健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响

目的 探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体信号通路的影响。方法 从60只SD大鼠中随机取10只为正常组,其余大鼠自由饮用5%硫酸葡聚糖（DSS）溶液7 d复制UC大鼠模型后,再随机分为模型组、柳氮磺吡啶（0.3 g·kg^-1）组和健脾益肠散高、中、低剂量（54.4、27.2、13.6 g·kg^-1）组,连续给药14 d。每日观察记录大鼠的一般状态,给药前后进行疾病活动指数（DAI）评分;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）含量,苏木素-伊红（HE）染色法观察结肠组织病理变化,免疫组化法、蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测结肠组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-l）的蛋白阳性表达、蛋白及mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠的一般状态相对较差,DAI评分显著增高（P<0.01）,结肠出现病理学改变,血清IL-1β、IL-18含量显著升高（P<0.01）,结肠组织NLRP3、ASC、Caspase-l的蛋白阳性、蛋白及mRNA的表达均显著增强（P<0.01）。与模型组比较,健脾益肠散各剂量组的一般状态明显好转,DAI评分明显减小（P<0.05,P<0.01）,HE染色显示病理变化明显减轻,结肠NLRP3、Caspase-l的蛋白表达均明显减少（P<0.05,P<0.01）;健脾益肠散高、中剂量组血清IL-1β、IL-18含量、结肠ASC的蛋白表达及NLRP3、ASC、Caspase-l的mRNA表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）;健脾益肠散高剂量组NLRP3、ASC、Caspase-l的蛋白阳性表达均显著减少（P<0.01）;健脾益肠散中剂量组ASC、Caspase-l的蛋白阳性表达均明显减少（P<0.05）;健脾益肠散低剂量组ASC的mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 健脾益肠散能通过调节NLRP3炎症小体信号通路,减少结肠免疫炎症损伤发挥治疗UC的效应。     

基于NLRP3焦亡通路的中药干预溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎（UC）主要发生于结直肠,该病病理机制复杂,与肠道的不可控性炎症反应密切相关。当前,西医主要使用糖皮质激素、免疫抑制剂等减轻肠道炎症,虽然可以在一定程度上阻遏UC的进展,但不良反应较大。越来越多研究证实,中医药防治UC具有明显的优势,可显著降低该病复发率。细胞焦亡是一种新型细胞死亡方式,可破坏细胞结构,释放胞内促炎物质,介导UC肠道免疫反应。研究人员认为中医药对细胞焦亡的干预主要表现为促进细胞焦亡（损其有余）和抑制细胞焦亡（补其不足）,这与调节阴阳相一致。其中,中药主要通过抑制细胞焦亡（补其不足）,减轻肠道免疫反应,起到治疗UC的作用。近年来,业界开展了大量研究探索中药通过调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)焦亡通路治疗UC的作用机制,结果表明NLRP3焦亡通路是中药治疗UC的关键靶通路。但目前尚缺乏关于中药抑制NLRP3焦亡通路进而治疗UC的全面系统的总结。该文以“细胞焦亡”“NLRP3”“溃疡性结肠炎”及“中药”等为关键词,检索和分析近年来该领域中英文文献,发现调控NLRP3焦亡通路的中药主要包括清热燥湿类、调和气血类、行气通腑类和健脾祛湿类,这可为科研...     

