活细胞硫化氢检测新方法

目的:建立测定活细胞释放微量硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的简易方法。方法:在细胞培养板盖上方黏附滤膜,细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌,采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量。应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量。结果:HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后,继续培养12 h,H2S释放量为(859.39±19.12)nmol/(min.106cells);给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)后,H2S产率下降到(341.34±105.90)nmol/(min.106cells);胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后,H2S产率下降到(375.05±174.50)nmol/(min.106cells);两种酶抑制剂联合使用后H2S释放量显著抑制,为(204.47±97.14)nmol/(min.106cells)。人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H2S,HUVEC细胞H2S的释放量为(26.23±3.24)nmol/(min.106cells),约为HepG2细胞产量的1/30。台盼蓝检测细胞活性大于95%,细胞生长状态良好,表明该方法无细胞毒作用,细胞可根据实验需要继续培养。结论:滤膜吸附法简便易行、实用可靠,可应用于活细胞释放硫化氢的测定。     

内源性硫化氢在糖尿病大鼠肾脏的变化及作用

新型内源性气体信号分子-硫化氢(内源性H₂S)具有类似氧化亚氮(nitric oxide,NO)的某些特征,如松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增生、调节血管平滑肌细胞张力等作用.本系列研究观察了糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠肾脏内源性H₂S的变化以及与H₂S合成酶-半胱氨酸胱硫醚2β2合成酶(cystathionine 2β2 synthase, CBS)、胱硫醚2γ2裂解酶(cystathionine 2γ2 lyase, CSE)的关系,对DN大鼠肾脏病理改变的影响,对成肌纤维细胞特征性标志物-a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, α-SMA)和细胞外基质成分-纤维粘连蛋白(fibronectin, FN)在大鼠肾组织分布和表达的影响,来探讨内源性H₂S在糖尿病肾病发病机制中的作用.结果显示:1DN大鼠内源性H₂S量明显减少,肾脏CSE的表达亦明显减少.2内源性H₂S的减少与DN大鼠临床表现和肾脏病理改变密切相关.3DN组大鼠肾组织中α-SMA 和肾小球基质中FN均增加,分布增多,补充外源性H₂S后,α-SMA和 FN明显下降.DN大鼠肾脏内源性H₂S降低.肾脏CSE的减少可能是导致DN大鼠肾脏内源性H₂S降低的直接因素.外源性补充H₂S可抑制糖尿病肾病大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成和细胞外基质的过度积聚.提示,内源性H₂S的减少与糖尿病肾病的发生有关.     

硫化氢及其合成酶在膀胱癌细胞株中的表达及其作用

目的：探讨正常膀胱和膀胱癌细胞株中硫化氢（H₂S）及其合成酶胱硫醚β合成酶（CBS）和胱硫醚γ裂解酶（CSE）的表达,阐明其在膀胱癌发生发展中的作用。方法：选取膀胱癌5637、T24、EJ、UM-UC-3细胞株和人膀胱永生化上皮SV-HUC-1细胞株,Western blotting检测CBS和CSE蛋白酶表达水平,敏感硫电极法检测H₂S产率;选取EJ细胞株进行药物处理,实验分组为,① 10 μmol·L^-1硫酸氢钠（NaHS）组、50 μmol·L^-1NaHS组、100 μmol·L^-1NaHS组和对照组,MTT法检测24和48 h细胞生存率;②顺铂组（5 μg·L^-1）、顺铂（5 μg·L^-1）+NaHS（100 μmol·L^-1）组,另设无药物处理为对照组,药物处理48 h,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性和凋亡率。结果：与SV-HUC-1细胞株比较,膀胱癌5637、T24、EJ和UM-UC-3细胞中CBS和CSE表达及H₂S产率均明显增加（P<0.05或P<0.01）;外源性H₂S可促进EJ细胞增殖,细胞增殖活性随药物剂量增加而升高（P<0.05）,且随着药物作用时间的延长而增加（P<0.05）。与顺铂组比较,顺铂联合NaHS组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。结论：H₂S及其合成酶CBS和CSE在膀胱癌细胞株中有表达且高于膀胱正常上皮细胞,H₂S促进膀胱癌细胞增殖并降低顺铂的促细胞凋亡作用。     

