一种新的细胞周期分析方法

目的：采用DNA含量流式细胞术细胞周期分析方法,可分辨出G0/G1期、S期及G2/M期3个细胞周期群体,但无法区分G0/G1期、G2/M期细胞。方法：本研究建立的cyclin E A/DNA多参数流式细胞术。结果：可将细胞周期进行详细的分期,由传统的三分法（C0/G1期、S期以及G2/M期）为六分法（G0期、G1早期、G1晚期、S期、G2期以及M期）, 为细胞生物学研究,尤其是细胞增殖动力学提供新的,更为合理的分析方法。     

双光源流式细胞术三参数细胞周期分析(英文)

目的建立双光源流式细胞仪三参数细胞周期分析方法,同时检测两种细胞周期素和细胞 DNA 含量,分析非时相性的细胞周期素的表达。方法运用免疫荧光标记技术对两种 cyclin 标记,一种用直接法(FITC 标记),另一种用间接法(RPE-Cy5标记的二抗),同时进行细胞核染色(荧光素 DAPI),双光源二点激发,三波段定量检测,数据运用 cellquest 软件分析。mAMSA 和 mimosine 诱导非时相性的细胞周期素表达。结果两种 cyclin 可同时检测,互不干扰,而且不需要荧光补偿,与单标相比无明显差别,cyclin 及 DNA 均可半定量分析。Cyclin A/cyclin E/DNA 分析可将对数生长期的 MOLT-4细胞分为六个亚细胞群(G10、G1e、G11、S、G2、M),mimosine 处理的细胞可见 G1期cyclin B1表达,mAMSA 处理的细胞有 G2期 cyclin E 的异位表达。结论运用免疫荧光技术在流式细胞仪上三参数细胞周期分析可以快速定量检测两种 cyclin 和 DNA 含量,更精确地对细胞增殖进行分析。     

双光源流式细胞术三参数细胞周期分析

目的建立双光源流式细胞仪三参数细胞周期分析方法,同时检测两种细胞周期素和细胞DNA含量,分析非时相性的细胞周期素的表达。方法运用免疫荧光标记技术对两种cyclin标记,一种用直接法(FITC标记),另一种用间接法(RPE-Cy5标记的二抗),同时进行细胞核染色(荧光素DAPI),双光源二点激发,三波段定量检测,数据运用cellquest软件分析。mAMSA和mimosine诱导非时相性的细胞周期素表达。结果两种cyclin可同时检测,互不干扰,而且不需要荧光补偿,与单标相比无明显差别,cyclin及:DNA均可半定量分析。Cyclin A/ cyclin E/DNA分析可将对数生长期的MOLT-4细胞分为六个亚细胞群(G10、1le、G1l、S、G2、M),mimosine处理的细胞可见G1期cyclin B1表达,mAMSA处理的细胞有G2期cyclin E的异位表达。结论运用免疫荧光技术在流式细胞仪上三参数细胞周期分析可以快速定量检测两种cyclin和DNA含量,更精确地对细胞增殖进行分析。     

Camptothecin(CPT)和Cytosine arabinoside(Ara-C)联合应用对MOLT-4细胞株周期特异性凋亡的影响

目的以急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT-4为模型,探讨作用于同一细胞周期的化疗药物 Camptothecin(CPT)和Cytosine arabinoside(Ara-C)联合应用时是否具有抗癌增效作用、引起细胞凋亡的周期时相性是否发生改变及对细胞周期检测点(ckeckpoint)的影响.方法喜树碱(CPT)(0.25 μmol/L),阿糖胞苷(Ara-C)(1.00 μmol/L),及喜树碱(CPT)(0.25 μmol/L) 阿糖胞苷(Ara-C)(1.00 μmol/L) 二药共同诱导急性早幼粒白血病细胞株MOLT-4细胞4 h,分别采用激光共聚焦显微镜(Confocal)观察其细胞的形态变化,采用Sub-G1法,API法及cyclins/DNA双参数法,运用流式细胞术分析凋亡、凋亡细胞的周期时相性及CyclinE的表达规律.以Western blot印迹法检测Bcl-2蛋白的表达.结果喜树碱和阿糖胞苷联合应用时,凋亡细胞的数目明显增加,二者具有协同效应.发生凋亡的细胞大多数仍然是S期细胞.CyclinE的表达升高,bcl-2蛋白的表达降低.结论作用于同一细胞周期的化疗药物CPT和Ara-C联合应用时,具有协同效应但并不改变细胞周期的作用点(Checkpoint).CyclinE和Bcl-2蛋白似乎在药物作用时起着关键性的调节作用,并对检测点的敏感性产生重要影响.     