玉屏风散通过ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路抗变应性鼻炎的作用机制

目的 探讨玉屏风散对变应性鼻炎（AR）的治疗作用及对活性氧（ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）通路的影响。方法 将SPF级小鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组（0.9 mg·kg^-1）、玉屏风散低、中、高剂量组（6、12、24 mg·kg^-1）,每组10只。正常组给予常规饲养,其余各组腹腔注射［卵清蛋白（OVA）+Al（OH）?+磷酸盐缓冲液（PBS）］混悬液,隔日1次,连续7次。7 d后,10% OVA溶液滴鼻,2次/d,连续7 d。造模成功后,各给药组小鼠腹腔注射不同剂量的玉屏风散汤液,正常组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,每日记录各组小鼠喷嚏、抓鼻和流涕症状进行评分;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠鼻灌洗液和血清中卵清蛋白特异性免疫球蛋白E（OVA-sIgE）、组胺（Histamine）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）、前列腺素D₂（PGD₂）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-18、IL-4、γ干扰素（IFN-γ）水平;苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠鼻腔黏膜损伤状态,过碘酸雪夫（PAS）染色法观察小鼠鼻腔黏膜杯状细胞数目,免疫组化法检测小鼠鼻腔黏膜NLRP3蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测鼻腔黏膜NLRP3、剪切（cleaved） Caspase-1和cleaved Gasdermin-D（GSDMD）蛋白的表达;试剂盒检测各组小鼠鼻腔ROS变化。结果 与正常组比较,模型组小鼠鼻部症状明显加重,血清及鼻灌洗液中炎症因子OVA-sIgE、Histamine、ECP、PGD₂、IL-1β、IL-18、IL-4水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,IFN-γ水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;组织病理学评分、杯状细胞数目和ROS含量显著升高（P<0.01）,焦亡相关蛋白NLRP3、cleaved Caspase-1、cleaved GSDMD表达升高（P<0.01）。与模型组比较,氯雷他定组和玉屏风散组小鼠鼻部症状明显减轻,血清及鼻灌洗液中炎症因子OVA-sIgE、Histamine、ECP、PGD₂、IL-1β、IL-18、IL-4水平降低（P<0.05,P<0.01）,IFN-γ水平升高（P<0.05、0.01）;组织病理学评分、杯状细胞数目和ROS含量显著减少（P<0.05,P<0.01）,焦亡相关蛋白NLRP3、cleaved Caspase-1、cleaved GSDMD表达降低（P<0.05,P<0.01）。与氯雷他定组比较,玉屏风散高剂量组疗效进一步增高（P<0.05,P<0.01）。结论 玉屏风散对变应性鼻炎具有治疗效果,其具体的作用可能与其抑制ROS/NLRP3/Caspase-1引起的细胞焦亡有关。     

电针调节NLRP3/Caspase-1通路对帕金森病大鼠多巴胺能神经元焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)大鼠多巴胺能神经元焦亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、MCC950组、电针+MCC950组,每组12只。采用6-羟基多巴胺两点注射法制备PD大鼠模型。MCC950组大鼠按10 mg/kg腹腔注射MCC950,1次/d;电针组予电针“太冲”及“风府”,每次30 min, 1次/d;电针+MCC950组在电针组基础上按10 mg/kg给予腹腔注射MCC950,1次/d。以上干预均连续2周。干预后,采用诱导旋转实验、转棒实验和旷场实验观察大鼠行为学改变;免疫组织化学法检测中脑黑质多巴胺能神经元标志物酶酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-Syn)的阳性表达;HE染色法观察大鼠中脑黑质纹状体多巴胺能神经元损伤程度;免疫荧光双染法检测脑组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)和离子钙接头蛋白1(Iba-1)的免疫阳性共表达;ELISA法检测脑组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18的含量;Western blot法检测中脑黑质纹状体NLRP3、剪切的半胱天冬...     

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨半夏泻心汤（BXT）对溃疡性结肠炎（UC）大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）及其下游因子的影响,阐释BXT治疗UC的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为正常组、UC模型组、BXT低剂量组6.3 g·kg^-1·d^-1、BXT高剂量组12.6 g·kg^-1·d^-1、柳氮磺吡啶（SASP）组0.42 g·kg^-1·d^-1,每组各7只。依据分组灌胃大鼠2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐（DSS）溶液10 d建立UC模型后,灌胃给药7 d。实验期间观察大鼠一般状态,给药期间统计疾病活动指数（DAI）评分,实验结束后,采集结肠组织进行苏木素-伊红（HE）染色观察病理学改变,以观察BXT疗效。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织NLRP3、Caspase-1、消皮素D（GSDMD）、白细胞介素（IL）-1β mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达情况,以探讨BXT的治疗机制。结果 与正常组比较,UC模型组大鼠DAI评分明显升高,结肠组织出现病理学改变,结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β mRNA的表达及蛋白水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;与UC模型组比较,各给药组大鼠DAI评分显著降低,结肠组织病理学改变得到改善;BXT给药组结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β mRNA及蛋白的表达水平明显下调或趋于下调,以BXT低剂量组效果最佳（P<0.05,P<0.01）。结论 BXT可通过调控NLRP3/Caspase-1通路抑制细胞焦亡,缓解溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响

目的观察乌梅丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响,揭示该方治疗UC的作用机制。方法以SD大鼠为研究对象,采用TNBS/乙醇灌肠诱导UC形成,通过乌梅丸灌胃给药,Q-PCR法检测各组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1、Math-1m RNA的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1m RNA表达显著增强,Math-1m RNA表达明显降低(P0.05);乌梅丸方给药后,大、中、小剂量组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1m RNA表达明显降低,Math-1m RNA表达显著增高(P0.05)。结论乌梅丸可通过Notch信号通路调节结肠上皮细胞的增殖和分化,对溃疡性结肠炎起治疗作用。     