糖尿病大鼠阴茎海绵体硫化氢含量及其合成酶表达的变化

目的 观察糖尿病大鼠及非糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中硫化氢(H₂S)含量及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表达的差异。 方法 将Wistar大鼠随机平均分为两组,一组高脂饲料喂养8周后,注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型(糖尿病组),另一组普通饲料喂养(对照组)。继续喂养12周后分离两组大鼠海绵体组织,检测海绵体组织内源性H₂S的生成;采用RT- PCR法检测两组海绵体组织中CSE mRNA的表达;采用Western blotting法检测两组CSE蛋白的表达。 结果 糖尿病组内源性H₂S浓度较对照组显著降低(P<0.01);糖尿病组海绵体组织中CSE mRNA和CSE蛋白的表达量均较对照组显著降低(P<0.01)。 结论 糖尿病大鼠阴茎海绵体H₂S含量显著降低,其机制可能与CSE mRNA及蛋白水平表达减少有关。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌组织中MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达及心肌纤维化的影响及其机制

目的:观察气体信号分子硫化氢(H₂S) 对糖尿病(DM)大鼠心肌纤维化和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)蛋白表达的影响,探讨其在心肌纤维化发生发展中的作用和相关机制。方法:52只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、糖尿病模型组(DM组)、硫化氢干预糖尿病组(DM+H₂S组)和硫化氢干预正常组(H₂S组),每组13只。以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DM大鼠模型,模型构建成功后对照组(n=12)和DM组(n=9)大鼠每天腹腔注射生理盐水;DM+H₂S组(n=9)和H₂S组(n=10)大鼠每天腹腔注射100 μmol·kg^-1硫氢化钠溶液,8周后处死大鼠取左心室心肌组织,VG染色观察大鼠心肌组织形态学;Western blotting法检测大鼠心肌组织中Ⅲ型胶原、MT1-MMP和TIMP-2蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,DM组大鼠心肌细胞排列紊乱,胶原沉积增多,心肌存在明显心肌纤维化,心肌组织中Ⅲ型胶原蛋白、MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,DM+H₂S组大鼠心肌纤维化有所改善,心肌组织中Ⅲ型胶原蛋白、MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:H₂S可改善DM大鼠的心肌纤维化并下调Ⅲ型胶原蛋白的表达,其机制可能与其下调MT1-MMP蛋白表达以及改善MT1-MMP/TIMP-2蛋白失衡有关。     

硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠炎症因子及内毒素血症的影响

目的 研究硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠血C反应蛋白、降钙素原、内毒素、肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-8的影响。 方法 将64只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(缺血-再灌注)组,C(缺血-再灌注+NaHS)组,D[缺血-再灌注+炔丙基甘氨酸(PPG)]组。经腹正中切口剖腹及游离肠系膜上动脉(SMA),钳夹B、C、D组大鼠SMA 60 min和再灌注120 min,建立大鼠肠缺血-再灌注损伤模型。C组在灌注前10 min向大鼠尾静脉注入100 μmol/kg NaHS后按1 mg/(kg·h)输注直到再灌注2 h,D组在缺血前10 min向腹腔注入PPG 50 mg/kg。检测血CRP、降钙素原、内毒素、H₂S、TNF-α、IL-6、IL-8并进行血培养,测定回肠组织匀浆中H₂S。 结果 与A组比较,B组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H₂S降低。与B组比较,C组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8降低,H₂S升高。与C组比较,D组CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H₂S降低(P<0.01)。B、C、D组分别有14、6、15例血标本培养出大肠杆菌。H₂S与CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8呈负相关。 结论 H₂S降低肠缺血-再灌注损伤大鼠血炎症因子,改善内毒素血症。      

