茶条槭叶化学成分的分离鉴定及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的 研究茶条槭Acer tataricumsubsp. ginnala树叶80%乙醇提取物中的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法 实验采用硅胶,Toyopearl HW-40c、Sephadex LH-20凝胶和制备液相色谱等手段进行分离纯化,并应用¹H-NMR、¹³C-NMR、MS等波谱技术鉴定了化合物结构,并对部分单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测试。结果 从茶条槭叶的乙酸乙酯和正丁醇部位中分离得到23个化合物,分别鉴定为maplexin B（1）、3″-O-galloyl-benzyl-O-α-L- rhamnopyranosyl-(1®6)-β-D-glucopyranoside（2）、没食子酸甲酯（3）、没食子酸（4）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（5）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（6）、槲皮素-3-O-β-D-来苏糖苷（7）、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷（8）、槲皮素- 3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷（9）、槲皮素-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷（10）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷（11）、槲皮素-3-O-(2″,6″-二-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷（12）、3,6-di-O-没食子酰基-1,5脱水葡萄糖醇（13）、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-α-L-阿拉伯糖苷（14）、山柰酚-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷（15）、山柰酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷（16）、槲皮素（17）、山柰酚（18）、1-p-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷（19）、茶条槭素B（20）、茶条槭素C（21）、茶条槭素A（22）、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷（23）。结论 化合物1、2、10、12、16、19为首次从本植物分离得到,化合物2、10、12、16、19同时为本科植物中首次分离得到。化合物8、12、14～16具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。     

酸藤子的化学成分研究

目的 研究酸藤子Embelia laeta的化学成分。方法 利用硅胶、Sephadex LH-20、HP-20大孔吸附树脂、半制备高效液相等各种方法进行分离纯化,通过核磁共振波谱、质谱等对化合物的结构进行表征和解析。结果 从酸藤子70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分离得到19个化合物,分别鉴定为淫羊藿次苷D₂（1）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（2）、反式对羟基桂皮酸（3）、咖啡酸（4）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖吡喃糖基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、4-(β-吡喃葡萄糖基氧基)-苯甲醛（6）、1-O-对羟基肉桂酰单甘油酯（7）、山柰酚-3-O-β-D-(2''-O-β-D-呋喃糖基)-吡喃葡萄糖苷-7-O-α-L-鼠李糖吡喃糖苷（8）、绿原酸（9）、反式咖啡酸（10）、对羟基肉桂酸甲酯（11）、反式-3-O-香豆酰奎宁酸（12）、5-对反式香豆酰奎宁酸甲酯（13）、1-(3'',4''-二羟基肉桂酰基)-环戊二烯二醇（14）、槲皮素-3-O-β-D-呋喃芹糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（15）、槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷（16）、柽柳黄素3-O-β-D-葡萄糖苷-7-O-α-L-鼠李糖苷（17）、N-(3-((3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)肉桂酰胺（18）、D-去氢南天竹啡碱（19）。结论 其中化合物18为新化合物,命名为酸藤子碱苷,化合物1～3、5～8、11～15、17和19首次从酸藤子植物中分离得到。     

HPLC同时测定半枝莲中对香豆酸和肉桂酸的含量

目的:建立半枝莲药材中同时测定对香豆酸和肉桂酸含量的测定方法。方法:采用Eclipse SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长310,280 nm,柱温26℃。结果:对香豆酸和肉桂酸分别在0.148~1.776 μg(r=0.9998),0.062~0.992 μg(r=0.9996)呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.4%(RSD 1.5%),99.3%(RSD 1.8%),供试品溶液在12 h内稳定。通过对8批半枝莲药材的测定,结果发现湖北(批号130501)样品中2种成分含量总体优于其他产地样品。结论:该含量测定方法精密度良好,准确度高,适用于半枝莲药材中对香豆酸和肉桂酸的含量测定。     

