肝癌多药耐药基因表达的临床研究

目的　探讨肝癌多药耐药基因 (MDR1)mRNA表达与癌分化、临床病理学特征、化疗效果、转移复发及预后的关系。方法　收集肝癌组织及癌旁 2cm肝组织 4 7例 ,正常肝组织 12例 ,采用荧光定量RT PCR方法检测MDR1mRNA的表达。结果　MDR1mRNA表达强度在 1 4× 10 3 ～3 6× 10 6copy/ μgRNA ,癌组织阳性率为 72 % ,明显高于癌旁肝组织 (5 1% )和正常肝组织 (4 2 % )(P <0 0 5 )。癌组织MDR1mRNA表达与癌灶直径、有无转移、Okuda分期、癌结节数目呈正相关 ,与复发时间、有无包膜及患者的生存期呈负相关关系。回归分析表明MDR1mRNA主要与癌灶转移潜能有关 (B =1 82 3,OR =6 187,P <0 0 5 )。MDR1mRNA阳性组化疗与疗效间无相关性 ,而MDR1mRNA阴性组术后局部化疗能明显改善肝癌的疗效 (r =0 773,P <0 0 5 ) ,其生存曲线明显高于MDR1mRNA阳性组。结论　MDR1mRNA基因表达与肝癌原发性耐药及癌灶转移潜能有关。     

多药耐药相关蛋白与骨肉瘤化疗耐药相关性

多药耐药是导致骨肉瘤患者化疗失败的重要原因之一,而多药耐药相关蛋白(MRP)表达增加是介导多药耐药重要机制之一。MRP是一类三磷酸腺苷能量依赖型跨膜转运蛋白,可有选择性和特异性地将细胞内药物外排至细胞外。作为药物排出泵,MRP导致细胞内化疗药物浓度降低,使肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物产生耐药。研究发现骨肉瘤一线化疗药物阿霉素、顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺及部分二线化疗药物均为MRP的药物底物。深入研究MRP与肿瘤化疗耐药的关系,可为防止骨肉瘤及其他肿瘤化疗耐药开辟新途径。该文就MRP与骨肉瘤化疗耐药相关性研究进展作一综述。     

乙型肝炎病毒X蛋白上调肝癌多药耐药相关基因表达的研究

目的　研究乙型肝炎病毒 X蛋白 (HBX)对肝癌耐药相关基因 MDRI,MRP1 ,MRP2 3,MRP3,L RP的影响从而探讨 HBX基因影响肝癌多药耐药性状的分子机制。方法　应用脂质体介导技术对人肝癌细胞株 Hep G2瞬时转染 HBX基因 ,然后用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)和 Westernblot技术分别检测转染后多药耐药相关基因和蛋白水平的表达情况。再使用 MTT检测阿霉素及丝裂霉素诱导后细胞存活率的变化。结果　转染前后相比 ,转染 HBX基因的 Hep G2细胞多药耐药相关基因和蛋白表达水平比转染前均明显上调 (P<0 .0 5 )转染后 PRP1基因表达量与转染前比为 3.1 1 ,PRP2为 1 .6 9,L RP3为 1 .4 6 ,MDR1为 3.6 4 ,L RP为 1 .90。 Westernblot显示转染后 L DR1蛋白水平上升 1 .1 0倍 ,MRP1蛋白上升 1 .2 8倍 ,L RP蛋白上升 1 .0 8倍。MTT结果显示阿霉素和丝裂霉素 IC50 转染组明显高于对照组。结论　乙型肝炎病毒 X蛋白可能促进肝癌多药耐药的产生     

多药耐药相关蛋白研究进展

多药耐药相关蛋白是一种介导多药耐药性的跨膜转运蛋白，分布于细胞内及细胞膜上，能减少细胞内药物聚积，或改变药物在细胞内分布，从而降低化疗疗效。本文综述了多药耐药相关蛋白的结构、功能、基因表达及调控、在组织细胞中分布，以及多药耐药相关蛋白的诱导、耐药机制和耐药性逆转因素。     

