红毛五加茎皮抗炎有效成分筛选的初步研究

目的从红毛五加茎皮中提取、分离、筛选抗炎有效成分。方法粉碎红毛五加茎皮,95%乙醇浸渍48h,滤取提取液,合并提取液,减压低温回收溶剂,加水溶解,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。以LPS刺激小鼠巨噬细胞样细胞RAW264.7,加入红毛五加各萃取部分、水相部分共孵育24h,用放射免疫法测定细胞上清液中PGE2的含量,以抑制LPS刺激RAW264.7产生PGE2的作用为指标,逐步对红毛五加提取物进行筛选。结果正丁醇萃取部分的40mg/L以及10mg/L剂量对LPS刺激RAW264.7细胞产生PGE2为(7.26±0.95)pg/mL、(7.43±0.82)pg/mL,与LPS刺激组相比,有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为23.7%、21.6%。萃取水相的40mg/L剂量组对LPS刺激RAW264.7细胞产生PGE2为(7.18±1.46)pg/mL,与LPS刺激组相比,有统计学意义(P<0.05),抑制率为24.7%。而其他萃取部分各剂量组与LPS刺激组相比均无统计学意义(P>0.05)。结论红毛五加抗炎的有效成分主要存在于其经乙醇提取,正丁醇萃取部分。     

红花对活化巨噬细胞产生一氧化氮的影响作用

目的 水提醇沉法对红花进行提取,研究红花提取物对脂多糖(LPS)活化小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的影响作用,同时测定提取物中的总黄酮含量.方法 ATP-Lite法测定红花对RAW264.7细胞毒性的影响,姜黄素为阳性对照.采用Griess法测定由LPS活化RAW264.7细胞产生NO的含量,阿司匹林为阳性对照.以山奈酚为标准品测定红花提取物中总黄酮的含量.结果 姜黄素对RAW264.7的半数致死浓度为(29.9±4.3)μg/ml.红花提取物在低于125μg/ml时,对RAW264.7细胞的致死率低于5％.在12.5～100 μg/ml的浓度范围内,红花表现出对LPS活化RAW264.7细胞产生NO的抑制作用.以山奈酚计,1 g生药红花中含1.14 mg总黄酮.结论 红花对LPS活化巨噬细胞产生NO具有抑制作用,其作用可能与其所含黄酮类成分有关.     

长春碱对RAW264.7细胞增殖和分泌一氧化氮的影响

目的:研究长春碱对RAW264.7细胞增殖和分泌一氧化氮(NO)的影响。方法:采用MTT法检测长春碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术观察长春碱对细胞周期的阻断作用;Western blot法检测细胞中cyclin B1蛋白含量的变化;Griess试剂盒检测长春碱对脂多糖(LPS)刺激的细胞分泌NO的影响。结果:长春碱可抑制RAW264.7细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G2～M期,呈浓度依赖性地降低细胞中cyclin B1的含量,并抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的NO分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:长春碱可能通过抑制RAW264.7细胞表达cyclin B1,使细胞周期停滞于G2～M期,从而抑制了RAW264.7细胞的增殖,影响RAW264.7细胞的生物学行为。     

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L~(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L~(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。     

返魂草多糖中免疫增强活性有效组分的筛选及表征

目的:筛选并表征返魂草多糖组分中具有免疫增强活性的有效组分。方法:通过水提醇沉法提取返魂草浸膏(SCHE)多糖并制得50%醇沉样品(SCHE-1)和80%醇沉样品(SCHE-2)。将小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞分为空白组(不含血清培养基)、阴性对照组(含血清培养基)、脂多糖组(LPS,阳性对照,1μg/m L)以及SCHE-1、SCHE-2低、高剂量(0.5、1 mg/mL)组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测RAW264.7细胞的细胞活性,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测RAW264.7细胞中白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以考察SCHE-1和SCHE-2对RAW264.7细胞的免疫增强活性。采用分子排阻色谱法测定SCHE-1的分子量及其分布;采用高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法测定SCHE-1的单糖组成。采用NaOH法对SCHE-1进行甲基化分析。结果:与阴性对照组比较,LPS组及SCHE-1各剂量组均可显著增强RAW264.7细胞的活性并显著提高细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平(P<0.01),SCHE-1是具有免疫增强活性的有效组分。SCHE-1含中性糖40.05%、糖醛酸35.62%、蛋白质8.89%;SCHE-1为混合物,分子量范围为62～6 119 Da,单糖组成主要为半乳糖醛酸、阿拉伯糖和半乳糖;SCHE-1的中性糖连接方式以半乳糖的1→3、1→4和1→6连接为主,在1→3连接的O-6位上有分支,非还原末端主要为阿拉伯糖。结论:SCHE-1可能是返魂草免疫增强活性的有效组分,其主要由多糖类成分组成;SCHE-1可能通过激活巨噬细胞释放IL-1β、IL-6、TNF-α而发挥调节机体免疫功能的作用。     

