保定地区儿童偏肺病毒感染的研究

目的了解保定地区婴幼儿呼吸道感染与人类偏肺病毒的关系。方法采用RT—PCR方法，对收集的547例呼吸道感染常见病原体检测阴性的标本，进行偏肺病毒（hMPV）基因检测。抽取10份阳性扩增产物进行测序和比较。结果315份标本中共检测到82份阳性扩增产物，阳性率为26．0％。占总检测例数的15．0％。结论保定地区部分患儿的急性呼吸道感染与hMPV有关。     

儿童人类偏肺病毒感染流行病学特征与诊治进展

人类偏肺病毒(HMPV)是一种新近发现的呼吸道致病病毒.HMPV感染主要发生在冬春季,各年龄阶段的人群都可受到感染,尤以儿童、老年人和免疫缺陷患者易患.世界各国报道其感染率不尽相同,感染症状可从轻微的上呼吸道病变到严重的细支气管炎和肺炎.对HMPV的检测有三种方法:病毒抗原抗体检测、病毒的细胞培养和荧光定量RT-PCR.治疗上以对症治疗为主.     

太原地区急性呼吸道人偏肺病毒和人博卡病毒感染患儿临床特征分析

目的了解太原地区急性呼吸道感染(ARTIs)儿童人偏肺病毒(hMPV)与人博卡病毒(HBoV)的感染情况及其临床和流行病学特征。方法采集2012年11月—2013年5月及2013年11月—2014年5月就诊的ARTIs患儿549例,采集咽拭子标本,应用实时PCR方法检测hMPV与HBoV。结果 549例患儿的咽拭子标本中hMPV阳性56例(10.2%),HBoV阳性15例(2.7%)。其中2012年11月—2013年5月hMPV与HBoV检出率分别为12.3%和2.0%,2013年11月—2014年5月hMPV与HBoV检出率分别为6.5%和4.0%,两时间段hMPV检出率差异有统计学意义(P0.05),HBoV检出率差异无统计学意义(P0.05);不同月份hMPV、HBoV检出率差异无统计学意义(P0.05)。hMPV与HBoV均在2岁组中检出率最高。hMPV在喘息性支气管炎与毛细支气管炎患儿中检出率最高。结论太原地区hMPV和HBoV与部分儿童尤其是婴幼儿ARTIs有关,hMPV是诱发部分婴幼儿喘息性疾病的重要病原体之一。     

2006—2008年苏州地区儿童呼吸道人偏肺病毒感染的流行和临床特征

目的了解人类偏肺病毒(hMPV)在苏州地区小儿呼吸系统感染中的感染情况,分析其流行病学特点;探讨hMPV感染后的临床特征。方法选取2006年1月—2008年12月苏州大学附属儿童医院6 395例急性呼吸道感染住院患儿,总结临床特征;用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测痰液中hMPV N基因,随机挑选部分阳性PCR扩增产物进行核苷酸测定,并将所测序列在GenBank中进行比较分析。结果 6 395例标本中,检测到589份RT-PCR阳性扩增产物,检出率为9.2%,其中2006年度hMPV检出率为8.4%,2007年为7.6%,2008年为12.6%。hMPV在3年的每个月份都有检出,但在2006年12月、2007年1月和2008年5月呈现年度高峰,分别为24.2%、21.6%、31.9%。589例hMPV感染患儿的平均年龄为22.21个月;临床诊断上呼吸道感染3.6%,喉炎2.0%,毛细支气管炎20.2%,肺炎61.8%,哮喘急性发作12.4%。主要临床表现为咳嗽,鼻塞流涕,发热,呼吸困难,哺喂困难,喘息。20份hMPV N基因部分核苷酸片断与GenBank中hMPV N基因序列同源性为99%～100%。结论苏州地区部分儿童的呼吸道感染与hMPV有关。全年均存在hMPV感染,流行高峰在冬春季,连续3年的检出率有较大差异。hMPV感染的临床特征无特异性。     

