植物性原料合成熊去氧胆酸的研究进展

熊去氧胆酸可溶解胆固醇结石，改善胆汁淤积性疾病的肝功能，在临床上广泛用于治疗各种肝胆疾病。过去，熊去氧胆酸主要从活熊胆中引流胆汁进行提取，但该方法步骤繁杂且违反了动物保护法，来源受限，无法满足工业生产的需求。目前，熊去氧胆酸可通过胆酸、7-酮石胆酸、鹅去氧胆酸或猪去氧胆酸作为起始原料进行化学合成、微生物或酶法合成。然而以上原料都是从动物胆汁酸中提取分离而得，属于动物性原料，可能存在致病菌、病毒和过敏源等问题。植物性原料可避免动物原料的各种安全风险，且来源更为广泛、价格更为低廉。近几年由植物性原料合成熊去氧胆酸的研究成为甾体药物合成研究的热点之一。本文作者对这一领域的研究进展进行综述，以期为相关研究提供有价值的参考。     

RP-HPLC法测定熊去氧胆酸胶囊中熊去氧胆酸及有关物质的含量

目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定熊去氧胆酸胶囊中熊去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸及胆石酸的含量。方法使用Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.03 mol·L-1磷酸溶液(体积比为40∶60),流速为1.4 mL·min-1,检测波长为205 nm,柱温为35℃。结果熊去氧胆酸胶囊中熊去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸及胆石酸在25 min内洗脱并基线分离。熊去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸及胆石酸的线性范围分别为0.80²00.00、0.45200.00、0.45¹10.00、0.30110.00、0.30⁷0.00和0.3070.00和0.30⁸0.00 mg·L-1,平均回收率分别为99.7%、99.3%、98.7%和99.1%,RSD分别为1.30%、1.47%、1.87%和1.95%(n=3)。结论 RP-HPLC可用于同时测定熊去氧胆酸胶囊中熊去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸及胆石酸的含量,可应用于熊去氧胆酸胶囊胶囊制剂的质量控制。     

三种去氧胆酸的制备及其应用

本文介绍了鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸的制备方法。并提出这三种去氧胆酸可用猪胆汁为原料,在分离猪去氧胆酸后的残留物中制备鹅去氧胆酸,以鹅去氧胆酸作原料合成熊去氧胆酸。这三种去氧胆酸在治疗胆石症中应用时,鹅去氧胆酸易产生腹泻等副作用。熊去氧胆酸出现透光胆石钙化的问题。以适当比例的猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合给药具有安全性。因此,也可用猪胆汁精制物作胆石症的治疗药。     

不同胆汁制胆南星中胆酸类成分及其解热作用比较

目的比较猪、牛、羊胆汁制胆南星中胆酸类成分及其对发热小鼠体温的影响,为规范胆南星发酵工艺提供依据。方法分别采用猪、牛、羊胆汁与天南星生品发酵制备胆南星。采用HPLC-CAD法检测3种胆南星中胆酸类成分胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸。以干酵母制备小鼠发热模型,观察猪、牛、羊胆汁制胆南星对发热小鼠体温的影响。结果不同胆汁制胆南星中胆酸类成分存在差异,牛胆汁制胆南星中胆酸类成分质量分数最高,胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸的质量分数分别为0.035 9%、0.843 4%、2.260 2%、0.037 2%。猪胆汁制胆南星中鹅去氧胆酸和去氧胆酸升高,胆酸和猪去氧胆酸降低;羊胆汁制胆南星中胆酸类成分除去氧胆酸外均降低。不同胆汁制胆南星对发热小鼠均有一定的清热作用,猪胆汁制胆南星组小鼠体温先升高后降低,且与模型组比较差异有显著性,牛胆汁制胆南星亦表现出清热作用,但与模型组比较无显著性差异。羊胆汁制胆南星清热作用较弱。结论综合比较猪、牛、羊胆汁制胆南星中胆酸类成分质量分数和清热作用,作为制备胆南星的辅料,牛胆汁、猪胆汁优于羊胆汁。     

从猪胆膏中分离纯化鹅去氧胆酸的新工艺

鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA),又称3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸,是动物体胆汁中的一种生化物质,临床上不仅用作溶解胆固醇类结石和纠正饱和胆汁的药物[1],还具有显著的平喘、抗炎、镇咳和祛痰作用[2,3].鹅去氧胆酸可以作为昂贵的熊去氧胆酸合成原料,它们都是治疗胆道疾病的有效药物[4].     

