SM22α和α-SMA在静脉曲张组织中的表达及其意义

目的 探讨下肢静脉曲张中平滑肌22α (smooth muscle 22 alpha,SM22α)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达与下肢静脉曲张的关系.方法 收集下肢静脉曲张患者的曲张大隐静脉组织作为实验组,另收集冠脉搭桥术患者正常下肢大隐静脉组织为对照组.RT-PCR方法检测标本中SM22α mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测标本中SM22α及α-SMA的表达.结果 SM22α mRNA表达量在实验组和正常对照组中分别为0.2614±0.1168和0.5114±0.1554,差异有统计学意义(t=5.020,P＜0.01).免疫组化示:SM22α和α-SMA均表达于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)胞质中.SM22α阳性蛋白累计吸光度(integrate optical density,IOD)值在实验组和对照组分别为10 055±3584和16226±3378,差异有统计学意义(t=4.991,P＜0.01),与PCR结果一致.α-SMA阳性蛋白IOD值在实验组和对照组分别为9746±3903和15 371±4318,两组比较差异有统计学意义(t=3.861,P＜0.05).结论 SM22α和α-SMA在曲张静脉中低表达表明曲张静脉发生了VSMC由收缩型向合成型的表型转换,进而导致静脉管壁的重塑和静脉曲张的发生.     

大隐静脉组织Nelin 与TIMP-2 表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用

目的：探讨大隐静脉组织Nelin与基质金属蛋白酶抑制物 2（TIMP-2）表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用。 方法：选取大隐静脉移植术后患者94例,根据是否合并下肢静脉曲张将其分为两组,研究组（合并下肢静脉曲张,48例）,对照组（未合并下肢静脉曲张,46例）。术中采集大隐静脉组织,采用免疫组化方法检测Nelin与TIMP-2表达,Masson染色显微镜下观察静脉重塑情况。 结果：与对照组比较,研究组Nelin阳性率明显降低,TIMP-2阳性率明显增高,两组比较差异具有统计学意义（P<0.05）;研究组平滑肌细胞增生,胶原纤维大量沉积;对照组血管壁结构完整,平滑肌细胞和胶原纤维均匀,排列规则;且研究组静脉壁厚度明显高于对照组,两组比较具有统计学差异（P<0.05）;Nelin阴性组静脉壁厚度明显高于Nelin阳性组,而TIMP-2阳性组静脉壁厚度明显高于TIMP-2阴性组,组间差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论：大隐静脉组织通过下调Nelin或上调TIMP-2阳性表达促进下肢静脉曲张血管重塑的平滑肌细胞和胶原纤维异常改变。     

滋养血管在下肢静脉曲张管壁病理学变化的研究

目的探讨下肢静脉曲张血管壁中滋养血管的变化。方法收集32例（36条）下肢静脉曲张管壁标本。对12例（16条）曲张静脉（曲张组）、9例下肢静脉曲张复发（复发组）、11例下肢血栓性浅静脉炎（静脉炎组）、9例正常静脉（对照组）行HE染色,观察滋养血管分布并测定滋养血管密度。结果曲张组、复发组、静脉炎组外膜和中膜层可见滋养血管明显增多,而内膜少见。曲张组、复发组、静脉炎组滋养血管密度（个/mm2）分别为5.65±1.45、6.20±1.73、5.94±1.63,均明显大于对照组（2.87±0.54）,差异有统计学意义（P〈0.05）;曲张组、复发组、静脉炎组3组间滋养血管密度比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论滋养血管的变化可能是下肢静脉曲张发病机制的一个重要病理改变。     

Fractalkine在下肢静脉性溃疡发病中作用的研究

目的 探讨Fractalkine在下肢静脉性溃疡发病机制中的作用.方法 采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术对Fractalkine在慢性静脉功能不全患者、静脉性溃疡患者和正常人下肢静脉血中的mRNA表达水平进行半定量检测,对其在手术前后溃疡及其周围局部皮肤中的表达进行定性和定位检测.结果 Fractalkine mRNA表达在静脉性溃疡患者较单纯静脉功能不全患者和正常人明显增高(P<0.05);手术前溃疡边缘组织的Fractalkine的表达显著高于正常皮肤组织(P<0.05),手术后愈合中或愈合后的溃疡组织Fractalkine的表达显著低于手术前溃疡边缘组织(P<0.05).结论 Fraetalkine的表达与下肢静脉性溃疡的发病有密切关系,Frac-talkine的高表达可能是导致肢静脉性溃疡的发病的重要因素.     