急性呼吸道感染住院儿童人偏肺病毒感染的流行情况及临床特征

目的了解急性呼吸道感染住院患儿人偏肺病毒(hMPV)呼吸道感染的流行情况及临床特征。方法收集2006年11月～2007年2月本院儿科中心的112例急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本,对其中65例用直接免疫荧光法(DFA)检测常见7种呼吸道病毒特异性抗原阴性患儿鼻咽分泌物用间接免疫荧光法(IFA)检测hMPV抗原。结果1.IFA能检测到鼻咽分泌物中hMPV抗原;2.阳性8例,阳性率为12.31%,112例中单一hMPV感染率为7.14%;3.hMPV的检出高峰主要在11月份及次年1月份;4.在≤5岁年龄组阳性率为15%(6/40例),>5岁年龄组阳性率为8%(2/25例),二组hMPV感染阳性率差异无统计学意义(P>0.05);5.hMPV感染的临床表现无特征性。结论西安地区儿童急性呼吸道感染与hMPV感染有关;咳嗽、发热是hMPV感染后的主要临床症状。     

北京地区六岁以下儿童急性呼吸道偏肺病毒感染

目的 了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与人类偏肺病毒(Human Metapneumovirus,HMPV)的关系。方法对2002年11月～2003年3月,收集的247份经过间接免疫荧光法和病毒分离排除了常见的呼吸道病毒感染的鼻咽洗液标本进行了HMPV基因的检测。用针对HMPV N基因序列设计的特异引物对这247份标本进行RT-PCR扩增,扩增片段经1.2％琼脂糖凝胶电泳检测。挑选10份阳性扩增产物直接进行核苷酸序列测定,并将所测序列在GeneBank中进行比较分析。结果 247份标本中共检测到74份RT-PCR阳性扩增产物,阳性率为30.0％(74／247)。74例中临床诊断为肺炎者36例,占48.6％;其次为毛细支气管炎21例,占28.4％;年龄2个月～5岁7个月不等,≤2岁者占83.8％。所挑选的10份N基因扩增产物与GeneBank中同源性最高的均为HMPV(87％～99％)。10份标本中9份标本的扩增产物之间的核苷酸和氨基酸同源性在95.8％～100％和98.6％～100％,1份标本的扩增产物与其他标本同源性较低,仅为87.3％～89.7％和95.8％～97.2％。结论 (1)北京地区部分儿科患者的急性呼吸道感染与HMPV有关;(2)北京地区的HMPV中可能存在不同的基因型。     

人偏肺病毒感染发病机制及疫苗研究

人偏肺病毒（HMPV）在儿童呼吸道感染中的重要性越来越受到重视。HMPV感染往往在冬春季节流行,且1岁以内婴儿感染率最高,临床表现与呼吸道合胞病毒相似。机体通过病原识别受体（PRRs）识别HMPV病原相关模式分子（PAMP）,其中Toll样受体3和4可能起重要作用,诱导I型干扰素及其它促炎症因子产生。采用定点诱变法成功制备F蛋白去N连接糖链减毒重组活疫苗株,在小鼠动物模型中证实该疫苗株有良好的免疫原性和免疫保护作用,具有临床应用前景。     

重庆地区急性下呼吸道感染住院患儿人偏肺病毒感染的流行病学研究

目的了解重庆地区急性下呼吸道感染(ALRTI)住院患儿人偏肺病毒(hMPV)感染的流行病学特点和临床特征。方法收集2006年4月至2008年3月重庆医科大学附属儿童医院呼吸科病房每周一、三、五因ALRTI住院患儿住院当日白天的鼻咽吸取物(NPA),采用荧光定量PCR方法检测hMPV基因组RNA,阳性标本采用传统PCR方法扩增F基因,进一步确定是否存在hMPV感染,扩增G基因用于遗传进化分析。同时采用传统PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)和冠状病毒NL-63(HCoV-NL63),直接免疫荧光法(DFA)检测流感病毒A、B亚型,副流感病毒1、2、3型和腺病毒。分析hMPV感染的流行病学特点和临床特征。结果研究期间共收集878份标本,占同期ALRTI入院病例的13.9%(878/6296例)。hMPV阳性227/878例(25.9%)。男∶女为1.9∶1。hMPV阳性227例中,6个月119例(52.4%),～2岁72例(31.7%),～6岁34例(15.0%),6岁2例(0.9%)。hMPV流行特点为全年散发,好发季节为冬春季。hMPV阳性率2006年4月至2007年3月为18.5%(72/390例),2007年4月至2008年3月为31.8%(155/488例)。227例hMPV阳性患儿临床诊断以肺炎(148例,65.2%)和毛细支气管炎(65例,28.6%)为主。hMPV可与常见呼吸道病毒协同感染,其中与RSV协同感染率最高(41.9%,95/227例)。遗传进化分析显示,研究期间重庆地区hMPVA和B基因型均流行,以A2亚型为优势株。结论 hMPV是重庆地区ALRTI住院患儿重要的呼吸道病毒病原之一,以6个月婴儿为主要感染人群。     

