新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定

目的 分离新生猪肾小管上皮细胞进行体外培养，为研究围生期肾小管上皮细胞生物学行为特征提供理论基础。方法 采用机械分散结合V型胶(0.5g/L)消化的方法纯化肾小管片段，选择含10%的FCS低糖DMEM培养基，置于5%CO2，37℃孵箱培养，0.25%胰蛋白酶用于肾小管上皮细胞纯化和传代培养。应用细胞形态学（光镜和电镜）、免疫细胞化学（Panck和CK18单抗）和酶组织化学（酸性磷酸酶和碱性磷酸酶）方法进行肾近曲管上皮细胞鉴定，用流式细胞术做细胞纯度鉴定。结果 出生12-24小时的新生猪肾小球直径为50-70μm，出生5-6天的肾小球直径为70-98μm，新生猪肾近曲小管上皮细胞体外培养对葡萄糖的需求量不高。培养成功并传6-8代，肾小管上皮细胞纯度达95-98%。综合形态学、免疫细胞化学和酶组织化学结果，支持细胞来源于肾单位的近曲小管。结论 采用机械分散-酶消化纯化肾小管，0.25%胰蛋白酶纯化肾小管上皮细胞及低糖DMEM培养新生猪肾近曲不管的方法是可行的。     

SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

目的:建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法:选用4周龄SD幼鼠的肾皮质进行细胞培养,采用机械研磨、胰酶消化、过滤,Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代培养及传代。制作细胞爬片,用免疫细胞化学(Cytokeratin 18表达阳性)进行鉴定。结果:肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周生长,4~5 d后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。结合形态学及免疫细胞化学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肾小管上皮细胞。结论:采用此方法分离培养的肾小管上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性操作良好。     

人羊膜上皮细胞的分离、纯化及其生物学特性研究

目的 体外分离人羊膜上皮细胞并纯化,对体外培养的人羊膜上皮细胞的生物学特性进行相关研究.方法 取足月剖宫产的人羊膜组织,经胰蛋白酶、胶原酶和Dnase酶消化后,采用差异黏附法获得纯度高的羊膜上皮细胞,接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行原代和传代培养,用HE染色法对培养细胞进行形态学观察,并采用免疫组化法检测细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在体外培养的人羊膜上皮细胞中的表达.结果 经不同的消化酶消化和差异黏附法筛选后能获得纯度较高的人羊膜上皮细胞,在体外培养条件下人羊膜上皮细胞呈上皮细胞特有的铺路石样外观,并能连续传代8～10次,细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在其胞浆中呈阳性表达.结论 人羊膜上皮细胞能在体外成功分离、纯化、培养并增殖,为人羊膜上皮细胞的进一步研究及其在细胞移植和组织工程中的应用奠定了实验基础.     

微分离方法原代培养大鼠肾近曲小管上皮细胞

目的建立比较理想的大鼠肾近曲小管上皮细胞的原代培养及鉴定方法。方法采用显微微分离单根肾近曲小管节段的方法进行原代培养,并用免疫细胞化学方法和电镜进行鉴定。结果用微分离方法成功地培养出肾小管上皮细胞,经鉴定为该细胞。结论微分离方法是大鼠肾近曲小管上皮细胞原代培养的有效方法。     

人羊膜上皮细胞的分离、纯化和其生物学特性研究

目的 体外分离人羊膜上皮细胞并纯化,对体外培养的人羊膜上皮细胞的生物学特性进行相关研究。方法 取足月剖宫产的人羊膜组织,经胰蛋白酶、胶原酶和Dnase酶消化后,采用差异黏附法获得纯度高的羊膜上皮细胞,接种于含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行原代和传代培养,用HE染色法对培养细胞进行形态学观察,并采用免疫组化法检测细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在体外培养的人羊膜上皮细胞中的表达。结果 经不同的消化酶消化和差异黏附法筛选后能获得纯度较高的人羊膜上皮细胞,在体外培养条件下人羊膜上皮细胞呈上皮细胞特有的铺路石样外观,并能连续传代8-10次,细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在其胞浆中呈阳性表达。结论 人羊膜上皮细胞能在体外成功分离、纯化、培养并增殖,为人羊膜上皮细胞的进一步研究及其在细胞移植和组织工程中的应用奠定了实验基础。     

肿瘤坏死因子在人膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF -α)在人膜增生性肾小球肾炎发病中的作用。方法 :采用病理组织学及免疫组织化学SABC法对 2 0例人膜增生性肾小球肾炎进行染色观察。结果 :TNF -α蛋白在肾组织内表达增加 ,阳性反应见于肾小管上皮细胞和肾小球内 ,以肾近曲小管上皮细胞阳性最明显 ,与正常组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,肾小球内呈程度不等的弱阳性 ,但与正常组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,远曲小管阳性反应不明显。结论 :TNF -α在肾小管内表达增强可能在肾脏纤维化及硬化中起重要的介导作用     

肿瘤坏死因子在人膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)在人膜增生性肾小球肾炎发病中的作用.方法采用病理组织学及免疫组织化学SABC法对20例人膜增生性肾小球肾炎进行染色观察.结果TNF-α蛋白在肾组织内表达增加,阳性反应见于肾小管上皮细胞和肾小球内,以肾近曲小管上皮细胞阳性最明显,与正常组相比有显著性差异(P＜0.01),肾小球内呈程度不等的弱阳性,但与正常组相比无显著性差异(P＞0.05),远曲小管阳性反应不明显.结论TNF-α在肾小管内表达增强可能在肾脏纤维化及硬化中起重要的介导作用.     

一氧化氮在顺铂耳、肾毒性中的作用

目的:探讨一氧化氮在顺铂的耳毒性、肾毒性机制中的作用。方法:应用免疫组织化学的方法研究顺铂中毒对诱导型一氧化氮合酶活性的影响。结果:正常对照组豚鼠的耳蜗螺旋器、肾小球、肾小管的上皮细胞呈免疫组化阴性染色;而实验组的耳蜗螺旋器的内、外毛细胞,肾近曲小管、远曲小管的上皮细胞呈免疫组化阳性染色。结论:一氧化氮可能在顺铂的耳毒性、肾毒性中起重要作用。     

人子宫内膜细胞的分离培养及鉴定方法的探索

目的　体外分离并培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。方法　用酶解、二次滤网过滤、沉降等方法进行分离、纯化及培养 10例正常子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞并传代 ,通过光镜进行形态学观察 ,用免疫细胞化学法进行细胞鉴定。结果　 9例标本获得成功 ,基质细胞纯度可达 95 %以上 ,腺上皮细胞的纯度约为 90 % ,分离出的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞可以在体外进行增殖。结论　采用二次滤网过滤法可以分离得到纯度较高的内膜腺上皮细胞和基质细胞 ,这两种细胞均能在体外成活并传代。     

人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

目的 :建立人肾小管上皮细胞原代培养、传代、冻存及鉴定方法。方法 :采用肾小管节段贴块培养法 (A法 )与消化培养法 (B法 )对比原代培养 ,并以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化、传代 ,以免疫细胞化学方法鉴定细胞种类 ,常规冻存和复苏。结果 :A法成功培养、传代、冻存、复苏并鉴定了人肾小管上皮细胞 ,B法失败。结论 :肾小管节段贴块培养法用于人肾小管上皮细胞原代培养是可行的