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的 研究茱萸丸对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的影响及其相关机制。方法 采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除（low density lipoprotein receptor knockout,LDLR^-/-）小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR^-/-小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量（130.54、261.08、552.16 mg/kg）组和阿托伐他汀（10.40 mg/kg）组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）、IL-1β、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;超高液相色谱串联质谱法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS）检测小鼠血浆中三甲胺（trimethylamine,TMA）、氧化三甲胺（trimethylamine oxide,TMAO）含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein,ASC）、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）mRNA表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著下降（P＜0.01）,主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高（P＜0.01）,SOD活性显著降低（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数降低（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降（P＜0.01）,主动脉中ROS含量增加（P＜0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高（P＜0.01）。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低（P＜0.05、0.01）,HDL-C水平显著升高（P＜0.01）,主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低（P＜0.05、0.01）,SOD活性显著升高（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高（P＜0.05、0.01）,厚壁菌门菌群丰度降低（P＜0.05）,主动脉中ROS含量减少（P＜0.05、0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）。结论 茱萸丸能够显著抑制LDLR^-/- AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。     

滋肾丸对糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化的影响

目的 研究滋肾丸（ZSW）对糖尿病肾病（DN）小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化（EMT）的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据。方法 自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组（1.0 mg·kg^-1）及ZSW高、中、低剂量（6.0,3.0,1.5 g·kg^-1）组,非糖尿病db/m小鼠为正常组。模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周。每2周检测尾静脉空腹血糖（FBG）;每4周检测尿白蛋白/肌酐（ACR）,N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）和胱抑素C（CysC）;给药12周后摘眼球取血,血清检测尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）;光镜及投射电镜观察肾组织病理学改变;免疫组化法观察分析肾小管上皮EMT标志物表达强度;原位末端标记法（TUNEL）染色观察分析肾小管上皮细胞的核损伤水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EMT标志物、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体相关蛋白及焦亡相关炎症因子的蛋白表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测上述蛋白的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著升高,肾组织出现病理损伤,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度、蛋白及mRNA表达显著改变,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率、肾组织焦亡相关炎症因子和NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,ZSW及达格列净组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著降低（P<0.01）,肾组织病理损伤不同程度减轻,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度显著改变（P<0.01）,蛋白及mRNA表达不同程度改变（P<0.05,P<0.01）,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率及肾组织焦亡相关炎症因子的蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）,NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。结论 ZSW抑制肾小管上皮细胞焦亡及EMT,可能是其治疗DN的作用机制。     

红萸饮对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/Caspase-1/ASC细胞焦亡通路的影响

目的：探析红萸饮对溃疡性结肠炎（UC）小鼠细胞焦亡通路的调控机制。方法：将40只C57/BL6小鼠随机分为正常组、模型组、红萸饮组（1.5g/kg）和美沙拉秦组（0.50g/kg）,采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液1周的方法造模。造模后正常组和模型组予蒸馏水,红萸饮组和美沙拉秦组予相应药物灌胃7d,期间观察小鼠体质量、粪便等一般情况及疾病活动指数评分（DAI）;HE染色观察结肠黏膜变化;微板法测定结肠组织中乳酸脱氢酶（LDH）水平;ELISA法检测血清中IL-18和IL-1β的含量;TUNEL荧光法检测结肠组织细胞凋亡水平;免疫组化法检测通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）变化;Western blot法检测焦亡关键蛋白（IL-1β、IL-18、GSDMD）的表达。结果：与正常组比较,造模后动物体质量降低,DAI评分上升,结肠黏膜损伤严重,结肠组织蛋白上清中LDH含量显著升高（P<0.01）,血清炎症因子（IL-1β、IL-18）含量均显著增加（P<0.01）,TUNEL染色阳性明显,结肠组织焦亡通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）表达量均显著增...     