儿童慢性活动性EB病毒感染临床及实验室检查特征

目的 研究慢性活动性EB 病毒感染(CAEBV)患儿的临床及外周血淋巴细胞亚群等实验室检查特征,为CAEBV 的诊治提供依据.方法 分析13 例CAEBV 患儿的临床资料,包括患儿的临床表现、病毒学检测及淋巴细胞亚群测定结果,并与15 例急性EB 病毒感染(AEBV)病例作对照研究.结果 两组患儿临床表现类似,主要为发热、肝脾肿大、淋巴结肿大等传染性单核细胞增多症(IM)样症状,区别在于CAEBV 患儿病程较长,上述症状持续或反复出现.CAEBV 组患儿外周血EBV-DNA 载量明显高于AEBV 组(P<0.05).CAEBV 组VCA-IgG 明显高于AEBV 组(P<0.05).CAEBV 组外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、B 细胞计数、总T 细胞计数、CD4+ T 细胞计数和CD8+ T 细胞计数均低于AEBV 组(P<0.05).随访13 例CAEBV 患儿,8 例死亡,2 例好转,2 例病情仍有反复,1 例转院后失访.15 例AEBV 患儿均治愈,随访1 年无病情反复.结论 CAEBV患儿临床表现多样,早期较难与AEBV 鉴别,预后差,病死率高.外周血EBV-DNA 载量、VCA-IgG 及淋巴细胞亚群的测定对CAEBV 诊断具有一定帮助.     

东莞市镇区小儿呼吸道人类偏肺病毒感染临床与分子流行病学特征

目的 了解东莞市镇区小儿呼吸道人类偏肺病毒(hMPV)感染的临床与分子流行病学特征.方法 收集2007年2-10月东莞市石碣医院儿科门诊及病房7岁以下呼吸道感染患儿呼吸道分泌物标本340例,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hMPV F基因,应用多霞PCR检测呼吸道合胞病毒A、B型(RSV A、B型).流感病毒甲、乙型(Flu-A、B型),副流感病毒l、2、3型(PIV1、2、3型).并随机挑选4例hMPV阳性者PeR产物行基因测序分析.结果 340份标本中hMPV阳性者32份(9.41%),其中在阳性标本中5例并RSV感染,2例并PIV 3型、2例并Flu-B型.2-4月份检出阳性率高于5-10月份.32例hMPV感染阳性患儿平均年龄5.97个月,临床表现以发热、咳嗽、喘息为主,hMPV感染患儿临床表现与其他常见呼吸道病毒感染者无显著性差异(P>0.05).32例hMPV阳性患儿诊断下呼吸道感染30例,占阳性标本的93.75%,急性上呼吸道感染2例(6.25%).4例PCR产物基因测序分析与GenBank序列同源性87%～99%.hMPV PCR产物基因序列进化数分析显示其属于2个不同的基因型,其中A基因型3例,B基因型1例.结论 hMPV是小儿呼吸道感染一种重要的病原体,小儿呼吸道hMPV感染发病率在2-4月份较高,其临床表现以咳嗽、发热、喘息为主.东莞地区小儿呼吸道感染中hMPV存在A、B 2个不同基因型,以A基因型较常见.实用儿科临床杂志,2009,24(10):741-744     

