RP-HPLC法测定白头翁汤中白头翁皂苷B4的含量

目的 建立白头翁汤中白头翁皂苷B4含量测定的RP-HPLC法.方法 采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水(体积比28:72)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长205 nm,柱温30℃,进样量10μL.结果 白头翁皂苷B4质量浓度在0.1～1.5 g·L-1内线性关系良好(r=0.999 8);平均加样回收率为103.1%,RSD为1.2%(n=9);重复性RSD为1.6%(n=5).结论 该方法简便、快速、准确、重现性好,为白头翁汤及其新剂型改进提供了一种质量控制方法.     

白头翁皂苷及其单体抗肿瘤作用及机制的研究进展

白头翁是我国中医中一味传统的中药材,广泛应用于中医临床.近年来的医学研究发现,从白头翁中提取的天然产物白头翁皂苷及其单体化合物具有多种生物活性,尤其是从中分离得到的三萜类皂苷,具有显著且广谱的抗肿瘤作用,其潜在抗肿瘤分子机制包括抑制肿瘤细胞的生长和增殖、抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移、阻滞肿瘤细胞周期、调控癌细胞能量代...     

B7-H4在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨新型共刺激分子B7-H4在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 (1)收集2013年8月至2019年1月昆明医科大学第二附属医院肝癌组织32例;(2)筛选肝癌细胞系Hep3B,SMMC-7721,Huh-7,PLC/PRF/5等细胞的B7-H4表达情况;(3)筛选并培养高表达的该基因的肝癌细胞株,并使用预先制备好的慢病毒载体抑制该基因表达,将处于对数生长期的高表达的B7-H4肝癌细胞分为对照组、shRNA-1抑制组、shRNA-2抑制组,采用Western Blot(WB)法及实时荧光定量PCR法检测各组B7-H4的相对表达量;采用Tranwell细胞侵袭实验观察各组细胞侵袭能力;采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力。结果 在临床样本中,B7-H4在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且肝癌中B7-H4表达越高,病人越容易复发。HCCLM3的Western Blot相对表达量,对照组(5.32±1.03)、shRNA-1组(1.42±0.29)、shRNA-2组(2.06±0.68),shRNA-1组、shRNA-2组均被抑制,shRNA-1组抑制明显(P＜0.05)。HCCLM3对照组的细胞数为(365±21)、shRNA-1组(128±8);PLC/PRF/5组的细胞数为(267±44)、shRNA-1组(79±12)。与对照组相比较,shRNA-1组可明显抑制HCCLM3和PLC/PRF/5的细胞侵袭能力(P＜0.01)。HCCLM3对照组的细胞迁移率为(82%±13%)、shRNA-1组(44%±6%);PLC/PRF/5对照组细胞迁移率为(77%±9%)、shRNA-1组(41%±6%)。与对照组比较,shRNA-1组明显抑制HCCLM3和PLC/PRF/5的细胞迁移能力(P＜0.05)。转染抑制该基因后其相对表达量、细胞侵袭能力、迁移能力均下降。结论 B7-H4有望成为新的肝癌预后标志物,下调肝癌细胞B7-H4的表达可以减弱肝癌细胞侵袭和迁移能力。     

甲基尿石素A对油酸诱导的Huh-7细胞脂质累积的改善作用及其机制研究

目的:研究甲基尿石素A对油酸诱导的人肝癌Huh-7细胞脂质累积的改善作用及机制。方法:采用油酸诱导建立细胞脂质累积模型。取Huh-7细胞,分为对照组(培养基)和模型组(1 mmol/L油酸)、低剂量药物组(1 mmol/L油酸+10μmol/L甲基尿石素A)和高剂量药物组(1 mmol/L油酸+20μmol/L甲基尿石素A),采用油红O染色法观察细胞中脂质累积情况;采用三酰甘油(TG)酶法测定细胞内TG含量,采用聚合酶链式反应(PCR)法检测细胞中脂肪酸合成酶(FASN)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPAR-α)、PPAR-γ的m RNA表达水平;采用Western blotting法检测细胞中FASN的蛋白表达水平。结果:采用油酸诱导后,细胞膜周围出现大量脂滴累积;细胞内脂质及TG含量均显著升高,FASN、SREBP-1、PPAR-γ的mRNA表达水平及FASN的蛋白表达水平均显著升高,PPAR-α的mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。采用甲基尿石素A干预后,细胞膜周围的脂滴明显减少;细胞中脂质及TG含量均显著降低,FASN、SREBP-1、PPAR-γ的mRNA表达水平及FASN的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:甲基尿石素A对油酸诱导的Huh-7细胞脂肪累积有一定的改善作用,其机制可能与下调FASN、SREBP-1、PPAR-γ等相关因子的表达,抑制脂肪酸从头合成、促进脂质代谢有关。     