HPLC测定白花蛇舌草注射液中对香豆酸的含量

 目的 建立测定白花蛇舌草注射液中对香豆酸含量的HPLC。方法 采用ODS柱,以甲醇-20 mmol·L^-1NH₄Ac(pH3.5)(33:67)为流动相,于308am波长处检测。结果 对香豆酸在0.0101～0.202mg·mL^-1内浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7);样品的加样回收率为98.7％～101.5％;方法精密度及重现性良好,RSD均不大于1.5％。结论 方法简便、准确,所测结果稳定、重现性好,可以作为白花蛇舌草注射液质量控制的一个定量方法。     

27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡

目的:实验以MDA-MB-231为研究对象,观察27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸(DY-17)诱导细胞凋亡作用。方法:采用MTT检测12,24,36,48,60,72 h细胞增殖活性。采用荧光染色技术检测DY-17诱导凋亡实验。运用流式细胞仪测定MDAMB-231的凋亡坏死率。采用Western blotting检测对照组、EGF组、EGF+DY-17 40μmol·L-1组、EGF+SP600125组的JNK,磷酸化JNK,Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达变化。结果:DY-17抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和作用依赖性。流式细胞仪检测DY-17(20,40μmol·L-1)诱导MDA-MB-231细胞凋亡坏死率分别为31.86%,49.91%,荧光显微镜下DY-17(20,40μmol·L-1)与对照组比较细胞发生凋亡坏死明显增加。与对照组比较,EGF组磷酸化JNK蛋白表达上调;与EGF组比较,EGF+DY-17组磷酸化JNK蛋白表达下调。与EGF组比较,EGF+DY-17组Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达均上调。结论:DY-17通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡。     

广西特色药材退黄藤化学成分的分离与鉴定

目的:研究广西特色药材退黄藤的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶等方法分离和纯化,并通过EI-MS及NMR等波谱学方法对其化学成分进行了结构鉴定。结果:从退黄藤中共分离得到13个化合物,分别为β-谷甾醇棕榈酸酯(1),维生素E(2),二十四烷酸(3),蒲公英赛醇(4),豆甾-4-烯-3,6-二酮(5),十七烷酸(6),二十六烷酸甘油酯(7),豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮(8),二十七烷酸甘油酯(9),没食子酸乙酯(10),东莨菪内酯(11),3,3',4'-三甲氧基鞣花酸(12),没食子酸(13)。结论:化合物1~13均为首次在该植物中分离得到。     

华泽兰根部化学成分研究

目的研究菊科泽兰属植物华泽兰Eupatorium chinense根部的化学成分。方法采用正相硅胶柱色谱、制备薄层色谱及制备型HPLC等方法分离纯化,利用NMR、MS等波谱学方法鉴定化合物结构。结果从华泽兰醋酸乙酯部位分离鉴定了19个化合物,鉴定为泽兰素(1)、1-[2-(1-acetoxymethyl-vinyl)-6-hydroxy-benzofuran-5-yl]-ethanone(2)、6-hydroxy-3β-methoxytrematone(3)、euparone(4)、8-methoxy-9-hydroxythymol(5)、dehydroespeleton(6)、8-methoxy-9-hydroxythymol 3-Oangelate(7)、9-hydroxythymol(8)、4-hydroxycinnamic acid methyl ester(9)、对羟基苯甲醛(10)、8,9-dehydro-10-hydroxythymol(11)、邻苯二甲酸二异丁基酯(12)、邻苯二甲酸二正丁酯(13)、对香豆酸(14)、dihydrocoumarin(15)、methylcaffeate(16)、2,5-dimethylphenol(17)、1H-吲唑(18)、(Z)-3-(hydroxymethyl)-7-methylocta-2,6-dienly1 acetate(19)。结论首次对华泽兰根部的化学成分进行研究,其中化合物2、3、5～11为首次从华泽兰中分离得到,化合物6、9、12、14～19为首次从泽兰属中分离得到,化合物1～4为苯并呋喃类化合物,是泽兰属中的特征性成分。     

