丙型肝炎病毒亚型与肝细胞癌关系的研究

本文总结了２７０４例ＨＣＶ有关的慢性肝病，并分析了各肝病包括肝细胞癌与ＨＣＶ亚型的关系。结果发现，１９２２例的慢性丙型肝炎中有１３０５例为ＨＣＶ－１ｂ关连型（１ｂ＋ｌｂ与２ａ或２ｂ混合型），占７１．２％，在３５６例肝硬化及４２６例肝癌中，ＨＣＶ－１ｂ关连型的出现率分别为７９．８％（２８４／３５６）及８０．５％（３４３／４２６）。这明显高于慢性丙肝炎中ＨＣＶ－１ｂ关连型发生率，但肝硬化与肝癌组之间比     

丙型肝炎病毒相关抗原定位研究现状

本文就近年来丙型肝炎病毒相关抗原在各种肝病组织中的定位及其应用的研究进展作一综述。     

肝组织中丙型肝炎病毒抗原的表达及其临床意义

目的研究肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒抗原的表达及其临床意义。     

肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒抗原的表达及其临床意义

应用抗-HCV NS4单克隆抗体(McAb)以酶标链酶亲和素生物素化二抗方法(LAB法)，对77例肝炎患者肝穿刺标本进行免疫组织化学研究。结果表明，HCV—Ag(NS4)呈细小颗粒状位于肝细胞浆中。急慢性肝炎肝组织中HCV-Ag阳性肝细胞数较少，呈散在分布．易见于汇管区周围;慢性重症肝炎肝内HCV—Ag阳性肝细胞数较多，提示HCV可能与慢性肝炎病情加重有关。15例血清抗HCV阳性和HCV RNA阳性患者中，12例肝HCV—Ag阳性．11例血清抗-HCV阳性和HCV RNA阴性患者中，3例肝HCV—Ag阳性，提示肝HCV—Ag(NS4)的表达与血清HCV RNA水平关系较为密切。HCV可能主要通过免疫机制引起肝细胞损伤。     

肝细胞癌中丙型肝炎病毒的原位检测

目的了解丙型肝炎病毒在本地区肝细胞癌中存在的频度.方法66例首次住院手术肝癌标本(含癌及癌旁组织),其固定、包埋、切片均经无RNase处理.应用地高辛标记HCVcDNA重组基因探针进行原位杂交,检测HCV病毒核酸.免疫组化SABC法检测HCV不同基因区抗原,HCV-CP10,HCV-NS3,HCV-NS5在HCC中的表达.结果66例HCC中HCVRNA阳性50例,阳性率为75.8%,阳性信号大部分存在于胞质中,偶有核阳性,或核浆混合型.HCVCP10阳性42例,阳性率63.6%.HCVCP10的阳性表达定位于胞质,少数病例有明显的围核分布现象,未见明确的核阳性.HCVNS3阳性33例,阳性率50%.HCVNS3阳性信号以胞质型为主,少数为核、浆混合型.HCVNS5阳性48例,阳性率72.8%.HCVNS5阳性信号以胞质型为主,部分呈膜型,少数为核、浆混合型.HCVRNA及三种抗原在癌周组织中的表达明显强于癌组织者.阳性细胞在癌组织呈散在分布,少数呈灶性分布,偶尔呈弥漫分布.在癌周组织大部分呈灶性、弥漫性分布,也可呈散在分布.经x2检验原位杂交检测HCVRNA一般比免疫组化检测HCV不同基因区抗原阳性率高,敏感(HCVRNA与HCVCP10相比,x2=4.083,P<0.05;与HCVNS3相比,x2=13.479,P<0.005;与HCVNS5相比,x2=0.1,P>0.5).两种检测方法的结果又有联系(HCVRNA与HCVCP10之间,x2=21.038,P<0.005;与HCVNS3之间,x2=13.942,P<0.005;与HCVNS5之间,x2=29.838,P<0.005).结论原位杂交结合免疫组化更能准确反映HCC中HCV的感染情况.     

丙型肝炎病毒核心抗原转位表达抑制肝(癌)细胞

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原的转位表达与肝（癌）细胞凋亡的关系及其意义．方法采用免疫组织化学方法检测ＨＣＶ核心区抗原Ｃ２２在肝硬变（ＬＣ）、肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织中的分布;同时对连续切片进行原位凋亡检测并计算凋亡指数．结果ＨＣＶ核心区抗原定位于肝细胞或肝癌细胞的胞质或胞核中,在ＬＣ组织中,Ｃ２２呈弥漫或灶状分布于肝细胞胞质,偶见胞核阳性的肝细胞,阳性率为６０７％;Ｃ２２抗原在ＨＣＣ细胞中以核阳性分布为主,阳性率为３７６％,癌旁肝组织以胞质阳性为多见．ＨＣＣ中ＨＣＶ核心抗原的核阳性率（７５０％,１５例／２０例）和阳性细胞数明显高于其在ＬＣ（１７７％,６例／３４例）及癌旁肝组织（１１８％,２例／１７例）中的阳性率（Ｐ＜００５）和阳性细胞数．在ＨＣＣ中,ＨＣＶ核心抗原核转位表达的癌组织的ＡＰＯＰＬＩ凋亡指数值（０１７４±００９３）显著低于胞质阳性的癌组织（０５１２±０１１３,Ｐ＜００１）．结论ＨＣＶ感染与我国ＬＣ,ＨＣＣ的发生关系密切,ＨＣＶ核心抗原在肝癌组织中常发生核转位表达,这种核转位表达使肿瘤细胞凋亡受到抑制,从而促进肿瘤组织的恶性生长．     