白藜芦醇对胃癌细胞HGC27细胞周期的影响

目的:研究白藜芦醇对胃癌细胞株HGC27细胞细胞周期的影响.方法:不同浓度的白藜芦醇作用于HGC27细胞,用流式细胞术分析细胞周期.结果:白藜芦醇作用后,HGC27细胞的增殖速度减缓,DNA合成减少.白藜芦醇在较低浓度时即可诱导G0/G1阻滞.结论:白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生G0/G1阻滞,S期减少.     

RNAi沉默环氧合酶-2基因对宫颈癌Hela细胞细胞周期影响的实验研究

目的:利用RNA干扰(RNAi)抑制宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygen-ase-2,COX-2)表达研究其对细胞周期的影响。方法:构建特异性COX-2小干扰RNA(siRNA)真核表达载体质粒Pgenesil-COX-2,以脂质体法将其转染至人宫颈癌Hela细胞。转染48h分别用RT-PCR和Western blot方法评价Pgenesil-COX-2对COX-2表达的抑制效应,48和96h时用流式细胞技术检测Hela细胞细胞周期,用RT-PCR方法检测CyclinE的表达变化。结果:转染48h后,Pgenesil-COX-2特异性抑制了Hela细胞COX-2的表达,与对照组比较差异有统计学意义,t=4.496,P=0.002。48及96h流式细胞仪分析显示,转染Pgenesil-COX-2后Hela细胞增殖活性降低,与对照组比较G0/G1期细胞增多,t值分别为3.217和2.495,P值分别为0.011和0.043;S期细胞减少,t=5.978和6.137,P值均为0.000。同时,CyclinE表达降低,t值分别为2.879和8.612,P值分别为0.020和0.000。结论:siRNA真核表达载体可特异性抑制Hela细胞COX-2基因的表达,抑制COX-2表达可能通过下调Cy-clinE的表达使细胞周期阻滞于G0/G1期。     

细胞周期素E表达阈值的定量分析

背景与目的:细胞周期素(cyclins)表达阈值的分析是细胞周期运行机制研究的一个重要方面,但目前尚缺乏一种较为科学且统一的定量计算方法。本研究试图对细胞周期素E(cyclinE)的表达阈值进行标准化定量分析。方法:用cyclinE/DNA双参数流式细胞术对人类急性淋巴细胞性白血病细胞株(MOLT-4细胞)在不同的光电倍增管(Photomultipliertubes,PMT)电压下进行检测;另取MOLT-4细胞经咖啡因(caffeine)和放线酮(cycloheximide,CHX)分别处理后用同样方法在同一电压下进行检测;最后对MOLT-4细胞和另外一种人类急性淋巴细胞性白血病细胞株(JURKAT细胞)在同一电压下进行检测,分析以上3组实验所得的CyclinE/DNA二维等高图,用公式B2/A×C(A,B,C分别为cyclinE/DNA二维等高图上cyclinE荧光强度的最低值,阈值和最高值)定量计算cyclinE表达阈值。结果:用公式B2/A×C计算出MOLT-4细胞cyclinE的表达阈值在不同电压下保持恒定;经咖啡因处理后阈值下降,经放线酮处理后阈值不变;同时计算出JURKAT细胞cyclinE表达阈值比MOLT-4细胞明显要低。结论:公式B2/A×C适用于细胞cyclinE表达阈值的定量计算。     