两种剂量野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压模型肺组织病理变化比较

目的: 建立野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压动物模型,观察肺组织的病理变化,并比较50和60 mg·kg-1MCT两种剂量诱导不同变化。方法: 70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（n=10）、50 mg·kg^-1MCT组（n=30)、60 mg·kg^-1MCT组(n=30)。腹腔注射MCT（对照组注射等量生理盐水）,在2周及4周后检测右心室收缩压(RVSP)、RV/(LV+S)重量比值,肺组织苏木素-伊红染色和地衣红染色,观察肺组织的病理改变、肺小动脉中膜厚度百分比。50 mg·kg^-1组和60 mg·kg^-1组各10只记录大鼠自然死亡天数。结果:大鼠经过MCT诱导后,50 mg·kg^-1组2周和4周时与对照组比较：RVSP增高［(36.6±5.1)mmHg,(39.1±7.0)mmHg 和 (26.1±3.8)mmHg,P<0.01］;RV/(LV+VS)重量比增加［(0.289　4±0.021　7),(0.409　4±0.125　6)和(0.247　3±0.019　3),P<0.01］。60 mg·kg^-1组2周和4周时与对照组比较:RVSP升高［(33.8±5.5)mmHg,(46.6±12.6)mmHg和(26.1±3.8)mmHg,P<0.01］;RV/(LV+VS)重量比增加［(0.308 2±0.058 4),(0.417 5±0.103 7)和(0.247 3±0.019 3),P<0.01］,但两个剂量组之间在2周和4周时比较均无显著性差异。4周时50 mg·kg^-1和60 mg·kg^-1MCT组肺小动脉中膜增厚,厚度百分比分别为（21.3±1.9）%和（23.4±2.3）%,高于对照组的（11.3±1.2）%(P<0.01)。60 mg·kg^-1MCT组大鼠47 d死亡50％,63 d全部死亡;而50 mg·kg^-1诱导后47 d未见死亡,63 d死亡30%。结论: 50和60 mg·kg^-1野百合碱均可诱导建立肺动脉高压模型,病理变化未见明显不同,但前者较后者有较长的生存期。     

基于中性粒细胞外诱捕网探讨硫化氢对脓毒症心肌病的影响及作用机制

目的：基于中性粒细胞外诱捕网探讨硫化氢(H₂S)对脓毒症心肌病的影响及作用机制。方法：采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症心肌病模型，将48只SPF级CLP大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组(模型组)、H₂S给药(NaHS,内源性H₂S供体)组、H₂S抑制剂(PAG,内源性抑制H₂S剂)组。造模完成后，给药组大鼠通过腹腔注射给药，模型组和假手术组大鼠予以注射等剂量的生理盐水，24h后检测各组大鼠H₂S水平，心肌酶指标及病理改变、心肌炎症因子水平、中性粒细胞外诱捕网形成相关因子GSDMD、MPO、CitH3。结果：与假手术组相比，模型组大鼠H₂S水平明显降低，心肌损伤更显著，予以腹腔注射硫氢化钠后，相较于模型组，H₂S给药组大鼠血清H₂S水平增加，且中性粒细胞外诱捕网相关蛋白GSDMD、MPO、CitH3表达减少，炎症因子水平降低，以上改变可被H₂S抑制剂逆转。结论：外...     

人参皂苷对过氧化氢诱导的HepG2细胞损伤的保护作用

目的：探讨人参皂苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：体外培养HepG2细胞,采用不同浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8和1.0 mmol·L^-1）H₂O₂诱导HepG2细胞损伤。将HepG2细胞分为空白组、对照组、损伤组、人参皂苷对照组和人参皂苷保护组。10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE分别孵育细胞3 h,H₂O₂损伤2 h,采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率,CAA法检测细胞抗氧化活性,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针法检测细胞中活性氧（ROS）水平,WST-1法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：H₂O₂半数抑制浓度（IC₅₀）为0.4 mmol·L^-1。与损伤组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE预处理后,H₂O₂诱导氧化损伤的HepG2细胞存活率均有不同程度的升高,其中人参皂苷F1保护组细胞存活率升高最明显（P<0.05）。与对照组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE保护组HepG2细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。人参皂苷F1的半数效应浓度（EC₅₀）为（15.82±0.82）μmol·L^-1,CAA当量为（1 275.20±33.90）μmol TE/100 μmol·L^-1人参皂苷F1。与对照组比较,损伤组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）;与损伤组比较,人参皂苷F1保护组细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）。结论：人参皂苷F1通过提高细胞抗氧化能力,降低细胞中ROS水平,提高细胞SOD活性对H₂O₂诱导的HepG2细胞氧化应激损伤起到保护作用。     