乙型、丙型和丁型肝炎病毒与肝细胞癌岛关系

采用 ELISA 法检测了140例肝癌患者的 HBV—M 和抗—HCV(其中38例检测了 HDV—M),并分别与56例非肝病患者和164例肝炎患者比较。结果肝癌病人中有91.2％检出 HBV—M 阳性,32.1％检出抗—HCV 阳性,HDV—M 无阳性检出。在抗—HCV 阳性的肝癌病人中,HBV—M 阳性率达95.6％。经X(?)检验分析,在 HCC 中,HBV—M、抗—HCV 和 HDV—M 的总体率两两之间均有极显著性差异。提示 HBV 与 HCC 关系最密切。HCV 次之,而 HDV 关系不明显。HCV 主要与 HBV 以重叠感染方式存在,因而推测 HCV 单独致癌的可能性不太,主要是通过调节和协同 HBV 而起促癌作用。     

原发性肝细胞癌癌周肝组织中乙型和丙型肝炎病毒抗原？…

目的：了解乙型和丙型肝炎病毒感染与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的病因学关系。方法：病例对照研究，以３９例肝硬化学伴发ＨＣＣ为测试组，４８例肝硬化为对照组，利用免疫组织化学染色观察肝组织切片中乙型（ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ阳性率在ＨＣＣ组（２３／３９，５８．９７％）和肝硬化组（２４／４８，５０％）之间无显著性统计学差异，ＨＢＶ和ＨＣＶ抗原同时阳性者在ＨＣＣ组（１４／３９，３５．８９％）高于肝硬化组（９／４     

肝炎病毒与肝细胞癌

肝细胞癌(HCC)的发生是一个多步骤的分子生物学过程，是原癌基因受激活，抑癌基因失活的结果。它可能涉及肝细胞基因组DNA序列10种分子生物学或遗传学的改变。乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)，黄曲霉幕(AFB1)、酒精和吸烟均为致HCC的高危因子，前两种为独立的高危因子，后几种可分别与肝炎病毒起相互作用，加速其发生过程。男性HBV感染阳性的HCC发生率高于女性，睾酮升高也被认为是一危陵因子，但其作用环节尚不清楚。     

HCV感染的慢性肝病患者肝组织HCV RNA和HCV C33c检测

为探讨丙型肝炎病毒在肝组织分布和致病机理，用地高辛标记的 ＨＣＶ５＇－ＮＣ区ｃＤＮＡ探针和抗ＨＣＶ Ｃ３３ｃ单克隆抗体对２４例ＨＣＶ感染的慢性肝病患者肝组织进行了原位核酸杂交和免疫组化研究，发现ＨＣＶ ＲＮＡ和Ｃ３３ ｃ阳性信号主要定位于肝细胞浆，ＨＣＶ感染的阳性肝细胞呈散在、局灶和弥漫三种形式分布，与丙氨酸转氨酶水平、肝组织学类型没有明显联系：ＨＣＶ感染的细胞周围有较多的淋巴细胞和单核细胞浸润。     

有偿供血员,丙型肝炎及肝癌患者HCV基因分型

为了解本地区ＨＣＶ基因亚型的分布情况，作者对采自６６例有偿供血员、８７例输血后丙型肝炎、１５例散发性丙型肝炎和９例原发性肝癌患者的共１７７份ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清标本，进行了ＨＣＶ基因亚型分析。结果发现除２例输血后丙肝患者系ＨＣＶ－Ⅲ感染外，其余被检者均为ＨＣＶ－Ⅱ感染。此结果表明ＨＣＶ－Ⅱ是本地区的ＨＣＶ伏势株     

原发性肝癌,肝硬化及肝炎患者中丙型肝炎病毒基因型调查

应用逆转录－套式聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析方法，对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的３３例原发性肝癌、１８例肝硬化、１０例肝炎（慢性活动性４例，慢性迁延性２例，急性３例，重型肝炎１例）患者及２例献血员进行ＨＣＶ５｀－末端非编码区基因分型。结果表明此６３例所感染的ＨＣＶ均属于Ⅱ型病毒，未检出Ⅲ／Ⅳ型病毒。提示Ⅱ型ＨＣＶ感染在重庆地区ＨＣＶ相关性肝癌和肝硬化的发生中可能起着主导作用，本地区丙型肝炎患者中的流行毒株亦属于Ⅱ型病毒。     