刺五加β-香树脂醇合酶基因的挖掘及功能验证＊

目的 刺五加三萜皂苷是我国传统中药刺五加的主要活性成分之一,具有抗炎、抗癌、抗疲劳、抗氧化等多种功效。但由于刺五加自然资源缺乏,难以满足对三萜皂苷的需求,急需寻求可持续资源利用新模式。目前,生物合成已成为植物次生代谢物积累的重要途径,为此,探寻出刺五加三萜皂苷的生物合成途径具有重要意义。方法 本文通过同源搜索和系统发育分析,预测并克隆了刺五加三萜皂苷合成途径中关键基因EsOSC5,并通过农杆菌介导的烟草瞬时表达实验,获得代谢产物;利用GC-MS检测其次生代谢产物并确定EsOSC5基因功能。结果 挖掘并克隆出片段大小为2286 bp的EsOSC5基因;EsOSC5基因转化烟草的瞬时表达实验及GC-MS次生代谢产物检测数据表明,β-香树脂醇为该基因的代谢产物。结论 EsOSC5基因可促进刺五加β-香树脂醇（三萜皂苷前体）的合成积累,该基因为刺五加β-香树脂醇合酶基因。     

尾叶香茶菜化学成分的研究

目的 研究尾叶香茶菜Rabdosia excisa的化学成分.方法 利用硅胶柱色谱法进行分离和纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物结构.结果 从尾叶香茶菜中分离鉴定了15个化合物,分别为山香三萜二烯酸(1)、α-香树脂醇棕榈酸酯(2)、豆甾醇(3)、β-谷甾醇(4)、棕榈酸(5)、熊果酸(6)、1α,6,11β,15β-四乙酰基-6,7-断裂-7,20-内酯-对映-贝壳杉-16-烯(7)、2α,3α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸(8)、马斯里酸(9)、2α,3α,19-三羟基-12-烯-28-乌索酸(10)、毛叶香茶菜素E(11)、6β,11α,15α-三羟基-6,7断裂-6,20-环氧2-1α,7-内酯-对映-贝壳杉-16-烯(12)、对映-7α,20-环氧-贝壳杉烷-16-烯-1α,6β,7β,14β,15β-五醇-1-O-葡萄吡喃糖苷(13)、冬凌草甲素(14)、胡萝卜苷(15).结论 除了化合物3、5、6、14、15外,其余化合物均为首次从尾叶香茶菜中发现.     

维C银翘片中D-(-)-异抗坏血酸的结构鉴定与筛查

 目的 鉴定维C银翘片中非法添加物D-(-)-异抗坏血酸的结构,对样品进行添加物筛查。方法 采用CAPCELL PAK NH₂色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-20 mmol·L^-1乙酸铵（甲酸调pH至2.5）(60∶40),检测波长为246 nm,流速为1 mL·min^-1;离子源为ESI源,雾化气压力为220 kPa,干燥气流速为12 L·min^-1,干燥气温度350 ℃,毛细管电压3.5 kV,正离子检测。用液相色谱分离并制备维C银翘片中添加物,进行¹³C-NMR结构确证。结果 通过对检出的添加物[M+H]⁺多级质谱裂解规律解析及与D-(-)-异抗坏血酸对照品比较,鉴定添加物为D-(-)-异抗坏血酸;通过添加物¹³C-NMR化学位移分析,进一步确认其结构。在366批维C银翘片样品中,有64批样品检出非法添加物D-(-)-异抗坏血酸。结论 液质联用方法准确,灵敏度高,可满足定性检测的要求。
     

矮桃化学成分研究

 目的 研究矮桃（Lysimachia clethroides Duby化学成分。方法 采用各种色谱法分离,运用多种波谱技术鉴定结构。结果 从醋酸乙酯和甲醇部位分离鉴定了7个化合物：α-香树酯醇(1,β-香树酯醇(2,β-谷甾醇(3,豆甾-5,22(E-二烯-3β-醇(4,12-乌苏酸-3-O-β-D-葡萄糖苷(5,12-乌苏烷-3-O-β-D-葡萄糖苷（6和β-胡萝卜苷（7。结论 化合物1~3、5和6均为首次从该植物中分离得到,化合物1、5和6为首次从该属中分离得到。     