白头翁皂苷B4对小鼠肝药酶CYP1A2表达及酶活性的影响

目的:观察白头翁皂苷B4体内、体外对小鼠肝药酶CYP1A2酶活性及表达的影响,为白头翁B4的药物相互作用提供实验依据.方法:采用UHPLC XB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)分离样品,以0.1％甲酸水和乙腈为流动相,流速0.3 mL·min-1,采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式,多反应离子...     

白头翁皂苷B4调控去乙酰化酶6对胃癌细胞转移和放疗敏感性的影响

目的 探讨白头翁皂苷B4(AB4)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及放疗敏感性的影响及其分子机制。方法 该研究起止时间为2018年4月至2019年10月。体外培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1与胃癌细胞HGC-27,采用不同浓度（25、50、100μmol/L）的AB4处理24 h,通过MTT法检测细胞存活率并筛选AB4适宜浓度用于后续研究。Transwell实验检测HGC-27细胞迁移及侵袭能力。细胞克隆形成实验检测AB4对HGC-27细胞放射敏感性的影响;蛋白质印迹法检测AB4对HGC-27细胞中去乙酰化酶6(SIRT6)蛋白表达的影响;干扰SIRT6表达联合AB4处理后,采用上述检测方法检测HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性;蛋白质印迹法检测DNA激活蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）、DNA双链修复蛋白Rad51、DNA修复酶Ku80、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果 与NC组相比,AB4处理后HGC-27细胞存活率[（100.01±9.57）%比（86.57±6.58）%、（65.45±8.45）%、（49.58±7....     

抑制IGF2基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用

目的:研究抑制人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用。方法:将重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA表达载体pGL3-h AFP-hTERT-siRNA3(简称siRNA3)转染Huh-7细胞和正常肝L-02细胞,另设阴性对照(载体p GL3-hAFP-hTERT)组和空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞转染48 h后IGF2 mRNA表达;酶标仪检测转染0、24、48、72 h后的细胞活性;流式细胞仪检测转染48h后细胞周期、细胞凋亡;Western blot法检测细胞IGF2、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)E2、Cyclin D2、Cdc2、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与阴性对照组和空白对照组比较,转染siRNA3的Huh-7细胞中IGF2 mRNA表达明显减弱,转染48、72 h后Huh-7细胞活性明显降低,G1期Huh-7细胞明显增加,S期Huh-7细胞明显减少;Huh-7细胞早期、晚期及总凋亡百分比均明显增加,IGF2、PCNA、Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2和Bcl-2蛋白表达均明显减弱,以上差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。转染siRNA3表达载体的L-02细胞上述指标均无明显变化(P>0.05)。结论:重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF2基因的siRNA可特异性抑制Huh-7细胞IGF2表达及细胞增殖,其可能与下调IGF2 mRNA及蛋白表达,进而引起细胞增殖相关基因PCNA、细胞周期调控相关基因Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2及细胞凋亡调控相关基因Bcl-2蛋白表达下调有关。     

党参总皂苷对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用及其机制

目的:研究党参总皂苷(TSC)对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测0、100、200、400、600、800、1 000、1 200、1 400、1 600、1 800、2 000 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞72 h后的细胞活力,并计算生长抑制率和半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测911.0 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况并计算凋亡率;采用酶标仪检测0(空白对照)、200、400、800、1 000 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞72 h后半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-8、Caspase-9活性,并采用双抗体夹心酶联免疫法检测其p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p53蛋白表达。结果:100~2 000 mg/L TSC可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且与TSC给药浓度呈正相关,其IC50为911.0 mg/L;911.0 mg/L的TSC作用于细胞24、48、72 h的凋亡率分别为21.10%、30.20%、41.10%。与空白对照比较,200、400、800、1 000 mg/L的TSC能增强细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性与p38MAPK、p53蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且与给药质量浓度呈正相关。结论:TSC能有效抑制SMMC-7721细胞增殖,其机制可能是通过上调Caspase-8、Caspase-9活性与p38MAPK、p53蛋白表达,最终激活Caspase-3,从而诱导细胞凋亡。     