内皮素受体在下肢慢性静脉功能不全血管中的分布及其意义

目的：探讨内皮素受体A/B在下肢慢性静脉功能不全血管组织中的分布规律及临床意义。方法：取无明显曲张下肢静脉（对照组）和明显曲张下肢静脉（病变组）各10例,用免疫组织化学法测定内皮素A/B受体在两组血管组织中的定位分布,并计算受体与静脉疾病CEAP分期之临床分级（C）的相关性。结果：内皮素A受体主要分布于血管内皮,B受体主要分布于血管平滑肌。对照组中A受体（u=3.45,P<0.001）和B受体（u=4.14,P<0.001）位点阳性分布均显著高于病变组,尤以B受体为著。受体缺失与下肢慢性静脉功能不全的病变分级呈正相关(rA=0.70,rB=0.73)。结论：内皮素A/B受体与下肢慢性静脉功能不全的病理过程密切相关,可能对探讨其发病机制和防治提供新的靶点和途径。     

Twist基因在肝细胞癌中的表达水平及其对细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的 ：检测肝细胞癌（HCC）中Twist的表达水平，并分析其对HCC细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法：q RT-PCR检测HCC组织和细胞中Twist m RNA相对表达水平，Western blotting实验检测HCC细胞中Twist蛋白表达水平。si-Twist质粒转染至Hep G2细胞中为实验组，同时设置阴性对照组（转染si-NC质粒）和对照组（无转染），q RT-PCR和Western blotting实验检测转染效率。MTT和集落形成实验、Transwell实验、Western blot实验分别检测Twist敲低后对细胞增殖、侵袭和EMT相关蛋白表达的影响。结果：HCC组织和细胞中Twist m RNA和蛋白表达水平增加；实验组Twist的2-ΔΔCt值为0.32±0.08，明显低于对照组（1.00±0.10）和阴性对照组（1.02±0.09），差异有统计学意义（P<0.001）。实验组Twist蛋白灰度值为0.24±0.11，明显低于对照组（1.00±0.07）和阴性对照组（0.98±0.12），差异有统计学意义（P<0.001）；实验组7...     

重组血管生成抑制因子-1对增生性瘢痕组织血管及其相关因子的影响

目的 研究基因转染血管生成抑制对兔耳增生性瘢痕组织血管及其相关因子表达的影响.方法 将基因重组血管抑制剂Ad-METH-1作用于兔耳增生性瘢痕,用微循环显微镜检、组织学染色、免疫组织化学染色等方法,研究Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨基因转染血管生成抑制对增生性瘢痕的影响.结果 Ad-METH-1注射后30 d,实验组瘢痕组织微血管计数为12.38±2.56,VEGF阳性细胞百分比为17.64%,bFGF阳性细胞为18.24%;对照组微血管计数为48.12±6.46,VEGF阳性细胞百分比为31.34%,bFGF阳性细胞为28.26%.结果 显示,实验组瘢痕组织微血管计数低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.01);实验组瘢痕组织VEGF及bFGF的阳性细胞百分比均低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及VEGF、bFGF表达产生了明确的抑制作用,早期行血管抑制治疗可抑制增生性瘢痕的形成.基因转染血管抑制治疗有望成为一种有效的增生性瘢痕防治方法.     

原发性下肢静脉曲张患者曲张静脉组织CD62L表达的意义

目的:探讨CD62L在正常大隐静脉组织和曲张大隐静脉组织中的表达及其与原发性下肢静脉曲张的关系。方法:采用免疫组织化学技术检测CD62L在正常大隐静脉组织及曲张大隐静脉组织中的表达水平,利用H检验法分析其与大隐静脉曲张的关系。结果:正常大隐静脉组织中CD62L的表达(78.1400±2.3642)显著低于曲张静脉组织平均值(119.5354±35.5332)(P<0.05);曲张静脉组织CD62L的表达与软组织有无水肿、皮肤色素沉着、愈合性及活动性溃疡有关(均P<0.05)。结论:细胞黏附分子CD62L在曲张静脉组织中呈高表达,且其高表达与患肢软组织水肿、皮肤色素沉着、愈合性及活动性溃疡的发生有密切关系。     