四块瓦的化学成分研究

 目的对报春花科珍珠菜属植物四块瓦(Lysimachia pardiformis Franch.)的全草进行化学成分研究。方法对四块瓦全草提取物进行柱色谱,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定结构。结果分离鉴定了7个化合物,分别鉴定为儿茶素(1),表儿茶素(2),pavetannin A(3),肉桂鞣质B₁(4),maesopsin-6-O-glucopyranoside(5),quercetin3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-xylopyranoside(6),尿囊素(7)。结论所有化合物均为首次从珍珠菜属分离得到。     

珍珠菜抗肿瘤有效部位化学成分研究

目的研究珍珠菜Lysimachia clethroides抗肿瘤有效部位的化学成分。方法采用各种色谱法进行分离、纯化,通过理化性质及波谱法鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了14个化合物,分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、江户樱花苷(3)、异槲皮苷(4)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(5)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(6)、芦丁(7)、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷(8)、二氢山柰酚(9)、柚皮素(10)、(?)-表儿茶素(11)、圣草素(12)、槲皮素-3-O-(2,6-二鼠李糖基葡萄糖苷)(13)、山柰酚-3-O-(2,6-二鼠李糖基葡萄糖苷)(14)。结论化合物9、12、13首次从本属植物中分离得到。     

离子液体辅助萃取山高粱中4种黄酮类成分的研究

建立离子液体1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([HMIM] PF6)/甲醇溶液为萃取剂超声萃取,结合反相高效液相色谱同时测定山高粱中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和山柰酚4种黄酮成分的方法.采用Purospherstar RP-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)进行分离,以乙腈-甲醇-0.4％磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.7 mL· min-1,紫外检测波长360 nm,柱温室温.在优化条件下,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和山柰酚分别在2.54×10-～2.54,2.50×10-2 ～2.50,1.54×10-3 ～0.154,1.49×10-3～0.149 μg线性关系良好,平均加样回收率分别为101.1％,98.90％,101.0％,101.6％.该方法绿色环保、简单快速,结果准确可靠,为山高粱中槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和山奈酚的分析提供了有效的方法.     

金钗石斛和铁皮石斛软腐病原菌的分离和鉴定

 目的 确定引起金钗石斛和铁皮石斛软腐病的病原菌,为制定高效、安全的防治措施提供依据。方法 采用普查和定点观察相结合对软腐病发病情况进行田间观察,采集两种石斛典型病株样本,按照柯赫氏法则对其病原菌进行分离、纯化、菌株鉴定及致病性测定。结果 在树皮为基质的苗床上软腐病在不同苗龄上均可发生,病原菌主要侵染幼嫩多汁的嫩芽和新枝,引起幼嫩茎叶的腐烂、萎焉和坏死等症状。通过对病原菌形态学观察,以及核糖体rDNA ITS序列分析,侵染石斛植株的2个分离菌株被鉴定为终极腐霉Pythium ultimum。致病性实验证明,这两个菌株为石斛软腐病的致病菌株。结论 金钗石斛和铁皮石斛是终极腐霉菌的自然寄主。     