白头翁皂苷B4对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病的治疗作用及其机制研究

目的 考察白头翁皂苷B₄对咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠的炎症及免疫相关指标的影响,探讨其对小鼠银屑病的治疗作用及其机制。方法 将56只BALB/c小鼠随机分成对照组,模型组,阿维A胶囊组（6 mg/kg）,白头翁皂苷B₄低、中、高剂量（5、10、20 mg/kg）组,白头翁皂苷B₄乳膏组（20 mg/kg）,每组各8只。通过局部涂抹5%咪喹莫特乳膏诱导小鼠银屑病模型,各组小鼠口服或涂抹相应药物,14 d后通过银屑病皮损面积及严重程度评分（PASI）评价小鼠皮损程度;HE染色观察皮肤组织病理学形态;血常规检测血液中免疫细胞的变化;酶联免疫吸附试剂（ELISA）检测小鼠皮肤中白细胞介素（IL）-6、IL-12、IL-17、IL-1β的水平。结果 与模型组相比,阿维A胶囊组,白头翁皂苷B₄ 5、10、20 mg/kg组,白头翁皂苷B₄乳膏组小鼠皮损组织棘层厚度减小,真皮层炎症细胞浸润减少,PASI评分、血液中的免疫细胞及皮肤组织中IL-6、IL-12、IL-17、IL-1β的表达水平均显著降低。结论 白头翁皂苷B₄对5%咪喹莫特诱导小鼠银屑病皮损具有明显的治疗作用,其机制可能是通过抑制IL-6、IL-12、IL-17、IL-1β等细胞因子表达发挥治疗作用。     

羽扇豆醇抑制人肝癌Huh-7细胞增殖机制研究

摘 要 目的：研究羽扇豆醇（lupeol）对人肝癌Huh-7细胞增殖的影响。方法: 运用CCK-8法检测lupeol（10~150 μmol·L^-1）对T24细胞活力的影响;运用caspase抑制剂确证凋亡相关蛋白caspase是否与lupeol对细胞增殖抑制作用有关;运用western blot检测lupeol对c-Jun蛋白表达的影响;运用real time PCR评价lupeol对miR-21、MMP-2、MMP-9基因mRNA表达的影响;运用pGL3 Basic荧光素酶报告系统研究lupeol对MMP-9启动子活性的影响。结果: Lupeol在72 h能够抑制Huh-7细胞增殖,该抑制作用具有剂量依赖性;lupeol处理细胞72 h后半抑制浓度（IC50）为80 μmol·L^-1;与对照组相比,运用lupeol能够使Huh-7细胞中c-Jun蛋白表达下调;lupeol能够降低miR-21表达水平;与对照组相比,lupeol处理Huh-7细胞降低MMP-9的mRNA表达,并使MMP-9基因启动子活性下调40%;以上结果与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论: Lupeol能够抑制人肝癌Huh-7细胞增殖,该作用与抑制miR-21/c-Jun/MMP-9信号通路有关。     

维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用细胞计数试剂盒检测不同浓度维A酸注射液对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,计算半数抑菌浓度(IC50)。建立裸鼠SMMC-7721移植瘤模型,分为阴性对照组(n=12)、阳性对照(顺铂1mg.kg-1)组和维A酸低、中、高剂量(7.5、15、30mg.kg-1)组,后4组各6只。腹腔给予相应药物,每周连续给药5d后停药2d,共给药4周,每周检测各组裸小鼠体重、肿瘤体积(TV)、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C),及末次给药2d后移植瘤组织中凋亡细胞阳性率和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:维A酸注射液对SMMC-7721细胞的IC50为(15.14±0.46)μg.mL-1。小鼠给药19d(治疗疗效最佳时间)时,与阴性对照组比较,其余各组TV、RTV均明显下降(P<0.05或P<0.01),体重无明显变化,T/C均小于60%;末次给药2d后,与阴性对照组比较,维A酸3个剂量组凋亡细胞阳性率和Caspase-3表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:维A酸注射液能抑制SMMC-7721细胞的增殖及其裸小鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡和Caspase-3表达有关。     