人原发性肝癌病人多药耐药基因表达及意义

目的 探讨原发性肝癌（ＰＨＣ）癌组织及癌周组织ｍｄｒｌ表达与多药耐药性的关系。方法 采用敏感性高,特异性强的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,定量检测４８例ＰＨＣ病人癌组织及癌周组织中ｍｄｒｌ表达水平。其中１８例病人要前行肝动脉化疗栓塞（ＴＡＣＥ）治疗。结果 ＰＨＣ癌组织中ｍｄｒｌ阳性率为６３．３％,远高于癌周组织的２６．７％（Ｐ〈０．０１）;术前行ＴＡＣＥ组癌组织中ｍｄｒｌ阳性率为８８．９％,远比未化疗组６３．３％高。结论 ＰＨＣ存在内源性ＭＤＲ和获得性ＭＤＲ,ｍｄｒｌ高表达是ＰＨＣ病人ＭＤＲ产生的重要机制之一。     

肝癌多药耐药的研究进展

肝癌为我国最常见的恶性肿瘤之一,化疗是肝癌治疗的一个重要手段,部分病人往往会因肝癌细胞的多药耐药.(multidrug resistance,MDR)而导致化疗无效或逐渐由有效转为无效.故研究肝癌的MDR产生机制对提高肝癌的化疗效果、延长病人的生存期有着重要的意义.本文就新近肝癌MDR相关机制及逆转方法研究中的一些进展作一综述.     

RNA干扰逆转肝癌多药耐药

目的 研究siRNA对肝癌耐药细胞系HepG2/mrp1中多药耐药相关蛋白基因(multidrug-resistant-associated 1,mrp1)及其蛋白产物MRP1表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果.方法 设计合成针对mrp1启动子区域的RNA干扰小片段,转染肝癌耐药细胞HepG2/mrp1.通过RT-PCR和流式细胞仪,在mRNA和蛋白质水平评估RNA干扰对mrp1表达的影响;MTT法检测RNA干扰逆转HepG2/mrp1细胞多药耐药性的变化,按照实验组和亲本组细胞的半数抑制剂量(ICso)评估RNA干扰对细胞耐药倍数的改变.结果 在耐药细胞HepG2/mrp1中,RNA干扰明显抑制了 mrp1 mRNA和蛋白产物MRP1的表达水平,在相同浓度药物作用下实验组细胞耐药性显著下降.结论 我们设计的siRNA对肝癌耐药细胞HepG2/mrp1中的mrp1基因有显著的抑制作用,具有良好的逆转多药耐药性的效果.

Abstract：

Objective To investigate the suppression of mrp1 and MRP1 induced by small interfering RNA and the restoration of sensitivity to chemotherapeutic drugs in the multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. Methods mrp1-targeted small interfering RNA duplexes were designed and composed and introduced into multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. The suppression of mrp1 mRNA and its gene product MRP1 was examined by RT-PCR and flow cytometry (FCM), respectively. MTT assay was performed to measure the reverse effect of small interfering RNA based on the results of ICs0. Results The overexpression of mrp1 mRNA and MRP1 was effectively suppressed by small interfering RNAs. The level of mrp1 mRNA in the transfected HepG2/mrp1 cells was reduced to (86.36±2.76)% and MRP1 to (89.38±3.76)%compared with those of the controls. The resistance to ADR was reversed five-fold, which indicated the restoration of sensitivity to drugs. Conclusion Small interfering RNA can inhibit mrp1 expression effectively and reverse the multidrug resistance mediated by MRP1.     