神经生长相关蛋白43在大鼠椎间盘炎性模型中的表达及意义

目的探讨椎间盘炎性环境下大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)和椎间盘组织中神经生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)的表达及意义。方法正常成年雄性SD大鼠103只,体重200～250 g,随机分为实验组(n=48)、对照组(n=48)和空白对照组(n=7)。于大鼠L5、6椎间盘内注入荧光金(fluoro-gold,F-G)作为追踪剂;实验组和对照组于注入F-G 7 d后分别注射50μL弗氏佐剂(制备椎间盘炎性模型)和生理盐水,空白对照组不作进一步处理。实验组及对照组于弗氏佐剂注射后1、3、7、14 d分别取出T13～L6DRG和L5、6椎间盘,行GAP-43的荧光免疫组织化学染色、原位杂交和RT-PCR检测。空白对照组于F-G注入后8 d取材作以上检测。结果荧光免疫组织化学染色示:实验组DRG中F-G标记的GAP-43阳性细胞表达在术后3 d时显著高于对照组(P<0.05),其余时间点差异无统计学意义(P>0.05);实验组和对照组各时间点F-G标记的GAP-43阳性细胞横截面积比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后3 d GAP-43阳性细胞和钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、异凝集素B4(isolectin B4,IB4)双染表达显示,对照组和实验组CGRP的表达分别为91.4%±7.4%和87.6%±7.8%,差异无统计学意义(P>0.05),两组均无IB4表达;椎间盘中实验组GAP-43阳性神经纤维表达明显高于对照组(P<0.05),但CGRP阳性神经纤维表达比较差异无统计学意义(P>0.05),两组均无IB4表达。原位杂交实验和RT-PCR检测显示:除术后1 d实验组GAP-43 mRNA阳性细胞百分比及相对表达量显著高于对照组(P<0.05)外,其余时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论椎间盘内炎性环境刺激了大鼠DRG中GAP-43的高表达,促使中、小神经纤维长入病变椎间盘。     

原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的大隐静脉曲张致病相关基因的筛选与克隆

目的：筛选和克隆原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的大隐静脉曲张的致病相关基因。方法：利用mRNA荧光差异显示技术比较原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者的曲张大隐静脉隐-股瓣膜区组织中mRNA表达与对照组的差异,获得的差异表达cDNA片段经Northern blot验证后进行克隆和测序以探明其基因来源。结果：共获得37条差异表达的cDNA条带,经杂交验证其中30条为阳性（阳性率80％）。克隆及测序结果显示C610片段（NO.18克隆）与麦-考综合征（Mckusick-Kaufman syndrome,MKKS）基因的mRNA序列有96％的同源性。结论：C610片段(No.18克隆)与麦-考综合征基因高度同源,与下肢大隐静脉曲张的发病密切相关。     

含血栓的曲张大隐静脉管壁肥大细胞的分布与定量研究

目的：探讨含血栓的曲张大隐静脉血管壁肥大细胞的浸润情况。方法：收集单纯曲张大隐静脉管壁标本11例为曲张组,含血栓的曲张大隐静脉管壁标本11例为血栓组,另设8例正常大隐静脉管壁标本为对照组,行甲苯胺蓝特殊染色,观察血管壁中肥大细胞浸润的分布与计数情况。结果：血栓组肥大细胞外膜明显增多,呈＂聚集征＂,中膜、内膜呈散在增多;曲张组肥大细胞外膜、中膜、内膜少量散在分布。血栓组管壁肥大细胞总计数与曲张组、对照组之间比较差异有统计学意义（P〈0.01）,曲张组与对照组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：静脉血栓形成和慢性炎症可能是导致血管壁肥大细胞大量浸润的重要因素。     

Pokemon、Ki-67及Livin蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：检测胃癌组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达,探讨其在胃癌的表达及意义。方法：应用Western-Blot方法检测80例胃癌标本及正常胃组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达。结果：胃癌组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达分别为67.5%（54/80）、42.5%（34/80）和52.5%（42/80）。正常胃组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达为12.5%（10/80）、7.5%（6/80）、11.3%（9/80）。胃癌组织中Pokemon、Ki-67、Livin的表达与临床TNM分期、淋巴结转移有关,与年龄、性别、部位、Borrman分型无关。Pokemon与Ki-67、Livin的表达呈正相关（P〈0.05）。结论：Pokemon、Ki-67、Livin共同参与了胃癌的发生、发展和转移,可能成为胃癌临床诊断指标。     

靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA（shRNA）的双链寡核苷酸并构建pSilencer2．1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果：neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。通过RT—PCR及westernblot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达率分别达68固％和613％。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆明显减缓（P〈O．01）。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNAladder、透射电镜观察及流式细胞定量研究显示转染细胞凋亡明显增多。结论：靶向survivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长,为胆管癌的基因治疗提供一定的实验基础。     