慢溃宁方对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路和肠道菌群的影响

目的 探讨慢溃宁方对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠道菌群的调控作用,和对NOD样受体（NLR）P3/胱天蛋白酶（Caspase）-1/Gasdermin D（GSDMD）细胞焦亡通路所介导炎症的影响。方法 SPF级C57BL/6小鼠60只,随机分为空白组、模型组、慢溃宁方组（20 g·kg^-1）、美沙拉秦组（0.266 g·kg^-1）,各组15只。小鼠通过自由饮用3%DSS溶液,7 d构建UC模型。造模开始12 h后,治疗组每天灌胃给药,其余组灌胃等体积生理盐水。记录小鼠每日体质量等情况,并评估计算疾病活动指数（DAI）。第8天麻醉后,脱臼颈椎处死小鼠,收集结肠和粪便,记量结肠长度;观察结肠组织苏木素-伊红（HE）染色后的病理学改变;结肠中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测;基于16S rRNA测序技术检测各组小鼠粪便中肠道菌群的差异;NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白结肠组织中含量用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测。结果 相较于空白组,模型组小鼠的DAI升高（P<0.01）,结肠长度显著缩短（P<0.01）,结肠黏膜损伤严重,TNFα、IL-1β、IL-18水平均明显升高（P<0.01）,且结肠组织中NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白含量显著升高（P<0.01）,肠道菌群结构改变,门水平上的放线菌门、拟杆菌门与变形菌门丰度减少,厚壁菌门丰度增加;属水平上的乳酸杆菌、普雷沃氏菌和鼠杆菌属丰度减少,拟杆菌属、芽孢杆菌、毛螺旋菌属NK4A136丰度增加。慢溃宁方组、美沙拉秦组相较于模型组,第3天后DAI显著降低（P<0.01）,结肠长度均显著增加（P<0.01）,结肠的炎症浸润及黏膜结构损伤减轻,且结肠TNF-α、IL-1β、IL-18水平均显著下降（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白在结肠组织中的含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,门水平上的变形菌门和拟杆菌门丰度增加,厚壁菌门丰度减少。结论 慢溃宁方可通过抑制细胞经典焦亡通路,缓解UC小鼠结肠炎症反应,减轻结肠损伤,并对肠道菌群紊乱有改善作用。     

槐绛方调控NLRP3/Caspase-1通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究

目的 探讨槐绛方对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）通路的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组以及槐绛方低、中、高剂量（0.2、0.4、0.8 g/kg）组,对照组给予正常饮用水,其余各组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）水溶液诱导UC模型,连续7 d。造模同时各给药组灌肠不同剂量槐绛方,对照组和模型组灌肠等体积0.9%氯化钠溶液,每日记录各组小鼠体质量、便血、便形等症状改变,并进行疾病活动指数（disease activity index,DAI）评分,采用苏木素-伊红（HE）染色评估小鼠结肠黏膜组织病理改变,ELISA法检测结肠组织中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平,Western blotting法检测结肠组织中NLRP3、Caspase-1、Gasdermin D（GSDMD）蛋白表达。结果 与模型组比较,槐绛方明显减缓小鼠体质量下降,有效减轻小鼠结肠炎症状,降低炎症因子（TNF-α、IL-1β）和焦亡相关蛋白（NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N）表达（P<0.05、0.01）,对UC损伤有较好的改善作用,且呈剂量相关性。结论 槐绛方具有改善UC小鼠炎症状态、恢复结肠形态、抑制细胞焦亡作用,其作用机制与调控NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

实验性结肠炎大鼠结肠上皮细胞凋亡与肠道通透性的研究

目的探讨右旋葡聚硫酸钠（DSS）溶液诱导建立的溃疡性结肠炎（UC）大鼠模型肠上皮细胞凋亡改变与肠黏膜屏障的关系。方法将18只健康SD大鼠随机分成2组：UC组12只和NC组6只,UC组大鼠自由饮用DSS溶液（浓度为40g／L）7d,建立急性UC模型,NC组正常饮水,第8天处死大鼠,留取结肠标本,HE染色观察结肠黏膜病变,TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测UC大鼠结肠上皮细胞凋亡数。结果TUNEL细胞凋亡检测结果显示,UC组大鼠结肠上皮细胞凋亡数量明显高于NC纽,细胞凋亡数目和肠黏膜损伤的程度呈正相关。结论DSS诱导的UC大鼠肠上皮细胞凋亡增加,相邻细胞间的间隙增大,导致肠黏膜屏障受损,从而使肠道通透性增高。     