多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用

目的研究4种耐药蛋白：多药耐药蛋白（multi—drug resistance protein 1，MDR1），多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance related protein 1，MRP1），肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP），乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）在肝癌多药耐药中的作用。方法通过培养液中阿霉素（adriamycin，ADM）浓度递增诱导法筛选培养，建立HePG2／ADM肝癌多药耐药细胞株；采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2／ADM中的表达差异；Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达。结果（1）建立HePG2／ADM细胞系。MTT法检测阿霉素对HePG2／ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍（P〈0．05）。（2）HePG2／ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍（F=87．49，P〈0．05）和9倍（F=1006，P〈0．05）。MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义（FMRPI=3．43，FLRP=2．44，Pall〉0．05）。（3）L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异（FMDRI=1006，FBCRP=87．49，FMRPI=3．43，FLRP，=2．44，Pall〉0．05）。（4）Western blot检测发现HePG2／ADM细胞中MDR1，BCRP，LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞（FMDHI=28．68，FBCRP=18．60，FLRP=6．28，Pall〈0．05），MRP1蛋白表达不增高（FMRPI=0．70，P〉0．05）。（5）4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义（FMDRI=28．68，FBCRP=18．60，FMRPI=0．70，FLRP=6．28，Pall〉0．05）。结论MDR1和BCRP在HePG2／ADM多药耐药中起重要作用，HePG2／ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关。     

胃癌体外药敏试验与多药耐药基因、多药耐药相关蛋白表达的关系

目的 探讨胃癌体外化疗药物敏感试验与胃癌组织中多药耐药基因（MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP）基因表达的关系。方法 收集42例手术切除胃癌标本，采用噻唑蓝（MTT）比色法进行胃癌原代细胞培养体外药物敏感试验，检测其对9种临床常用化疗药物的敏感性，并应用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌组织中MDR1和MRP mRNA表达，分析药敏试验结果与MDR1、MRP mRNA表达的关系。结果42例胃癌组织中MDR1、MRP mRNA表达阳性率分别为38．1％和28．9％。CDDP、ADM和OXA耐药组中，MDR1 mRNA表达阳性率显著高于敏感组；在CDDP和HCPT耐药组中，MRP mRNA表达阳性率显著高于敏感组。结论MDR1和MRP高表达是胃癌对多种化疗药物具有耐药性的标志，结合体外药敏试验，有助于临床筛选有效的化疗药物。     

中药逆转肝癌多药耐药的研究进展

1943年,耶鲁大学的Gilman等首次将氮芥用于淋巴瘤的治疗,揭开了现代肿瘤化疗的序幕。近年来随着新的化疗药物和剂型的不断问世,化疗已成为肿瘤治疗的主要方法之一。然而化疗在肝癌治疗中的作用十分有限,主要原因之一就是多药耐药（multi-drug resistance,MDR）。MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时对其他结构和作用机理不同的抗肿瘤药物也产生交叉抗药性。多药耐药的形成机制相当复杂,主要同P-糖蛋白（P-gP）、多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）、     

肝细胞癌患者介入手术后胆汁瘤发病因素与临床特点

目的:探讨肝细胞癌患者介入手术后胆汁瘤发病因素与临床特点。方法:回顾性分析2013年1月—2015年1月期间500例经肝动脉化疗栓塞介入手术(TACE)治疗的肝细胞癌患者的临床资料,分析患者手术后胆汁瘤发病的危险因素和临床表现。结果:500例患者中45例(9.0%)术后发生胆汁瘤。统计分析显示,存在胆道扩张、TACE术前肝切除史、非超选择性插管、使用聚乙烯醇(PVA)颗粒是患者介入手术后发生胆汁瘤的危险因素(均P0.05)。45例胆汁瘤患者中10例为有症状胆汁瘤患者,主要为黄疸和发热,且胆汁瘤直径明显高于无症状患者(8.12 mm vs.21.84 mm,P0.05),穿刺引流治疗后8例患者胆汁瘤缩小,2例消失;35例无症状组患者定期影像学随访。结论:对于有危险因素的肝细胞癌患者,应积极做术前好评估和预防工作。有症状的胆汁瘤患者应当进行穿刺置管引流治疗,无症状的胆汁瘤患者应当进行影像学随访,若胆汁瘤增大需要进行穿刺置管引流治疗,均能取得良好的预后。     