卵巢癌患者血清人激肽释放酶10的检测及其临床意义

目的：检测卵巢癌患者及其对照组血清人激肽释放酶10(hk10)水平,探讨血清hk10在卵巢癌诊断中的临床意义。方法：ELISA 法检测卵巢癌组(n=50)、卵巢良性肿瘤组(n=20)、妇科良性疾病组(CA125增高,n=26)、妇科其他癌症组(n=18)患者及健康对照组(n=36)血清hk10 水平。结果：卵巢癌组hk10 水平为(15.6±9.23) μg.L^-1,阳性率为88.89%;卵巢良性肿瘤组hk10 水平和阳性率分别为(6.60±2.65) μg.L^-1和10.00%;CA125值增高的妇科良性疾病组血清hk10水平和阳性率分别为(6.92±2.97) μg?L-1和15.38%;妇科其他癌症组hk10 水平和阳性率分别为(6.11±2.42) μg.L^-1和11.11%;对照组hk10 水平为(6.00±2.26) μg.L^-1,阳性率为11.11%;卵巢癌组血清hk10水平和阳性率均显著高于其他各组(P<0.01)。Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌组血清hk10水平和阳性率分别为(18.29±9.74) μg.L^-1和94.44%,显著高于Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌组的(9.87±4.04) μg.L^-1和75.00%(P<0.01)。卵巢癌组术后血清hk10水平为(13.83±1.56) μg.L^-1,低于术前的hk10水平。 结论：卵巢癌组血清hk10水平显著增高,特异性优于CA125,其有望成为卵巢癌新的肿瘤标志物。     

三羟基二苯乙烯及其对肺动脉平滑肌细胞生长抑制和致凋亡作用的研究

目的: 以虎杖为原料提取的白藜芦醇(Res),再经甲基化反应合成的3,5,4'-三羟基二苯乙烯(3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS),对TMS进行结构鉴定和药代动力学测定。检测TMS对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的生长抑制和致凋亡作用。方法: 用紫外吸收光谱、红外吸收光谱、¹H-NMR谱、¹³C-NMR 图谱、质谱检测等方法对TMS进行结构鉴定。测定大鼠口服TMS后的生物利用度,肠道吸收特点,体内组织分布和体内排泄。测定TMS对小鼠的急性毒性。利用大鼠肺动脉制备PASMCs。将细胞分为8组。A组(空白对照组):不加TNF-α,TMS,Res;B组(TNF-α组):100 pg/mL TNF-α;C~E组(低~高浓度TMS组):TNF-α (100 pg/mL) +TMS (5,10,20 μmol/L);F~H组(低~高浓度Res组):TNF-α (100 pg/mL)+ Res (50,100,200 μmol/L)。MTT法测定TMS对PASMCs增殖的影响。流式Annexin V/PI法测定TMS对PASMCs凋亡的影响。结果: TMS的紫外吸收图谱为λ_max(MeOH):318, 306.2, 217.8 nm;红外光谱解析为IRν_max^KBr/cm:2999,2935,2836,1591,1511,1456/cm;¹H-NMR谱解析显示结构含有3个羟基; ¹³C-NMR图谱解析为17个碳信号,并且其结构中含有对称的结构片段。质谱图谱解析为ESI-MS m/z:271[M+H]⁺,256[M+H-CH₃]⁺,241[256-CH₃]⁺,相对分子质量为270,推测分子式为C₁₇H₁₈O₃,结构中含有甲基。样品元素分析得分子结构式可用C₁₇H₁₈O₃表示,因此可确定化合物为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS绝对生物利用度为45.4%,在小肠上段有较好吸收,通过粪便、胆汁排泄,在各组织中均有分布,最大耐受量(MTD)约5.85 g/kg。TMS干预PASMCs 24 h后经MTT法测定显示对其生长具有显著的抑制作用,其强度呈剂量依赖性改变。A~H组的生长抑制率分别为(4.07±2.12)%,(6.54±4.78)%,(9.35±4.26)%,(16.75±5.34)%, (23.74±7.07)%,(6.78±5.58)%,(8.81±5.16)%,(17.81±6.03)%。流式Annexin V/PI法检测结果显示:TMS干预PASMCs 24 h组细胞凋亡率显著高于TNF-α干预组,且其作用呈剂量依赖性。A~H组的细胞凋亡率分别为(2.63±0.74)%,(3.54±0.81)%,(5.77±4.62)%,(11.68±5.35)%,(18.79±4.15)%,(4.11±3.59)%,(6.33±4.8)%,(12.47±5.06)%。结论: TMS的分子式可用C₁₇H₁₈O₃表示,结构式为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS的生物利用度为45%。TMS呈剂量依赖性地抑制PASMCs的增殖并诱导其凋亡。     