丙型肝炎病毒感染者肝组织中病毒抗原表达的免疫组化研究

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在肝组织中的表达状况，应用免疫组化方法以多克隆人抗－ＨＣＶ和单克隆鼠抗－ＨＣＶ－ＮＳ＿３检测一组ＨＣＶ感染者石蜡包埋肝组织中ＨＣＶ抗原（Ａｇ）和ＨＣＶ－ＮＳ＿３，并对抗原检出与血清ＨＣＶ标志的关系进行分析。结果：ＨＣＶＡｇ和ＨＣＶ－ＮＳ＿３检出率分别为３８．３％（２３／６０）和３０．０％（１８／６０）；所有ＨＣＶ－ＮＳ＿２，阳性者均同时表现ＨＣＶＡｇ阳性；阳性颗粒定位于肝细胞胞浆；阳性细胞分布呈散在、弥漫状和簇状，周围多天坏死及炎性细胞浸润；不同血清ＨＣＶ标志模式间抗原检出率存在明显差别。研究结果对认识ＨＣＶ致病机理有一定意义。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

HCV RNA及其编码蛋白在肝癌和癌旁肝组织中的表达

本文采用光敏生物素标记的ＨＣＶｃＤＮＡ探针和免疫金银显色法对４２例肝癌和癌旁肝组织中的ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ进行了检测，发现ＨＣＶＲＮＡ可以感染肝癌细胞，其分布状态及其抗原表达亦与肝组织一致。这些阳性细胞在组织中的感染状态多呈区域性，在此区域又可呈片状、簇状或散在分布。     

丁型肝炎患者肝组织HDAg和HBsAg/HBcAg的免疫组化检测

目的 探讨HDAg和HBsAg/HBcAg在丁型肝炎患者肝组织中表达及关系。方法 应用免疫组化双重染色,检测79例丁型肝炎患者肝组织HDAg、HBsAg和HBcAg表达,以52例乙型肝炎作对照。结果 丁型肝炎HBsAg、HBcAg检出率(81％、71％)较乙型肝炎(94％、92％)低(P<0.05或0.01)。HDAg以肝细胞核表达为主,HBsAg以肝细胞浆表达为主,HDAg和HBsAg表达强度及阳性细胞分布呈一致性,且均与肝组织的炎症活动和病理损害程度相关(P<0.01)。HBcAg以肝细胞核表达为主,阳性细胞主要呈单个细胞或点状分布,且HBcAg阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞。结论 HDV感染会抑制HBV病毒抗原(HBcAg)表达;HDV致病机制中既有HDV的直接细胞毒性作用,也有HBV和HDV的协同作用。     

66例慢性非甲非乙型肝炎患者的丙型肝炎病毒感染研究

以ＨＣＶ－Ｔ３序列为引物，结合ＲＴ－ＰＣＲ和寡聚核甘酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测６６例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）患者的血浆ＨＣＶ－ＲＮＡ，阳性４２例（６３．６％）。同样病例以相当于ＨＣＶＣ区基因编码和ＮＳ３区编码的人工合成肽抗原检测抗ＨＣＶ，阳性４９例（７４．２％）。这６６例慢性ＮＡＮＢＨ病例，抗ＨＣＶ和ＨＣＶ－ＲＮＡ双阳性者３８例（５７．６％）；抗ＨＣＶ阴性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者４例（６．１％）；抗ＨＣＶ阳性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性者１１例（１６．７％）。其中诊断为散发型ＮＡＮＢＨ者３５例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者１７例（４８．６％），为输血后ＮＡＮＢＨ者３１例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者２５例（８０．７％）。     

地高辛标记探针原位杂交检测肝组织中丙型肝炎病毒RNA

用地高辛标记ＨＣＶ５′－ＮＣ区ｃＤＮＡ探针原位杂交检测了２４例ＨＣＶ感染的慢性肝病患者肝组织中ＨＣＶＲＮＡ。结果：１７例同时血清抗ＨＣＶ（ⅡＥＬＩＳＡ法）和ＨＶＣＲＮＡ（套式ＰＣＲ法）均阳性病人中，１４例（８２．３％），肝组织检出了ＨＣＶＲＮＡ。７例仅有抗ＨＣＶ阳性病人，肝组织中没有检出ＨＣＶＲＮＡ。ＨＣＶＲＮＡ特异性信号主要位于肝细胞浆。感染ＨＣＶ的肝细胞呈散在，灶状或弥漫形式分布，与ＡＬＴ水平     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA定量分析：竞争性聚合酶链反应

目的：探讨ＨＣＶ复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）定量检测２７例慢性丙肝患者（ＣＨＣ）血清ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＣＨＣ患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平变化范围１０２～１０６ｃｏｐｉｅｓ／５０ｕｌｓｅｒｕｍ。１３例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）患者血清ＨＣＶＲＮＡ平均水平（５．０６８±１．０４，Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ）明显低于１０例慢性活动性肝炎患者（ＣＡＨ）（５．７９±０．２５）和４例肝硬化（Ｃｉｒ）患者（５．８３±０．７５），Ｐ值均＜０．０５。血清ＨＣＶＲＮＡ水平同ＡＬＴ水平间呈正相关（ｒ＝０．４９９７，Ｐ值＜０．０５）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，ＨＣＶ复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中ＨＣＶ仍活跃复制，并与肝病进展相关。