多药耐药相关蛋白2、3与原发性肝癌合并门静脉癌栓术后辅助化疗疗效的相关性研究

目的：研究多药耐药相关蛋白2、3（MRP2、MRP3）表达与原发性肝细胞癌（HCC）合并门静脉癌栓患者术后辅助化疗疗效的相关性。方法收集2001年1月至2005年12月术后接受化疗的29例HCC合并门静脉癌栓患者的石蜡标本,构建组织芯片。采用免疫组织化学染色技术检测MRP2、MRP3的表达情况。将蛋白表达强度（＋＋）以上设为耐药组,其余为非耐药组,结合临床资料进行生存分析。结果 MRP2、MRP3阳性表达率分别为86.21％（25/29）和62.07％（18/29）。依据MRP2表达情况,耐药组19例和非耐药组10例进行生存分析显示,总体生存期（P=0.010）及无瘤生存期（P=0.039）差异有统计学意义。依据MRP3表达情况,耐药组16例和非耐药组13例比较,仅无瘤生存期差异有统计学意义（P=0.043）。多因素Cox回归分析显示,MRP2（P=0.009, HR=4.897,95%CI=1.475~16.261）、MRP3（P=0.002,HR=5.515,95%CI=1.861~16.341）表达情况为无瘤生存的独立影响因子。结论 MRP2、MRP3的强表达是导致肝癌耐药及化疗效果欠佳的原因之一。MRP2、MRP3有可能作为原发性肝癌患者临床筛选化疗方案的指标。     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

肝细胞癌的靶向免疫治疗及其在介入领域的应用

根治性治疗只适用于部分肝细胞癌(HCC)患者,多数中晚期患者常需要接受其他治疗,现有方法远不能满足肝癌患者的需求。除索拉菲尼外的抗血管生成药可作为二线药物治疗HCC。动物实验或临床试验已初步证实了程序性细胞死亡分子-1抗体、DC-细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和嵌合抗原受体(CAR-T)技术治疗HCC的疗效,且靶向免疫治疗联合介入疗法可能获得更佳疗效。本文对HCC的靶向免疫治疗及其在介入领域的应用进展进行综述。     

肝癌组织中Bcl-2和NF-κB的表达与AFP相关性的研究

目的：观察凋亡相关基因Bcl-2、核因子NF-κB在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达,并探讨二者与AFP之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测40例HCC组织（其中AFP阳性20例,AFP阴性20例）和10例良性肿瘤组织中Bcl-2、NF-κB的表达。结果：40例HCC患者Bcl-2阳性表达率为45.0%,NF-κB阳性表达率为57.5%;其中AFP阳性细胞Bcl-2表达率为55.0%,AFP阴性细胞为35.0%;AFP阳性细胞NF-κB表达率为75.0%,AFP阴性细胞为40.0%。HCC细胞NF-kB和Bcl-2的表达呈正相关（r=0.778,P〈0.01）。结论：Bcl-2、NF-κB的异常表达同HCC的抗凋亡和耐药性有一定关系,AFP阳性HCC细胞的Bcl-2、NF-κB阳性表达率更高。Bcl-2和NF-κB可以考虑作为预后的判断指标之一。     

Sirtl在肝癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的：研究肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法：应用包含44000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱,并比较两者之间存在明显上、下调的表达差异基因,随后用RT—PCR和Western blot方法进行验证分析。结果：基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中沉默信息调节因子1（Sirtl）在肝癌组织与癌旁组织中的表达差异明显,在肝癌组织中明显升高,经RT—PCR和Western blot证实与基因芯片结果一致。结论：Sirtl基因的表达可能与肝癌的发生发展密切相关。     

