巢式RT—PCR检测肝癌患者外周血微量转移癌细胞

目的建立肝癌患者外周血微转移癌细胞的分子检测方法.方法从肝癌患者外周血中分离有核细胞,用TRzol提取RNA,特异引物扩增AFPmRNA,凝胶电泳观察结果.分析AFPmRNA扩增结果与患者临床指标的关系.结果肝癌患者外周血有核细胞RNA提取成功率为100%,33例肝癌患者AFPmRNA阳性率为69%(23/33),临床肝内门静脉癌栓、肝外转移患者AFP'mRNA扩增阳性率为100%,临床无转移患者AFPmRNA阳性率为56%(15/27),P＜0.05,AFPmRNA阳性患者的肿块最大径平均为10.67,AFP＞400μg/L者占40%(8/20),AFP'mRNA阴性患者肿块最大径平均为7.13cm,AFP＞400μg/L者占10%(1/10).结论巢式RT-PCR是检测肝癌患者外周血微转移癌细胞的稳定方法.     

AFP mRNA检测外周血游离癌细胞预测肝癌微转移的初步评价

目的　探讨原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA表达与其微转移的相关性。方法　应用巢式逆转录聚合酶链反应 (NestedRT -PCR)技术检测 10 2例原发性肝癌、2 2例非原发性肝癌及其他恶性肿瘤 ,6 4例慢性乙型肝炎、35例肝硬化和 4 0例健康献血员外周血单个核细胞AFPmRNA表达水平。结果　AFPmRNA在健康献血员、非原发性肝癌及其他恶性肿瘤、慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中均为阴性 ;在原发性肝癌组外周血单个核细胞中AFPmRNA的检出率 (5 6 86 % ,5 8/ 10 2 )明显高于肝硬化组 (8 5 7% ,3/ 35 ,P <0 0 5 )。外周血单个核细胞AFPmRNA的表达与临床分期、门静脉癌栓、肝内转移、远处转移明显相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤直径、数目及血清AFP浓度无明显相关 (P >0 0 5 )。结论　巢式RT -PCR检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA是一种早期发现肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

RT-PCR法检测肝癌患者周围和肝静脉血AFP mRNA及其临床意义

目的：通过对外周静脉因和肝静脉血AFPmRNA表达检测的比较，旨在寻找一种比较好的监测肝癌细胞转移的方法，并了解肝癌细胞在体内的转移机制。方法：抽取肝癌患者外周及肝静脉血，采用RT－PCR方法检测AFPmRNA，比较二者的阳性率。结果：在肿瘤直径＞5cm的肝癌患者，其外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性（P＝0．618），而在直径＜5cm的肝癌患者，其二处血AFPmRNA表达差异有显著性（P＝0．028）。结论：肝癌直径＜5cm的患者，直接检测肝静脉血能更准确地反映肝癌细胞肝内播散的情况。肝癌直径＞5cm的患者中，外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性，这部分患者的外周血AFPmRNA可代表其肝静脉血中AFPmRNA的状况。     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与临床参数的关系

目的　了解肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白 (AFP)mRNA的表达水平与不同临床参数的关系。方法　采用realtimeRT -PCR技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌、17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化和 2 0名健康志愿者外周血AFPmRNA的表达水平。结果　 5 6例肝癌患者外周血AFPmRNA的平均表达水平为 34 6 44 .6± 9490 5 .4copies/μgRNA ,其中 2 9例为阳性 ;17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化患者和 2 0名健康志愿者外周血均未检测到AFPmRNA的表达。结论　肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平与肝癌分期、门静脉癌栓及肝外转移密切相关 ,与肿瘤直径、数目及血清AFP水平无明显相关 ,可作为预测肝癌发生远处转移的一个可靠指标     

肝癌患者术前外周血甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

【目的】探讨肝细胞癌患者的外周血中甲胎蛋白（AFP）mRNA的检测在肝癌术后预后中的应用价值。【方法】应用巢式PCR和TaqManMGB探针法定量PCR技术，检测105例肝细胞癌患者和30例健康志愿者外周血AFPmRNA的表达情况。【结果】肝细胞癌患者术前外周血AFPmRNA的阳性率43.8％（46／105）高于健康对照10．0％（3／30），有显著性差异（P〈0．001）。术前血中AFPmRNA的表达与各项肿瘤侵袭性指标显著相关，包括肿瘤数目、大小、有无肉眼及镜下血管侵犯。AFPmRNA阴性患者1、2、3年生存率以及1、2、3年无瘤生存率均显著比AFPmRNA阳性患者术后高（两者均P=0．004）。多因素分析也指出术前外周血中是否表达AFPmRNA是预测术后复发的独立因素。【结论】肝癌患者术前外周血中是否表达AFPmRNA与肿瘤侵袭性相关，对于预测术后复发具有重要价值。     

甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的检测方法及其临床意义

目的　探讨AFPmRNA对诊断原发性肝癌的意义 ,并评估原发性肝癌的临床分期 ,预测转移倾向、预后和复发以及治疗。方法　建立并改进巢式逆转录多聚酶链反应 (nestedRT -PCR)检测外周静脉血肝癌细胞。结果　nestedRT -PCR在 1ml血中含有≥ 5个肝癌细胞时即可检测到AFPmRNA。 2 2例原发性肝癌中 18例血液标本检测到AFPmRNA ,而对照组中均未检测到AFPmRNA。AFPmRNA的检出率与肝癌分期 (TNM )、血清AFP浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系 (P <0 .0 1)。结论　nestedRT -PCR是一个稳定而又敏感的检测方法 ,AFPmRNA可作为定性诊断原发性肝癌的血液学指标 ,也可作为肝癌细胞转移的标志 ,并可判断肝癌临床分期、转移倾向、预后和复发     

门静脉血白蛋白mRNA检测在肝癌术后肝内转移监测中的意义

【目的】通过检测门静脉血中白蛋白mRNA的表达,探究其在肝癌术后肝癌肝内转移过程中的意义。【方法】采用RT-PCR方法检测32例肝癌患者(其中单发大肝癌17例、多发大肝癌8例、小肝癌7例)门静脉血中白蛋白mRNA的表达,9例非肝病对照者门静脉血中白蛋白mRNA的表达。【结果】①17例单发大肝癌中有9例白蛋白mRNA的表达呈阳性,8例多发大肝癌中有7例白蛋白mRNA的表达呈阳性,7例小肝癌中有1例白蛋白mRNA的表达呈阳性;②17例门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阳性者中有16例在术后3年内出现肝内转移。【结论】门静脉血中自蛋白mRNA表达呈阳性患者较门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阴性患者出现术后肝内转移几率高。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

目的 寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性ＡＦＰ ｍ ＲＮＡ。方法 巢式ＲＴ－Ｐ;ＣＲ检测外周血有核细胞成分中ＡＦＰ ｍＲＮＡ。结果 ４９例肝癌中１７例检出ＡＦＰｍＲＮＡ,阳性率３５％,其中９例证实有转移的６例阳性。１９例肝硬化,６例急性肝炎,８例慢性肝炎,５例肝良性肿瘤,６例肝内胆管癌,１１例肝转移癌,１３例健康对照组均为阴性。     

肿瘤异常蛋白与AFP mRNA检测在肝癌诊断中的价值

目的:探讨肿瘤异常蛋白(Tumour abnormal protein,TAP)、AFPmRNA对肝癌的诊断价值。方法:TAP测定利用末梢血,借助特殊凝聚助剂,用显微镜观察特异形态凝聚物,按形态结果分为阳性、阴性及临界。AFPmRNA荧光定量PCR法检测。结果:原发性肝癌TAP阳性率为94%(47/50),明显高于肝硬化20%(10/50)及慢性肝炎10%(5/50)阳性率。16例AFP阴性TAP阳性率为81%(13/16)。6例肝癌手术切除2周后TAP逐渐转阴,而用肝动脉栓塞化疗术则TAP不转阴,AFPmRNA早期肝癌Ⅰ期6例、Ⅱ期11例阳性,50例肝癌患者中72%(36/50)阳性,其中肝外转移阳性率100%(30/30),无肝外转移阳性率45%(9/20),慢性肝炎10%(5/50),肝硬化22%(11/50)。结论:TAP、AFPmRNA在慢性活动性肝炎和肝硬化的恶变和肝癌的早期诊断中有一定的意义     

肝癌及肝炎、肝硬化患者外周血甲胎蛋白mRNA定量检测

目的:探讨肝癌患者外周血甲胎蛋白(AFP) mRNA水平与肝癌临床病理特征的关系.方法:外周血样本(5 ml) 分别采自32例原发性肝癌、23例肝炎肝硬化、6例转移性肝癌、7例肝脏良性肿瘤患者及16例健康自愿受试者,外周血有核细胞AFP mRNA采用PCR辅助转录滴定系统(PATTY)进行定量检测.结果:原发性肝癌患者外周血AFP mRNA阳性率为65.6％(21/32),AFP mRNA水平为(1.6×106±34.4) copy/μg RNA,外周血AFP mRNA水平与门静脉癌栓及是否存在肝外转移明确相关(P<0.05),与肝癌大小、分化程度及血清AFP浓度无关.肝炎、肝硬化患者外周血AFP mRNA阳性率为8.7％(2/23),AFP mRNA水平皆为1×103 copy/μg RNA,明显低于原发性肝癌患者(P<0.01).其余受试者外周血AFP mRNA全部阴性.结论:外周血AFP mRNA定量检测有助于循环肝癌细胞与肝细胞的相对区分,高水平AFP mRNA可作为循环肝癌细胞的特异性标记物.肝癌患者外周血AFP mRNA水平仅与门静脉癌栓及是否存在肝外转移密切相关,可能成为预测肝癌转移复发的有效指标.     