Sirtl在肝癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的：研究肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法：应用包含44000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱,并比较两者之间存在明显上、下调的表达差异基因,随后用RT—PCR和Western blot方法进行验证分析。结果：基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中沉默信息调节因子1（Sirtl）在肝癌组织与癌旁组织中的表达差异明显,在肝癌组织中明显升高,经RT—PCR和Western blot证实与基因芯片结果一致。结论：Sirtl基因的表达可能与肝癌的发生发展密切相关。     

Survivin siRNA纳米载体的制备及其对胰腺癌细胞生物学特性的影响

目的：利用纳米技术和基因干扰技术设计并合成携载survivin siRNA的纳米载体,探讨survivins iRNA纳米微粒对人胰腺癌细胞BXPC-3增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人胰腺癌BXPC-3细胞,将BXPC-3细胞随机分为4组：生理盐水组、不含基因的纳米微粒组、survivin siRNA组和s urvivins iRNA纳米微粒组。RT-PCR检测survivin mRNA的表达;Wes tern blot法检测s urvivin蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况。结果：细胞培养72 h后,survivin siRNA纳米微粒组细胞的survivin mRNA和蛋白表达均低于其他3组（P〈0.05）。survivin siRNA纳米微粒组细胞增殖明显受抑制,生长缓慢,而细胞凋亡率高于其他3组（P〈0.05）。结论：survivin siRNA纳米微粒能够有效减少胰腺癌BXPC-3细胞survivin mRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制BX-PC-3细胞的增殖。     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

肝靶向性纳米载体介导psiRNA对HepG2细胞HLA-E干扰效率的检测

目的：检测肝细胞靶向性Gal-PEG-PEI纳米基因载体介导psiRNA干扰HepG2细胞HLA-E表达的效率。方法：分别用Gal-PEG-PEI/psiRNA、裸psiRNA、PEG-PEI/psiRNA、Gal-PEG-PEI/NC-psiRNA、Lipofectamine 2000/psiRNA转染HepG2细胞,同时以未转染的HepG2细胞为空白对照组,以Gal-PEG/NC-psiRNA（无义siRNA质粒）转染为阴性对照组。48 h后,Real-time RT-PCR检测HLA-EmRNA表达水平,Western blot法检测HLA-E蛋白表达水平。结果：Gal-PEG-PEI组对HLA-E的干扰效率为55%（mRNA水平）和62%（蛋白水平）,显著高于Lipofectamine 2000组、PEG-PEI组、裸psiRNA组和阴性对照组（P〈0.01）。结论：Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米粒具有良好的肝细胞靶向性,对HepG2细胞HLA-E有较高的干扰效率。     

IL-18基因转染大肠癌细胞及对其肿瘤原性改变的研究

目的：建立转染人白细胞介素-18（hIL-18）基因的大肠癌细胞株,并研究IL-18基因转染后SW480细胞肿瘤原性的改变。方法：将携带hIL-18的质粒pcDNA3.1-hIL-18转导入人大肠癌细胞系SW480细胞中,通过药物G-418进行筛选,利用RT-PCR和ELISA法对IL-18的表达进行检测;通过裸鼠致瘤实验观察肿瘤原性的改变。结果：IL-18基因成功转导入SW480细胞中并能顺利表达;RT-PCR电泳结果显示IL-18基因在mRNA水平有表达;ELISA结果显示,106个转染细胞在24 h内分泌IL-18的含量是（145.71±4.42）pg;空载体转染的细胞未检测到hIL-18;生长曲线显示转染hIL-18基因后的细胞生长明显减慢;黏附曲线显示SW480-hIL-18组的黏附率在各个时相点均明显升高,而空载体组和空白对照组之间差异无统计学意义（P〈0.05）。裸鼠致瘤实验表明,接种SW480-hIL-18细胞的裸鼠肿瘤体积明显小于SW480组和SW480-pcDNA3.1组;抗瘤实验结果显示,放射灭活的SW480-pcDNA3.1细胞和SW480-hIL-18细胞免疫接种裸鼠后,再接种SW480细胞于裸鼠左侧背部皮下,SW480-hIL-18细胞免疫接种组肿瘤长出的时间比SW480-pcDNA3.1细胞免疫接种组明显延长,并且肿瘤的生长速度明显低于SW480细胞免疫接种组。结论：hIL-18基因能成功整合到SW480细胞基因组中,并且能在转染的肿瘤细胞中持续表达。hIL-18基因转导后的SW480细胞生长受到抑制,黏附能力增强h,IL-18基因转染降低了SW480细胞的肿瘤原性;hIL-18基因修饰的SW480细胞具有明显的抗肿瘤作用,为大肠癌基因工程肿瘤疫苗的研制提供了实验基础。