2009-2011年湖南地区儿童呼吸道人偏肺病毒及其他病毒混合感染的流行特征

目的了解人类偏肺病毒(hMPV)在湖南地区小儿呼吸道感染中的情况,统计并分析其流行病学特点。方法收集2009年2月-2011年8月湖南省儿童医院及中南大学湘雅三医院因呼吸道感染住院治疗患儿的鼻咽分泌物标本3 108份,采用直接免疫荧光法检测hMPV,结合其他7种常见呼吸道病毒混合感染的情况对其流行特征进行分析。结果 3 108份标本中hMPV阳性568份,检出率为18.3%。其中2009年检出率为11.3%(107/949例),2010年检出率为20.7%(205/992例),2011年检出率为21.9%(256/1 167例);混合感染阳性标本127份,检出率为4.1%。不同性别及不同季节hMPV检出率差异均无统计学意义(Pa>0.05);不同年龄段儿童hMPV检出率差异有统计学意义(P<0.01);感染hMPV患儿确诊肺炎50.9%,差异有统计学意义(P<0.01);不同年龄段混合感染检出率差异无统计学意义(P>0.05);不同季节混合感染检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论 hMPV感染率总体呈上升趋势,且有隔年流行性的可能;2009-2011年儿童感染hMPV与性别和季节无关;感染hMPV患儿主要集中在≤2岁年龄段,感染hMPV患儿临床诊断多数为肺炎;混合感染的可能性与年龄无关,混合感染主要发生在秋季。     

重庆地区0～6岁儿童人类偏肺病毒感染状况调查

目的检测重庆地区0～6岁儿童人类偏肺病毒(hMPV)特异性IgG抗体,了解其感染状况。方法由于hMPV与呼吸道合胞病毒(RSV)同属副黏病毒科,需首先明确hMPV与RSV有否交叉抗原。故采用RSV抗原吸附血清标本中可能存在的RSV抗体,用酶联免疫吸附(ELISA)法比较未经吸附和已吸附RSV抗体的血清与RSV或hMPV感染细胞裂解液的反应情况;制备抗hMPV兔血清,用免疫印迹法检测该血清与hMPV和RSV反应性,进一步排除RSV和hMPV间存在交叉抗原的可能性。然后用hMPV感染的Vero-E6细胞裂解液为抗原,用ELISA法检测重庆医大附属儿童医院的325份0～6岁不同年龄非呼吸道感染患儿和正常儿童的血清标本中hMPVIgG抗体。结果经RSV抗原吸附的血清与RSV抗原反应性明显降低,同一血清与hMPV的反应性却无明显改变;免疫印迹法证实,用hMPV抗原免疫家兔获得的抗hMPV抗血清仅与hMPV抗原反应,而不与RSV抗原反应,提示RSV与hMPV间并无交叉抗原性。用ELISA法检测不同年龄组儿童血清中hMPVIgG抗体阳性率分别为0～5月龄74·5%,6～11月龄64·0%,12～23月龄、24～35月龄、3～6岁组分别为72·7%、90·3%、93·1%。在各年龄组中RSV与hMPV阳性率非常相近。结论hMPV是重庆地区0～6岁儿童常见的呼吸道病原,既往感染率与RSV相似,至6岁时儿童几乎均经历过hMPV感染。     

2006-2007年苏州地区儿童呼吸道人类偏肺病毒感染的流行和临床特征

目的 了解苏州地区儿童人类偏肺病毒(hMPV)呼吸道感染的流行情况及临床特征.方法 收集2006年1月-2007年12月我院呼吸科4702例急性呼吸道感染住院患儿的呼吸道分泌物,用逆转录-聚合酶链反应法检测hMPV N基因,随机挑选部分阳性PCR扩增产物进行核苷酸测定并将所测序列在GenBank中进行比较分析.结果 4702例标本中,检测到376份RT-PCR阳性扩增产物,阳性率为8%;2006,2007年hMPV检测阳性率分别为8.4%、7.6%.hMPV检测阳性率分别在1、2、3月和11、12月呈现高峰,hMPV感染患儿的平均年龄为22.56个月,376例hMPV感染患儿中临床诊断为上呼吸道感染12例(3.2%);喉炎8例(2.1%);毛细支气管炎102例(27.1%);肺炎210例(55.9%);哮喘急性发作44例(11.7%).20份hMPV N基因部分核苷酸片断与GenBank中hMPVN基因序列同源性为99%～100%.结论 (1)苏州地区部分儿童的呼吸道感染与hMPV有关.(2)全年均存在hMPV感染,流行高峰在冬春季.(3)hMPV感染的临床特征无特异性.     

