体C5b9沉积?【结论】 中枢神经系统MTB直接感染可诱导产生NMO-IgG/AQP4-Ab? 相似文献
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目的 研究电针干预大鼠脑缺血再灌注损伤时脑内水通道蛋白4 (aquaporin 4,AQP4)的表达与分布改变。 方法 选用SD雄性大鼠406只,分为正常对照组(n=40),脑缺血组(n=138),脑缺血+电针组(电针处理组,n=138)和脑缺血+假电针组(n=90)。利用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1 h后实施脑血流再灌注。电针处理组在脑缺血开始后立即给予电针刺激,穴位选择“水沟”(GV 26)与“百会”(GV 20)。利用Western blot检测AQP4的蛋白表达水平,胶体金免疫电镜观察AQP4免疫阳性颗粒在血管周边的分布,常规焦油紫染色计算脑缺血后的脑梗死体积以及脑肿胀程度。神经行为学评估通过Garcia量表进行评分。结果 (1)再灌注24 h内,电针可下调因脑缺血而诱导的AQP4表达升高,再灌注后6 h和12 h分别是缺血组的0.63倍和0.72倍(P < 0.05);(2)与正常对照组相比,血管周边AQP4的免疫阳性颗粒在再灌注后6 h增多,在再灌注后24 h减少,电针干预组中血管周边AQP4的免疫阳性颗粒密度发生改变,其变化与缺血组相反,差异有统计学意义(P < 0.05);(3)电针减轻脑缺血后的脑梗死及脑肿胀,促进神经行为功能的恢复。结论 电针下调因缺血而导致的AQP4蛋白的表达升高,并动态改变其在血管周边的分布。电针对AQP4的调控作用可能与电针的神经保护作用机制相关。 相似文献
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胸段硬膜外阻滞对心力衰竭兔血液动力学、神经内分泌和肺水通道蛋白AQP4影响 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:探讨胸段硬膜外阻滞(TEB)对心力衰竭兔血液动力学、神经内分泌及肺组织水通道蛋白-4(AQP4)基因表达的影响.方法:将60只胸段硬膜外穿刺置管成功的兔随机分为3组(n=20);假手术组(S组),左冠状动脉前降支(LAD)仅置缝线,但不结扎,从硬膜外腔注入生理盐水0.5ml/kg,每天2次,连续4周;心力衰竭组(HF组),结扎LAD后第2天开始,从硬膜外腔注入生理盐水0.5ml/kg,每天2次,连续4周;TEB治疗组(TEB组),结扎LAD后第2天开始,从硬膜外腔注入0.1%罗哌卡因0.5ml/kg,每天2次,连续4周.术后4周经股动脉和颈总动脉直接插管测定血液动力学参数;用放免法测定血浆心钠素及内皮素浓度;逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测肺组织AQP4mRNA的表达.结果:心力衰竭组MAP、LVSP、±dp/dt max明显下降,LVEDP、HR明显升高;血中内皮素和心钠素的浓度升高,肺AQP4mRNA的表达下降.经TEB治疗MAP、LVSP、±dp/dt max有升高,LVEDP、HR显著降低;血中内皮素和心钠素的浓度降低,肺AQP4mRNA的表达增加.结论:胸段硬膜外阻滞可以改善心力衰竭兔血液动力学参数,降低血中ANP、ET-1的水平,并能部分纠正肺组织AQP4mRNA的异常表达. 相似文献