芦丁对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用及NLRP3炎症小体的影响

目的观察芦丁对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的干预作用。探讨其对NLRP3炎症小体信号分子活化的影响。方法将60只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只。除空白组外,其余组均采用葡聚糖硫酸钠诱导建立溃疡性结肠炎模型,美沙拉嗪组同时给予美沙拉嗪缓释颗粒灌胃,芦丁高、中、低剂量组分别给予100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)芦丁溶液灌胃,空白组、模型组以等体积l%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,均连续5 d。灌胃结束后,比较各组疾病活动度(DAI)评分、组织学评分,采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清和结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,采用qRT-PCR法检测结肠组织中NLRP3、IL-1βmRNA表达量,采用Western blot法检测结肠组织中NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分、组织学评分,血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,芦丁高、中剂量组和美沙拉嗪组上述指标均明显降低(P均<0.05),且芦丁高剂量组血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显低于美沙拉嗪组(P均<0.05)。结论芦丁可明显改善溃疡性结肠炎小鼠临床症状,抑制黏膜炎症损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。     

基于细胞信号通路探讨小檗碱治疗溃疡性结肠炎研究进展

小檗碱是黄连属植物的主要提取物,经现代研究已确证其有抗炎、抗氧化、抗菌及免疫调节等药理作用。溃疡性结肠炎(UC)是一种病因不明的慢性,特发性炎性肠病,其发病原因涉及遗传,肠道微生态和黏膜免疫系统失调等因素。该文通过查阅,梳理近年来小檗碱对溃疡性结肠炎的相关通路及其作用机制,为开展小檗碱治疗UC的药物开发及机制探讨提供方法与思路。结果显示,小檗碱通过调节JAK-STAT,NF-κB,PI3K-AKT,MAPK,Nrf2,ERS和MLCK-MLC等多条信号通路,发挥保护肠黏膜屏障、恢复机体正常免疫应答、抗氧化应激等作用,进而达到治疗UC的目的。     

小檗碱与6-姜烯酚配伍对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响

目的探讨黄连、干姜有效成分小檗碱、6-姜烯酚单独和联合应用对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响。方法 50只昆明小鼠随机选取10只为对照组,其余40只采用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎模型。成模后随机分为模型组、小檗碱组、6-姜烯酚组、小檗碱+6-姜烯酚组,ig给予相应药物,给药20 d后取结肠组织。免疫荧光法检测结肠上皮组织Hes-1、Math-1、MUC2、人类嗅素蛋白(olfm4)的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法检测结肠上皮组织Notch-1、Hes-1、Math-1m RNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,6-姜烯酚组、小檗碱组、小檗碱+6-姜烯酚组小鼠结肠上皮组织Notch-1、Hes-1蛋白和m RNA表达水平显著降低,Math-1蛋白和m RNA表达水平显著升高,olfm4蛋白表达显著降低,MUC2蛋白表达水平显著升高;3组间比较,小檗碱+6-姜烯酚组作用最明显。结论 6-姜烯酚、小檗碱均能够有效修复受损结肠黏膜,治疗溃疡性结肠炎,小檗碱和6-姜烯酚联合应用药效优于单独应用,其机制与抑制Notch通路的过度活化进而调节结肠上皮细胞增殖和分化相关。     

基于Notch信号通路研究白头翁汤对溃疡性结肠炎小鼠肠黏液屏障的保护作用

目的 探讨白头翁汤对葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）诱导的溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠肠黏液屏障的保护作用以及对Notch通路的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪（50 mg/kg）组和白头翁汤低、高剂量（7.4、14.8 g/kg）组,对照组小鼠自由饮用纯净水,其余各组连续8 d自由饮用2.5%DSS溶液诱导UC模型,造模同时各给药组ig相应药物。每日记录小鼠体质量、粪便稠度以及血便情况;采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化;采用AB-PAS染色观察结肠组织黏蛋白2(mucin 2,MUC2)的分泌情况;ELISA法检测结肠组织中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性及促炎因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子IL-10的含量;免疫组化法检测结肠组织Ki67的表达情况;免疫荧光法测定结肠组织富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(leuc...     

基于NLRP3炎症小体研究白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

目的 研究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）对白念珠菌异常定植下的葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt,DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）的治疗作用,以及对Dectin-1/脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法 将105只C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS+白念珠菌组及BAEB低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组和美沙拉嗪（200 mg/kg）组。对照组小鼠每日自由饮水;DSS组予3%DSS溶液,自由饮用连续7 d;其他组在DSS组基础上,在第1、3、5、7天ig白念珠菌（1×108 CFU/只）。第8天开始分别ig相应药物,1次/d,连续7 d。每天称定小鼠质量,观察一般状...