早产与足月兔动脉导管中CSE/H_2S体系的研究

目的探讨胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)基因在早产与足月兔动脉导管中表达有何异同,进一步揭示硫化氢(H2S)对动脉导管作用。方法取孕26 d日本大耳白兔(早产兔模型)3只及孕30d日本大耳白兔(足月兔模型)3只。解剖孕兔取胎兔,胎兔心脏取血1mL后立即解剖胎兔取动脉导管组织。用去蛋白方法测定胎兔血浆硫化氢含量,用实时荧光定量RT-PCR测定动脉导管组织中胱硫醚-γ-裂解酶基因表达。结果足月兔血浆中硫化氢含量(42.35±4.5)μmol/L及动脉导管组织胱硫醚-γ-裂解酶基因表达量为(0.48±0.07),早产兔血浆中硫化氢含量为(58.67±6.7)μmol/L及动脉导管组织胱硫醚-γ-裂解酶基因表达量为(1.07±0.12)。结论早产兔血浆中硫化氢含量及动脉导管组织中胱硫醚-γ-裂解酶基因表达均高于足月兔。     

CD4+/CD8+、Th17/Treg与老年慢性阻塞性肺疾病患者病情及近期预后的相关性

目的 探讨CD4⁺/CD8⁺、辅助性T细胞17(helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T,Treg)检测在老年慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者病情及预后评估中的价值。方法 选择老年COPD患者288例(COPD组)和老年健康体检者70例(对照组)。比较COPD组和对照组CD4⁺、CD8⁺、Th17、Treg、CD4⁺/CD8⁺、Th17/Treg,比较COPD组不同病情患者CD4⁺、CD8⁺、Th17、Treg、CD4⁺/CD8⁺、Th17/Treg; COPD组患者随访6个月,比较不同预后患者临床资料。多因素Logistic回归分析老年COPD近期不良预后的影响因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteris...     

雷帕霉素促进哮喘调节性T细胞分化及功能的机制

目的：探讨雷帕霉素对哮喘调节性T细胞体外分化的作用及机制。方法：采用卵蛋白致敏、激发制备哮喘模型。采用超高速流式细胞分选仪收集哮喘小鼠和正常小鼠的脾CD4⁺CD25^– ?T细胞,进一步分为三组,其中模型对照组予转化生长因子β（TGF-β）、白介素（IL）-2,雷帕霉素组予TGF-β、IL-2的同时用雷帕霉素（终浓度为500?nmol/L）干预。采用流式细胞仪检测调节性T细胞水平和CD4⁺CD25^– ?T细胞增殖情况;采用蛋白质印迹法测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体（mTORC）1/2通路相关蛋白S6、Akt磷酸化水平。结果：与模型对照组比较,雷帕霉素组调节性T细胞比例增加,CD4⁺CD25^– ?T细胞增殖水平降低,mTORC1/2信号通路下游S6、Akt磷酸化水平降低（均P<0.05）。结论：雷帕霉素可促进调节性T细胞的分化及功能,其在一定程度上与抑制mTORC1/2信号通路相关。     