流式细胞术建立甘肃地区学龄前汉族儿童外周血淋巴细胞亚群相对计数的正常参考值范围

目的 建立甘肃地区学龄前汉族儿童外周血淋巴细胞亚群相对计数的正常参考值范围。方法 纳入2018年1月31日至2019年1月30日在甘肃省妇幼保健院(我院)行鞘膜积液、疝、血管瘤等手术或常规体检的0~7岁汉族健康儿童,排除患心脑血管疾病、血常规或肝肾功能异常、行淋巴细胞亚群检测前3周内存在感染、有先天性免疫缺陷疾病者。分为新生儿组、婴儿组、幼儿组和学龄前组。均采集静脉血2 mL(EDTA抗凝),于24 h内用四色荧光标记流式细胞术完成淋巴细胞亚群检测,以(P_2.5,P_97.5)作为各指标的正常参考值范围。结果 ①共792名儿童进入本文分析,男472名,女320名,新生儿组174名、婴儿组216名、幼儿组170名、学龄前组232名。②不同性别之间比较,新生儿组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞、NK细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺比值差异有统计学意义,婴儿组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺比值差异有统计学意义,学龄前组T细胞、CD4⁺T细胞、B细胞、NK细胞百分比差异有统计学意义。③男、女各年龄组组间整体比较,淋巴细胞亚群百分比差异均有统计学意义。T细胞、CD4⁺T细胞百分比随年龄增长呈降低趋势,男女童降低趋势相近;CD8⁺T细胞百分比随年龄增长呈升高趋势,女童增高趋势更明显;B细胞百分比在1岁前呈上升趋势,后呈降低趋势,女童的变化趋势较为缓和;NK细胞的变化与B细胞相反,在1岁内降低,而后升高,男童变化趋势更明显。结论 健康儿童淋巴细胞亚群的分布与地域、年龄段和性别有关。     

学龄前儿童注意缺陷多动障碍决策树预测模型的前瞻性研究北大核心CSCD

目的探讨注意力时间联合行为量表在学龄前儿童注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)筛检中的应用价值。方法ADHD组来自2019年2月至2020年3月福建省妇幼保健院确诊的学龄前ADHD儿童200例,对照组来自同期同医院或幼儿园体检的儿童200例,记录注意力时间,并使用中文版SNAP-Ⅳ评定量表父母版(Chinese Version of Swanson Nolan and Pelham,VersionⅣScale-Parent Form)评估症状。以临床诊断为金标准,应用决策树分析法,评估注意力时间联合行为量表筛查ADHD的临床应用价值。结果ADHD组SNAP-Ⅳ条目1、4、7、8、10、11、14、15、16、18、20、21、22的得分高于对照组(P<0.05),注意力时间短于对照组(P<0.05)。将单因素分析2组间差异有统计学意义的变量作为自变量制定决策树模型,该模型预测ADHD的准确率为81%,预测非ADHD的准确率为69%,总体准确率为75%,受试者工作特征曲线下面积为0.816(95%CI:0.774~0.857,P<0.001)。结论基于注意力时间和行为量表建立的学龄前儿童ADHD筛查的决策树模型准确性较高,可用于临床快速进行儿童ADHD初筛,促进开展全人口ADHD筛查与管理。     

反复呼吸道感染儿童细胞免疫与体液免疫状况

目的探讨反复呼吸道感染（RRI）患儿细胞与体液免疫状况,为临床进行免疫治疗提供依据。方法用流式细胞仪对23例RRI患儿进行外周血淋巴细胞亚群检测;同时进行免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及补体C3、C4水平检测。结果与健康人群比较,RRI患儿血清IgG及IgA各有1例降低,血清IgM降低7例;补体C3降低3例,C4降低1例。RRI患儿外周血CD8较健康对照组明显增高（P=0）,CD4/CD8较健康对照组明显降低（P=0.002）。结论RRI患儿存在体液免疫功能降低,细胞免疫功能失调亦非常显著。     