恩替卡韦联合介入治疗乙型肝炎相关原发性肝癌的临床研究

目的：探讨恩替卡韦联合介入方法治疗乙型肝炎相关原发性肝癌（HBVR-HCC）的临床疗效。 方法：选择2007年2月—2011年2月85例确诊为HBVR-HCC、没有手术治疗适应证的患者,其中44例采用恩替卡韦联合肝动脉段性化疗栓塞（TACE）治疗（观察组）,41例单纯采用TACE治疗（对照组）,分析两组治疗前和治疗后4、12、24、48周HBV-DNA水平、肝功能、AFP水平和Child-Pugh评分,并比较两组的临床疗效、不良反应以及生存状况。 结果：随治疗时间延长,观察组HBV-DNA水平逐渐降低,而对照组逐渐升高,两组差异在治疗后各时间点均有统计学意义（均P<0.05）;两组谷丙转氨酶（ALT）与AFP水平、逐渐降低,但观察组在治疗24周后的降低程度明显优于对照组（均P<0.05）;两组Child-Pugh评分逐渐升高,但观察组在治疗24周后的升高程度低于对照组（P<0.05）。观察组HCC的治疗有效率明显高于对照组,并发症和不良反应均明显低于对照组（均P<0.05）。两组的1年生存率的差异无统计学意义（P>0.05）,但观察组2年生存率和中位生存期优于对照组（均P<0.05）。 结论：TACE对HBV活动存在激发作用,抗病毒联合TACE治疗HBVR-HCC可有效控制HBV,改善患者的肝功能,提高临床疗效,且不增加毒副作用。     

顺铂化疗后大肝癌的病理研究

应用顺氯氨铂（ＤＤＰ）经３￣６个周期外周化疗治疗中晚期肝癌５５例，并对１２例获二期手术切除的肿瘤标本进行研究。结果表明，１２例获二期切除的均为巨块型肝癌，有完整包膜，肿瘤均有不同程度的坏死，且以周边为主，但瘤体内仍有癌细胞残留。肿瘤周围有不同程度的淋巴细胞、单核细胞、浆细胞浸润和纤维组织增生。电镜下见坏死的癌细胞，细胞结构消失，未坏死的癌细胞核内染色质空虚，核仁浓缩、胞质空泡糖原减少，癌周肝组织结     

原发性肝癌术后行肝动脉化疗栓塞治疗对患者生存及肿瘤复发的影响

目的：探讨原发性肝癌术后行肝动脉化疗栓塞（TACE）对患者生存及肿瘤复发的影响。方法：对原发性肝癌行肝部分切除、临床病例资料完整的患者行回顾性分析,分为术后行TACE组（实验组,103例）及未行TACE组（对照组,118例）,分别计算2组患者1年、2年及3年的生存率及肿瘤复发率。结果：2组患者在性别、年龄、HBV感染、分化程度、肿瘤大小、有无血管癌栓及肿瘤TNM分期方面差异均无统计学意义（P〉0.05）,实验组1年、2年及3年的生存率分别为95.1%、65.0%、40.8%,对照组为71.2%、40.7%,21.2%,差异有统计学意义（P〈0.01）,实验组肿瘤1年复发率为22.3%,对照组为40.7%,差异有统计学意义（P〈0.01）,实验组2年、3年的复发率为57.3%、73.8%,对照组为61.9%、78%,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：肝癌术后行TACE可提高患者远期生存率,降低肿瘤的近期复发率。     

GRIM-19在肝细胞癌组织中的低表达及对其侵袭能力的影响

目的：检测GRIM-19在肝细咆癌（HCC）中的表达,分析其与HCC生物学行为的关系,并探讨GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。方法：应用实时定量PCR技术检测83例HCC及其相对应的癌旁组织和8例正常肝组织中GRIM-19mRNA的表达,分析其与HCC临床病理因素之间的关系。用Westernblot法检测低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L和高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7中GRIM-19蛋白的表达。应用细胞转染技术将GRIM-19shRNA转入HL-7702和Huh-7,从而构建HL-7702和Huh-7的GRIM-19kd细胞系,并用Westernblot法检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。结果：实时定量PCR结果显示,83例HCC组织中有52例（62．65％）GRIM-19的表达低于相对应的癌旁组织（P〈O．01）,其表达水平也低于8例正常肝组织（P〈005）。GRIM-19的表达与HCC的TNM临床分期（P=O．011）、微血管浸润（P=O．047）和包膜浸润（P=O．013）密切相关。Westernblot显示HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh-7细胞系表达GRIM-19蛋白,且低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L中GRIM-19表达高于高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7。细胞侵袭实验显示GRIM-19低表达促进了HCC的侵袭能力。结论：GRIM-19在HCC的侵袭中起重要作用,可能为检测HCC的侵袭潜能提供新的研究思路。