珍珠菜中黄酮苷类成分研究

研究珍珠菜Lysimachia clethroides的黄酮苷类成分。珍珠菜乙醇提取物经硅胶、Sephadex LH-20和Pre-HPLC等色谱技术分离纯化,通过质谱和核磁共振等波谱学方法鉴定化合物的结构。从珍珠菜中分离得到11个黄酮苷类化合物,分别鉴定为紫云英苷(1),异槲皮苷(2),异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),槲皮素-3-O-β-D-6"-乙酰基吡喃葡萄糖苷(4),槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),江户樱花苷(6),2-羟基-柚皮素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7),山柰酚-3-O-芸香糖苷(8),山柰酚-3-O-洋槐糖苷(9),芦丁(10),山柰酚-3,7-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)。化合物4, 7和11为首次从该属植物中分离得到,化合物3 、 5和9为首次从该种植物中分离得到。体外活性测试结果显示化合物2, 6, 8具有一定的醛糖还原酶抑制活性,IC₅₀分别为2.69,1.00,1.80 μmol·L^-1;化合物1 ~ 11对5种人肿瘤细胞均没有明显的细胞毒活性(IC₅₀ > 10 μmol·L^-1)。     

Growth inhibitory and apoptosis inducing by effects of total flavonoids from Lysimachia clethroides Duby in human chronic myeloid leukemia K562 cells

Ethnopharmacological relevance

Lysimachia clethroides Duby is a traditional Chinese medicinal herb has been used in China to treat edema, jaundice diseases, hepatitis, tumor and inflammations, but the anti-tumor mechanisms are unclear.

Aim of the study

The present study was undertaken to investigate if total flavonoids from Lysimachia clethroides Duby (ZE4) possesses anti-cancer effects through apoptotic pathways in human chronic myeloid leukemia K562 cells.

Materials and methods

K562 cells were treated with different concentrations of ZE4 at different time intervals. Cell viability was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Cell apoptosis was assessed by flow cytometry, Hoechst 33258 staining and COMET assay. Western blot analysis was used to detect Bcl-2, Trail and DR5 expressions.

Results

15 flavonoids were isolated and identified from ZE4. ZE4 could inhibit the growth of K562 cells significantly by induction of apoptosis. Marked morphological changes of apoptosis, DNA fragmentation and single DNA strand breakages were observed clearly after treatment of ZE4. Bcl-2 expression was down-regulated remarkably while Fas, Trail and DR5 up-regulated when apoptosis occurred.

Conclusions

This result suggests that total flavonoids of Lysimachia clethroides Duby exert potential anti-cancer activity through growth inhibition and apoptosis in K562 cells.     

路边青配伍穿心莲对脱水穿心莲内酯的小鼠血液药动学影响

 目的研究路边青与穿心莲配伍使用对脱水穿心莲内酯(DAP)的小鼠血液药动学性质的影响。方法小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲干浸膏药液后于不同时间点取血,血样经前处理后用反相高效液相色谱分离、测定脱水穿心莲内酯含量,采用3P97药动学软件对数据进行处理。结果小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲片干浸膏后,脱水穿心莲内酯的血药浓度动态变化规律均符合一室开放模型。路边青与穿心莲配伍使用可导致脱水穿心莲内酯的吸收慢、消除快、生物利用度低。结论穿心莲与路边青配伍使用是否科学,值得深入研究。     

铁皮石斛中一个新化合物

 目的 研究铁皮石斛的化学成分。方法 采用硅胶色谱法、HP₂MGL型大孔树脂色谱法、Sephadex LH-20、Sephadex G-25凝胶色谱法、RP-HPLC制备柱色谱法进行分离纯化,通过现代波谱技术进行结构鉴定。结果 鉴定了10个化合物,分别为2-甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(1), 3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-（1→2）-β-D-葡萄糖苷(2), leonuriside A（3）,(1′R)-1′-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙醇-4-O-β-D-葡萄糖苷（4）,左旋丁香脂素（5）,丁香脂素-4,4′-O-双-β-D-葡萄糖苷（6）,(+)-丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）,icariol A₂-4-O-β-D-glucopyranoside（8）,(+)-lyoniresinol-3a-O-β-D-glucopyranoside（9）,裂异落叶松脂醇（10）。结论 1为新化合物,2～4,6～10为首次从本属植物中发现,5为首次从本植物中发现。
     

生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究

 目的 探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法 将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crp SL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果 注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4 μg·mL-1,活性相当于50.2 μg·mL-1标准品t-PA。结论 研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。