Apigenin Sensitizes Huh-7 Human Hepatocellular Carcinoma Cells to TRAIL-induced Apoptosis

TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is a promising agent for management of cancer because of its selective cytotoxicity to cancer cells. However, some cancer cells have resistance to TRAIL. Accordingly, novel treatment strategies are required to overcome TRAIL resistance. Here, we examined the synergistic apoptotic effect of apigenin in combination with TRAIL in Huh-7 cells. We found that combined treatment of TRAIL and apigenin markedly inhibited Huh-7 cell growth compared to either agent alone by inducing apoptosis. Combined treatment with apigenin and TRAIL induced chromatin condensation and the cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). In addition, enhanced apoptosis by TRAIL/apigenin combination was quantified by annexin V/PI flow cytometry analysis. Western blot analysis suggested that apigenin sensitizes cells to TRAIL-induced apoptosis by activating both intrinsic and extrinsic apoptotic pathway-related caspases. The augmented apoptotic effect by TRAIL/apigenin combination was accompanied by triggering mitochondria-dependent signaling pathway, as indicated by Bax/Bcl-2 ratio up-regulation. Our results demonstrate that combination of TRAIL and apigenin facilitates apoptosis in Huh-7 cells.     

旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。     

米托蒽醌毫微球在裸小鼠人肝癌模型体内的靶向性研究

采用液体闪烁计数技术研究厂氖标记米托惠醌聚氰基丙烯酸正丁酯毫微球（￣（３）Ｈ－ＤＨＡＱ－ＰＢＣＡ－ＮＳ）在常位及异位（腋下）裸小鼠人肝癌模型体内各脏器、肌肉、肝常位肿瘤组织和腋下肿瘤组织中的分布。证明该制剂具有良好的肝靶向作用，肝脏中的含量为体内总药量的７１．３１±１０．４９％（ｎ＝５）。并发现其在常位肿瘤组织中的含量高于肝组织中的含量，腋下肿瘤组织中的含量高于腋下肌肉组织中的含量，但均无显著性差异。为该制剂的进一步研究提供了一定的科学依据。     

Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株HEPG2的抑制作用

目的观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对肝癌细胞的增殖、凋亡的影响。方法人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染肝癌细胞株HEPG2后,用MTT法检测细胞毒作用,流式细胞术检测细胞的凋亡;RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及蛋白的表达。结果survivin ASODN抑制HEPG2增殖,呈剂量依赖性;各survivin ASODN处理组HEPG2细胞凋亡率显著高于对照组（P〈0.01）;survivin ASODN处理组HEPG2细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降（P〈0.01）。结论survivin ASODN能够抑制HEPG2细胞增殖、诱导凋亡。     

顺铂联合异甘草酸镁对原发性肝癌小鼠疾病进展影响及相关机制研究

目的 了解顺铂联合异甘草酸镁调控ERK1/2信号通路干预原发性肝癌小鼠疾病进展及对PGE2及γδT细胞表达水平的影响。方法 建立45只原发性肝癌小鼠模型,随机分为对照组、顺铂组、联合用药组,各15只,分别腹腔注射给予生理盐水、顺铂、顺铂联合异甘草酸镁。比较其治疗效果,血清肝功能指标,前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）水平,肝脏核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）p65和炎症因子表达,细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases,ERK1/2）及p-ERK1/2蛋白相对表达量,γδT细胞百分比。结果 联合用药组肿瘤质量最低,顺铂组肿瘤质量较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）;联合用药组抑瘤率大于顺铂组（P<0.05）;联合用药组血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、PGE2水平、肝脏肿瘤坏死因子、血管内皮生长因子、NF-κB p65蛋白量最低,顺铂组较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）;3组肝脏ERK1/2蛋白相对表达量无差异;联合用药组肝脏p-ERK1/2蛋白相对表达量、γδT细胞百分比最低,顺铂组较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）。结论 顺铂联合异甘草酸镁可调控ERK1/2及NF-κB信号通路从而干预原发性肝癌小鼠疾病进展,并且可降低γδT细胞百分比,调节免疫机能。