肝细胞癌患者血液AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝细胞癌患者血液甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍｒＲＮＡ检测的临床意义。方法：取９３例肝癌患者,１５例肝炎后肝硬化患者,１２例慢性肝炎患者及１０例健康人静脉血各５ｍｌ,应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测其周围静脉血中ＡＦＰｍＦＮＡ。结果：在５０个肝癌血标本中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中未检测到１例。ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显     

肝癌外周血AFP mRNA的测定及意义

目的 建立一种灵敏的巢式逆转录聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）,用于检测外周血中的ＡＦＰ ｍＲＮＡ。方法 将患者分成四组：原发性肝细胞癌组３８例,慢性肝炎组９例,肝炎后肝硬化组１２例,正常对照组１０例。通过采肝素抗凝外周血、分离单个核细胞、抽提ＲＮＡ、逆转录合成ｃＤＮＡ、设计ＡＦＰ基因引物来进行巢式ＰＣＲ扩增。 结果 所有正常人外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ全部阴性,原发性肝细胞癌组的外周血中ＡＦＰ ｍＲＮ     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的诊断意义

目的：探讨血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式RT-PCR检测40例复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA。结果：21例伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA均表达阳性（100％）,19例复发性肝癌患者中有7例血液AFP mRNA表达阳性（36.8％),两组比较差异有显著性意义(P<0.01）。结论：血液AFP mRNA有希望成为判断肝癌复发或预测肝癌远处器官转移的客观性指标之一。     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性 …

目的：探讨血液ＡＦＰｍＲＮＡ在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测４０例复发性肝癌及伴有远外器官转移的原发性肝癌血液ＡＦＰｍＲＮＡ。     

外周血胰岛素样生长因子Ⅱ-mRNA对肝癌的诊断价值

目的探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-II）-mRNA在肝癌诊断和判断预后中的价值。方法从癌组织和外周血中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成IGF-ⅡcDNA,再分别以RT-PCR扩增IGF-ⅡcDNA片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果肝癌组织和外周血中扩增出的IGF-Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致。肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF-Ⅱ基因检出率分别为100%、53.3%和0。肝癌患者外周血IGF-II基因片段阳性率34.2%,在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14.3%、19.4%和45.5%,在伴有肝外转移肝癌中全数阳性,在AFP〈50ng/ml的17例中阳性6例（35.3%）;肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组中未见IGF-Ⅱ基因片段阳性。IGF-Ⅱ基因标志与肝癌大小间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论外周血IGF-Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。     

肝癌患者围手术期外周血黑色素瘤抗原-1mRNA和甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

目的 探讨肝细胞癌患者围手术期外周血MAGE-1mRNA和甲胎蛋白(AFP)mRNA表达水平其与术后转移复发的关系。方法 通过巢式RT—PCR,在围手术期检测了45例肝细胞癌患者外周血MAGE-1mRNA和AFPmRNA,并进行平均11个月的随访。同时以22例肝炎后肝硬化、11例肝血管瘤、12例肝转移癌患者和20例健康志愿者外周血标本作为对照组进行了MAGE-1mRNA和AFP mRNA的对比检测。结果 MAGE-1mRNA在12例肝转移癌患者外周血中的检出率为33．3％(4／12);肝炎后肝硬化、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。AFP mRNA在肝炎后肝硬化患者外周血中的检出率为13．6％(3／22),在肝转移癌、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。45例肝细胞癌患者外周血中,MAGE-1mRNA／AFP mRNA的检出率分别是术前42．2％(19／45)／51．1％(23／45),术后7d20％(9／45)／24．4％(11／45),术后28d15．6％(7／45)／22．2％(10／45)。统计分析提示,术后28d肝细胞癌患者外周血检出MAGE-1 mRNA／AFPmRNA预示患者近期复发。并且双标志物联合检测较单标志物检测对预测复发具有更高的敏感性。结论采用巢式RT—PCR的方法联合检测肝细胞癌患者术后28d外周血中癌特异性的MAGE-1 mRNA和肝细胞特异性的AFP mRNA有助于预测肝细胞癌患者术后的转移复发。