流式细胞术建立甘肃地区学龄前汉族儿童外周血淋巴细胞亚群相对计数的正常参考值范围

目的 建立甘肃地区学龄前汉族儿童外周血淋巴细胞亚群相对计数的正常参考值范围。方法 纳入2018年1月31日至2019年1月30日在甘肃省妇幼保健院(我院)行鞘膜积液、疝、血管瘤等手术或常规体检的0~7岁汉族健康儿童,排除患心脑血管疾病、血常规或肝肾功能异常、行淋巴细胞亚群检测前3周内存在感染、有先天性免疫缺陷疾病者。分为新生儿组、婴儿组、幼儿组和学龄前组。均采集静脉血2 mL(EDTA抗凝),于24 h内用四色荧光标记流式细胞术完成淋巴细胞亚群检测,以(P_2.5,P_97.5)作为各指标的正常参考值范围。结果 ①共792名儿童进入本文分析,男472名,女320名,新生儿组174名、婴儿组216名、幼儿组170名、学龄前组232名。②不同性别之间比较,新生儿组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞、NK细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺比值差异有统计学意义,婴儿组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺比值差异有统计学意义,学龄前组T细胞、CD4⁺T细胞、B细胞、NK细胞百分比差异有统计学意义。③男、女各年龄组组间整体比较,淋巴细胞亚群百分比差异均有统计学意义。T细胞、CD4⁺T细胞百分比随年龄增长呈降低趋势,男女童降低趋势相近;CD8⁺T细胞百分比随年龄增长呈升高趋势,女童增高趋势更明显;B细胞百分比在1岁前呈上升趋势,后呈降低趋势,女童的变化趋势较为缓和;NK细胞的变化与B细胞相反,在1岁内降低,而后升高,男童变化趋势更明显。结论 健康儿童淋巴细胞亚群的分布与地域、年龄段和性别有关。     

肺移植治疗儿童囊性纤维化1例北大核心CSCD

对首都医科大学附属北京儿童医院呼吸科2018年6月收治的1例囊性纤维化接受肺移植手术患儿资料进行回顾性分析。患儿,女,10岁,间断咳嗽、咯黄痰4年余,杵状指阳性,肺部高分辨CT(HRCT)提示支气管扩张和黏液嵌塞,鼻窦HRCT提示鼻窦炎。患儿囊性纤维化跨膜调节因子(CFTR)基因复合杂合突变,汗液试验阳性,免疫球蛋白E(IgE)和嗜酸性粒细胞增高,烟曲霉特异性IgE阳性。诊断囊性纤维化、变应性支气管肺曲霉菌病、鼻窦炎,予抗感染、糖皮质激素及对症治疗,之后21个月内反复出现呼吸困难、呼吸衰竭,肺功能进行性下降,于2020年3月接受双肺移植手术,目前术后1年3个月余,恢复良好。     

重庆地区儿童血清偏肺病毒中和活性的研究

目的初步分析重庆地区0～6岁儿童血清人偏肺病毒（hMPV）中和活性及与hMPVILsG抗体水平的关系,为进一步大样本的血清流行病学研究奠定基础。方法0～3岁儿童血清来自因外科疾患住院的儿童,3～6岁儿童血清来自托幼儿童体检血清。采用微量中和实验检测上述血清中hMPV中和活性,分析血清中和活性水平及其与hMPVIgG抗体水平的相关性。结果在抽取的50份血清标本中,此前通过间接酶联免疫吸附试验检测为阴性的8份标本均未显示中和活性,而42份hMPVIgG抗体阳性血清标本中和活性均显阳性,平均中和滴度为1：129。其中0—5个月组中和滴度均值1：160,6～11、12～23、24～35个月和3～6岁组中和滴度均值分别为1：58．9、1：114．9、1：172．8、1：160。血清中抗hMPVIgG水平和中和活性具有显著相关性,r=0．668,但hMPVIgG水平与中和活性并不平行。结论0—6岁儿童血清中多具hMPV中和活性,但其是否足以预防不同亚型hMPV感染尚待进一步研究。