冠心病患者血浆中新型气体信号分子硫化氢的变化

目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(H₂S)在冠心病患者血浆中含量的差异及其病理生理意义。方法 采用硫敏感电极法测定40例冠心病患者及17例造影正常者血浆H₂S含量,并在冠心病患者分析不同临床亚型及不同冠脉病变类型血浆H₂S含量的差异、血浆H₂S含量与冠心病危险因素的关系。结果 (1)冠心病患者血浆H₂S含量[(26.10±14.27)μmol/L]远低于冠脉造影正常对照组[(51.74±11.94)μmol/L,P<0.01];(2)在冠心病患者中,不稳定型心绞痛患者血浆H₂S含量[(23.60±14.41)μmol/L]和急性心肌梗死患者血浆H₂S含量[(19.98±7.516)μmol/L],明显低于稳定型心绞痛患者[(38.41±14.53)μmol/L,P<0.05]。(3)冠脉双支和多支病变组血浆H₂S含量分别为(16.91±7.98)μmol/L、(18.39±7.78)μmol/L,两组间无明显差异(P>0.05),但均明显低于单支病变组(33.04±15.01)μmol/L(P<0.05和P<0.01)。冠脉血管有闭塞的其血浆H₂S含量明显低于单纯狭窄组[(19.04±9.55)μmol/Lvs(28.24±14.85)μmol/L,P<0.05]。(4)在冠心病患者中,吸烟者血浆H₂S含量明显低于不吸烟者[(27.54±10.37)μmol/Lvs(32.24±15.77)μmol/LP<0.05],高血压病者含量明显低于无高血压病者[(20.36±8.69)μmol/Lvs(33.77±15.86)μmol/L P<0.01];血浆H₂S水平与血糖水平呈强负相关(r=-0.4936 P=0.0016),与性别、年龄、胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、体质量指数等无明显相关性。结论 血浆中H₂S含量降低可能与冠心病临床病情严重性及冠脉血管病变程度相关;血浆H₂S含量的减少可能与冠心病危险因素吸烟、高血压、高血糖相关。     

调节肠道菌群代谢产物TMAO/H2S促进卒中后抑郁大鼠血脑屏障和神经功能恢复

目的 研究肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(TMAO)/硫化氢(H₂S)对卒中后抑郁(PSD)大鼠血脑屏障、神经功能的作用。方法 SD大鼠分成对照组、中动脉栓塞(MCAO)组、PSD组、粪便移植组、抗生素(利福昔明)组、益生菌组和氟西汀组,对大鼠进行神经功能评分,检测大鼠的糖水偏好度和强迫游泳静止不动时间;采用ELISA法检测大鼠血浆中TMAO、H₂S水平;采用Western-blot实验检测大鼠脑组织中闭锁蛋白(Occludin)、封闭蛋白5(claudin 5)、免疫球蛋白G(IgG)等蛋白的表达。结果 与对照组比较,MCAO组、PSD组大鼠的神经功能评分升高,强迫游泳静止不动时间增加,TMAO水平升高,H₂S水平降低,TMAO/H₂S比值升高(P<0.05);PSD组大鼠糖水偏好度降低,差别有统计学意义(P<0.05)。与MCAO组比较,PSD组大鼠神经功能评分升高,强迫游泳静止不动时间增加,糖水偏好度降低,TMAO水升高,H₂S水平降低,TMAO/H_2<...     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

没食子酸对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤保护作用的研究

目的：以H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤为模型,探讨没食子酸对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其机制。方法：筛选没食子酸(gallic acid,GA)对SH-SY5Y细胞无毒剂量范围,以此剂量范围研究没食子酸对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。将细胞分为5组:正常对照组(Control),H₂O₂模型组(Model),GA 5µmol•L^-1组(GA1)、GA 10µmol•L^-1组(GA2) 和GA25µmol•L^-1组(GA3)。GA组先加入GA预处理1 h后再加入终浓度为200 µmol•L^-1 H₂O₂。Hoechst 33258 染色观察凋亡细胞的形态学特征;碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞周期构成比;diaphorase催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放量;DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS);利用天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)可以催化底物Ac-DEVD-pNA的反应检测caspase-3活性。结果：过氧化氢组与正常对照组相比,终浓度为200 μmol•L^-1 H₂O₂作用于细胞24 h后,细胞活力下降为65%,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01);明显出现了细胞凋亡的形态学特征;增殖指数(proliferation index, PI)降低(P<0.05); LDH释放量和细胞内ROS增加(P<0.01),caspase-3活性增强(P<0.01)。与H₂O₂损伤组相比,终浓度为5～25 µmol•L^-1 GA能显著改善上述指标的变化(P<0.05)。结论：GA在一定剂量范围内对H₂O₂诱导的 SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。     