金喜素诱导人肝癌HCC7721细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 :研究金喜素诱导人肝癌HCC772 1细胞的凋亡作用。方法 :采用MTT法测定金喜素对人肝癌HCC772 1细胞的杀伤作用 ;通过电镜观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳检测断裂DNA ;流式细胞仪分析DNA含量及细胞周期。结果 :经0 3 μmol/L金喜素处理 6、12、2 4及 3 6h ,HCC772 1细胞的存活率与对照组相比 ,逐渐降至 ( 83± 16) %、( 69± 10 ) %、( 5 2±13 ) %和 ( 3 0± 11) % ,低于对照组 ,P <0 0 5 ;靶细胞出现细胞固缩、染色质凝聚和边集 ;产生梯状DNA并检测到亚二倍体峰(凋亡峰 ) ;同时 ,G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少。结论 :金喜素可抑制人肝癌HCC772 1细胞增殖 ,使细胞阻滞在G0 /G1期 ,进一步诱导细胞凋亡。     

顺铂对肝癌细胞凋亡及其细胞周期的影响

目的：探讨顺铂对Hca-F细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：采用荧光，透射电镜及流式细胞术分析法检测肝癌细胞凋亡，细胞周期和增殖指数（PI）的变化。结果：CDDP可引起肿瘤细胞凋亡，并随着给药时间的延长，药物浓度的增高，细胞凋亡率随之增高，细胞凋亡形态结构越发典型，表现为核固缩，染色质边集，核小体形成等，同时药物浓度的升高，细胞周期S期比例下降，G0/G1期比例上升，PI增殖指数下降。结论：CDDP可引起细胞凋亡，细胞周期G0/G1期阻滞，使细胞分裂增殖活动受到抑制。     

肿瘤细胞自噬的诱导及其细胞周期分析

背景与目的:自噬作为Ⅱ型程序性死亡——自噬性死亡过程中的主要现象,与细胞的自噬性死亡有着密切的关系。研究者们对凋亡与细胞周期的关系进行了深入而细致的研究,但对自噬性细胞死亡与细胞周期的关系却知之甚少。本研究的目的是探讨不同方法诱导的细胞自噬与细胞周期之间的关系。方法:用Hanks’液替代培养基的饥饿诱导和用长春新碱诱导两种方法分别处理对数生长期的HeLa细胞、SW480细胞以及经过和未经过植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激的健康人外周血淋巴细胞;应用激光共聚焦显微镜和透射电镜检测细胞自噬的发生,兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain3,MAP1-LC3-Ⅱ)/DNA双参数流式细胞术分析自噬细胞的细胞周期。结果:HeLa细胞和SW480细胞用饥饿和长春新碱两种方法诱导的细胞自噬在G1、S、G2/M期均可以发生,且自噬发生率随诱导时间的延长逐渐增加。处于静止期(未经PHA刺激)的外周血淋巴细胞没有自噬的发生,48h时LC3-Ⅱ表达率<2.62%(HanksL液饥饿诱导)或<6.16%(长春新碱诱导);经PHA刺激48h进入细胞周期的外周血淋巴细胞,2h时已有明显的自噬发生。结论:MAP1-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术是对细胞自噬与细胞周期进行同步分析的一种新的简便可靠的方法;细胞自噬只发生在细胞进入周期后,而静止期细胞对自噬诱导因素不敏感。     

Cyclin E阈值降低促进细胞增殖

背景与目的：许多研究表明高表达Cyclin E使细胞增殖能力增加,也有研究报道Cyclin E表达较低而细胞增殖并未降低,而在我们对临床肿瘤样本进行研究时发现大量低Cyclin表达(包括Cyelin E)的细胞具有旺盛的增殖能力。为了解释这一现象,本研究旨在探讨MOLT-4细胞中Cyclin E阈值下降后细胞进入S期的增殖状况。方法：以低浓度咖啡因处理MOLT-4细胞2h、4h,构建Cyclin E阈值降低模型,采用流式细胞术分析增殖细胞核抗原(proliferation cell muclear antigen．PCNA)、增生抗原Ki67和光裂解诱导的选择性DNA断裂链(DNA straid break induction by photolysis,SBIP)阳性细胞数。结果：低浓度咖啡因处理MOLT-4细胞2h、4h后,Cyclin E阈值明显下降,PCNA、Ki67和SBIP阳性细胞数增加,并以咖啡因处理2h时变化最为明显。结论：CyclinE阈值由高水平迅速降低后细胞增殖陡然增加,Cyclin E阈值在较低水平时细胞仍然可增殖。     