红毛五加有效成分的抗炎机制初步研究

目的对红毛五加茎皮中有效成分的抗炎机制进行初步研究。方法以LPS刺激小鼠巨噬细胞样细胞RAW264.7,测定红毛五加萃取物氯仿洗脱部分对细胞上清液PGE2、TNF-α、NO、IL-10水平的影响。结果纯氯仿洗脱部分40mg/L剂量组产生的PGE2为(79.57±12.50)pg/mL,TNF-α为(291.6±40.7)pg/mL,NO为(26.2±2.9)μmol,与LPS刺激组相比,差异均有统计学意义。10mg/L剂量组产生的PGE2为(95.20±11.20)pg/mL,TNF-α为(358.6±37.9)pg/mL,NO为(28.3±3.2)μmol,与LPS刺激组相比,差异均有统计学意义。纯氯仿洗脱部分40mg/L剂量组、10mg/L剂量组产生的IL-10分别为(229.4±39.0)pg/mL、(243.7±47.7)pg/mL,与LPS刺激组相比,无统计学意义。结论红毛五加正丁醇萃取部分经氯仿洗脱部分能够抑制炎症因子PGE2、TNF-α、NO的产生而发挥抗炎作用。     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的:研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法:ELISA方法检测0.2、2、20μmol/L不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E2(PGE2)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2酶蛋白表达的影响。结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE2可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论:蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE2的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变。结果芦荟大黄素在0.69～2.50mg·L-1剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00mg·L-1剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性。结论芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的。     

丹参酮ⅡA体内外抗炎作用研究

目的采用体内外炎症模型研究丹参酮IIA抗炎活性作用及其作用机制。方法建立脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7细胞体外炎症模型,检测不同浓度丹参酮IIA对炎症因子水平、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)蛋白表达及其基因表达的影响。建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶大鼠足跖肿胀炎症模型,探讨不同浓度丹参酮IIA的体内抗炎作用。结果丹参酮IIA对RAW264.7细胞无明显毒性。与LPS组比较,丹参酮IIA剂量在2.5～40 mg/L呈明显剂量相关性地抑制一氧化氮(NO)、白细胞介素-1?(IL-1?)和白细胞介素-6(IL-6)释放(P0.05、0.01)。与LPS组比较,丹参酮IIA呈现剂量相关性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2蛋白的表达(P0.01)。与LPS组比较,丹参酮IIA呈剂量相关性地下调LPS诱导的RAW264.7细胞中的iNOS、COX-2、IL-1?和IL-6基因表达(P0.05、0.01)。丹参酮IIA在10～60 mg/kg对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有不同程度的抑制作用,对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有不同程度的抑制作用,并呈剂量相关性(P0.05、0.01),且当丹参酮IIA给药剂量达到40 mg/kg时,其抗炎效果强于阿司匹林。结论丹参酮IIA具有抗炎作用,其作用机制可能与减少巨噬细胞炎症介质生成和释放、炎症基因iNOS、COX-2、IL-1?和IL-6的表达密切相关。     

原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1表达的影响

目的探讨原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1(mPGES-1)表达的影响。方法酶免疫测定法(EIA)检测原花青素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mPGES-1mRNA的表达,Western blotting检测mPGES-1蛋白的表达。结果脂多糖(LPS)可以促进RAW264.7细胞PGE2的生成同时上调mPGES-1mRNA和蛋白的表达,而原花青素(4、20 mg.L-1)下调LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1mRNA和蛋白的表达,从而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成。结论原花青素在mRNA和蛋白水平抑制LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1表达从而减少PGE2的合成,这可能是原花青素抗炎的机制之一。