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34+细胞

目的 探讨小剂量粒单巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血干细胞的效率。方法 20例成人恶性血液病按统计学配对方法等分为2组。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)患者化疗方案为环磷酰胺2.0 g/d,静脉滴注,第1~2天,足叶乙甙0.2 g/d,静脉滴注,第1~3天;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者用阿糖胞苷2.0 g/d,静脉滴注,第1~3天,足叶乙甙用法同NHL。当白细胞低于1.0×10⁹/L时研究组10例应用GM-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.联合G-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.;对照组单用G-CSF 5 μg/d·kg·b.w.,全部皮下注射5~6 d。白细胞5.0×10⁹/L以上时应用CS-3000 pluse分离外周血单个核细胞,流式细胞术计数CD34⁺细胞。结果 产品细胞分类计数单个核细胞占95%~99%,在研究组CD34⁺细胞平均采集9.4(8.4~10.2)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 42.4(21.9~72.8)×10⁴/kg·b.w.,对照组平均采集CD34⁺细胞4.8(4.1~8.3)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 28.1(7.1~60.2)×10⁴/kg·b.w.,2组差异显著(P<0.05)。副作用2组相似。结论 恶性血液病患者化疗后应用G-CSF联合GM-CSF动员CD34⁺细胞的效果优于单用G-CSF。     

溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞T型钙离子通道的调控

目的：通过研究溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine,LPC）对心肌细胞T型钙离子通道电流（I _Ca.T）的影响,探讨在缺血心肌细胞胞内和/或细胞间隙中LPC的增加引起心动过速或心律失常的潜在机制。方法：以酶消化法制备1~3 d新生Wistar大鼠心室肌细胞（共5批,每批8只）及成年Wistar大鼠的肥大心室肌细胞（实验组和同批次周龄的对照组各10只）。人类心脏T型钙通道α1亚基的α1H(CaV3.1)和α1G(CaV3.2)在HEK293细胞中稳定表达,利用全细胞膜片钳技术测定大鼠心肌细胞和异源表达的人类心肌CaV3.1和CaV3.2离子通道组分,进而研究LPC调控I _Ca.T的机制。结果：LPC显著促进新生鼠心肌细胞自律性,在生理条件下的细胞内Ca ²⁺浓度,LPC处理后心肌细胞搏动从（42±8）次/分增至（64±8）次/分。新生鼠心肌细胞和成年鼠肥大心室肌细胞经LPC处理后,细胞内Ca ²⁺浓度较高时,ICa.T分别增加了21.5%和23.5%;而当细胞内Ca ²⁺浓度较低时,I _Ca.T均无变化,对照组(3.8±0.2) pA/pF,LPC组(3.7±0.4) pA/pF。因此,LPC引起的细胞内Ca ²⁺浓度依赖的I _Ca.T增大,在新生鼠心肌细胞和成年鼠肥大心室肌细胞中都得到了证实。无论细胞内Ca ²⁺浓度高低,LPC对I _CaV3.1均无显著影响［(37.3±2.5) pA/pF～(39.5±3.1) pA/pF］;但LPC可调控I _CaV3.2,且细胞内Ca ²⁺浓度高时的电流明显大于细胞内Ca ²⁺浓度低时的电流［当pCa=11时电流为(38.5±2.1) pA/pF;当pCa=7且LPC=10 μmol/L时电流为(68.8±2.1) pA/pF;当pCa=7且LPC=50 μmol/L时电流为(78.4±4.8) pA/pF］。结论：LPC在细胞内Ca ²⁺生理浓度条件下或更高浓度条件下主要通过调控Ca_V3.2上调I _Ca.T,并增加病理生理条件下心脏自律性。