细胞周期蛋白A、B1、D3、E在同步化及非同步化G1期MOLT-4细胞中的表达

背景与目的我们已经利用流式细胞术(flowcytometry,FCM)的多参数分析方法证实,用“双thymidine阻滞”获得的同步化细胞,其细胞周期蛋(Cyclins)A、B1、D3、E的表达严重失衡。但是,由于当时技术条件的限制,不可能对同期同步和非同步化的细胞中CyclinsA、B1、D3、E进行对照研究。本研究目的是用新建立的分选后的免疫印迹法(postsortingWesternblot),比较CyclinsA、B1、D3、E在同期同步及非同步化G1期MOLT鄄4细胞中的表达,证实双thymidine阻滞法诱导细胞同步化用于分析正常细胞周期的不合理性。方法以MOLT鄄4细胞为模型,用双thymidine阻滞法将细胞同步在G1/S转换期起始处的G1期,应用流式细胞术分选出同期非同步化生长的G1期细胞,采用DNA/Cyclins双参数分析法及免疫印迹法(Westernblot),检测同期同步化及非同步化G1期细胞中CyclinsA、B1、D3、E的表达。结果在分选的非同步化的G1期细胞中CyclinsA、B1几乎不表达,而在同期同步化的G1期细胞中具有明显的表达,CyclinsD3、E在同步化的G1期细胞中的表达明显高于同期分选的非同步化的G1期细胞,利用FCM的多参数分析方法和免疫印迹法所获得的结果一致。结论用双thymidine阻滞干预方法获得的同步化细胞其CyclinsA、B1、D3、E并不能代表正常细胞内的表达水平,因而不是分     

饥饿诱导肿瘤细胞自噬对细胞周期的影响

背景与目的:无血清饥饿方法可以诱发细胞自噬,同时也可以引起细胞周期阻滞。虽然研究者们对细胞自噬与细胞周期已经进行了深入的研究,但是对于两者之间的关系还是知之甚少。本研究旨在通过研究细胞周期素(Cyclin)在饥饿诱导的细胞发生自噬时表达的变化,来探讨自噬对细胞周期的影响。方法:对照组:d-Hanks液代替培养基饥饿诱导处于对数生长期的HeLa细胞,收获饥饿0、3、6、12h的细胞。实验组:用d-Hanks液开始饥饿的同时加入3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),收获饥饿0、3、6、12h的细胞,用流式细胞术和Western blot法检测细胞周期素和特异性标记自噬的兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC-3)。结果:饥饿3h对照组HeLa细胞中有LC-3表达,并随饥饿时间延长而逐渐增加。Cyclin E、Cyclin D3在饥饿3h开始减少,在饥饿6h降低至最低水平,而Cyclin A、Cyclin B1在饥饿6h开始下降。实验组HeLa细胞在饥饿3h时LC-3的表达水平较低,随饥饿时间的延长LC-3表达基本不变化,Cyclin D3、Cyclin E、Cyclin A、Cyclin B1表达的下降速度也较对照组减慢。结论:自噬参与饥饿诱导的Cyclin降解的水解过程,Cyclin D3、Cyclin E水解比Cyclin A、Cyclin B1出现早,降解速度快。     

蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用5、10、20、30 μmol／L SD-208处理非小细胞肺癌细胞A549（设不加SD-208仅添加完全培养基组为对照组）,分别在24、48、72 h 3个不同刺激时间点应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测A549细胞的吸光值并计算增殖抑制率;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和碘化丙啶（PI）双染色法结合流式细胞术检测不同浓度SD-208处理A549细胞24、48 h后的细胞凋亡情况,PI染色法流式细胞仪检测分析不同浓度SD-208处理A549细胞48 h后细胞周期时相分布情况;Western blotting检测不同浓度SD-208处理48 h后的细胞周期蛋白A（Cyclin A）、Cyclin D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和p16蛋白的表达水平。结果 SD-208 可抑制A549细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;SD-208处理后A549细胞的凋亡率及G0／G1期细胞比例均高于对照组,而S、G2／M期细胞比例均低于对照组,各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,SD-208处理后的Cyclin D1和CDK4蛋白水平降低,p16蛋白水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SD-208处理对A549细胞Cyclin A和Cyclin E蛋白水平无影响,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SD-208可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及G0／G1期阻滞,其机制可能与其影响细胞周期及相关调控蛋白水平有关。     

慢性粒细胞性白血病中Cyclin D2与Cyclin E及p27 mRNA的表达和细胞周期分布

目的：探讨CyclinD2、CyclinE和p27在慢性粒细胞性白血病（CML）发病过程中的作用机制。方法：以RT-PCR和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中CyclinD2、CyclinE和p27mRNA的表达及细胞周期分布情况,并以正常人骨髓单个核细胞做对照分析。结果：与对照组相比CML患者白血病细胞和K562细胞中CyclinD2mRNA的表达增高,tCML=2．842,PCML〈0．01;tK562=2．908,PK562〈0．01。CyclinEmRNA的表达也增高,tCML=2．109,PCML〈0．05;tK562=2．193,PK562〈0．05。p27mRNA的表达降低,tCML=2．688,PCML〈0．01;tK562=2．357,PK562〈0．05。G0／G1期细胞减少（tCML=2．386,PCML〈0．05;tK562=2．408,PK562〈0．05）,而S期细胞增多（tCML=2．114,PCML〈0．05;tK562=2．203,PK562〈0．05）。结论：CyclinD2、CyclinE和p27mRNA的表达在CML中发生了明显改变,致使G0／G1期缩短,细胞快速通过G1／S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。     

ATM在G2期同步化A549细胞低剂量放射超敏感性/增加放射抗性现象中作用研究

目的 探讨G₂期同步化A549细胞低剂量放射超敏感性/增加放射抗性(HRS/IRR)现象及ATM激酶在其中的作用。方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,阿非迪霉素同步化细胞于G₂期,特异性ATM激活剂氯喹和抑制剂KU55933调节ATM活性;克隆形成实验计算细胞存活分数;流式细胞技术检测受照G₂期同步化A549细胞周期进程;免疫荧光实验观察γ-H₂AX荧光焦点动态变化,评估G₂ 期同步化A549细胞DNA修复效率;Western blot检测p-ATM (Ser 1981)和ATM表达水平。结果 G₂ 期同步化A549细胞较非同步化细胞HRS现象更加显著,HRS/IRR转变剂量与早期G₂+M检测点剂量响应模式符合,但早期检查点激活提前且维持时间更久,剂量阈值不变。激活ATM激酶可抑制HRS现象且增强DNA损伤修复,抑制ATM激酶则增强HRS现象且阻碍DNA损伤修复。结论 ATM激酶介导的早期G₂+M检查点在同步化A549细胞HRS现象中起着分子开关作用。低剂量放射联合G₂期同步化和ATM抑制剂可提高低剂量放射敏感性。     

9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制

背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cisretinoicacid,9-cisRA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cisRA对胃癌的作用。方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoidXreceptor!,RXRα)、细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cisRA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达。结果:0.1～10μmol/L9-cisRA作用MGC803细胞96h,能显著抑制细胞增殖。10μmol/L9-cisRA分别作用48、72和96h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞。作用72h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48h开始,Bcl-2表达即显著下降。在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10μmol/L9-cisRA作用48h其表达水平显著增加(P<0.01);作用96h,细胞中CyclinD1和CDK4表达显著降低(P<0.01)。结论:9-cisRA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子CyclinD1和CDK4表达有关。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的　研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法　将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果　奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论　奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性