从猪去氧胆酸合成具有生物活性的甾体化合物

综述了用猪去氧胆酸合成具有生物活性的甾体化合物如6α-甲基黄体酮、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、油菜甾醇内酯及其类似物和维生素 D_3活性代谢物等的概况。     

熊胆粉提取物中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的HPLC-ELSD测定

建立THPLC-ELSD法测定熊胆粉提取物中的熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸.采用C18色谱柱,以0.05%三氟乙酸-乙腈梯度洗脱,蒸发光散射检测器,漂移管温度95℃.熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸分别在2.51～12.54μg和0.40～2.02μg范围内线性关系良好,回收率为98.8%和99.8%,RSD为1.4%和2.1%.     

薄层色谱法检查熊去氧胆酸的有关物质

目的:建立熊去氧胆酸有关物质检查的薄层色谱方法。方法:以丙酮-水(9∶1)为溶剂,制备熊去氧胆酸溶液(10 mg.mL-1),鹅去氧胆酸对照溶液+熊去氧胆酸对照溶液(各0.4 mg.mL-1)、鹅去氧胆酸对照溶液(0.1 mg.mL-1)、胆石酸对照溶液(0.01 mg.mL-1)、胆酸对照溶液(0.05 mg.mL-1)、系列自身对照溶液(0.01,0.02,0.05 mg.mL-1);各点样5μL于硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-丙酮-冰醋酸(60∶30∶3)为展开剂,以4.5%磷钼酸硫酸溶液-冰醋酸(1∶20)溶液为显色剂。结果:熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸分离较好;熊去氧胆酸可能含有的各有关物质的斑点清晰可见。结论:本法适用于熊去氧胆酸的质量控制。     

核磁共振法测定熊去氧胆酸中鹅去氧胆酸的含量

用一般的滴定方法测定熊去氧胆酸中鹅去氧胆酸的含量是很难进行的。NMR方法能有效地进行测定。样品(10～20毫克)溶解在CDCl_3和DMSO-d_6(8:1v/v)的混合溶剂中,马来酸做标准物,以δ=3.8ppm的鹅去氧胆酸C_7质子峰面积计算含量。方法的变异系数是0.45-1.3%,回收率是99.3-100.1%。     

HPLC-ELSD法同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分的含量

目的:建立同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸5种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,检测器为蒸发光散射检测器。色谱柱为Agilent XBD-C18,流动相为0.05%三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min;漂移管温度为80℃,N2流量为3.0 ml/min,柱温为40℃。结果:牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸检测质量浓度线性范围分别为10.00²00.08、10.22200.08、10.22²04.32、10.00204.32、10.00¹99.92、9.85199.92、9.85¹97.08、10.25197.08、10.25²04.92μg/ml(r=0.999 5204.92μg/ml(r=0.999 5⁰.999 8);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均不大于2.0%。5种成分的平均回收率分别为97.9%、98.4%、97.9%、98.1%、98.3%,RSD分别为0.49%、0.63%、0.81%、0.72%、0.78%(n=3)。结论:该方法快速、准确、重复性好,可用于生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分的定量测定。     

甘露醇-旋光法测定鞣柳硼三酸散中硼酸的含量

目的建立旋光法测定鞣柳硼三酸散中硼酸的含量。方法以低浓度明胶溶液提取制剂中硼酸,利用甘露醇结合硼酸形成具有旋光性复合物,并建立鞣柳硼三酸散中硼酸的含量测定方法。结果硼酸浓度在5～20 g.L-1的浓度范围内与旋光度线性关系良好(r=0.999 2),方法的平均回收率为99.98%,RSD为1.3%。结论旋光法测定鞣柳硼三酸散中硼酸的含量,操作简便、快速,结果准确,重现性好。     

咖啡酸、阿魏酸和香草酸对酪氨酸酶活性的影响

目的 :研究咖啡酸、阿魏酸和香草酸对酪氨酸酶活性的影响 ,寻找酪氨酸酶抑制剂 ,从而为治疗色素增加性皮肤病筛选药物。方法 :酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定药物干预前后酪氨酸酶活性 ,求出酪氨酸酶抑制率。采用Lineweaver Burk双倒数法制得酶动力学曲线 ,推断抑制类型。结果 :3种试药中仅香草酸对酪氨酸酶具有抑制作用 ,与氢醌比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,咖啡酸、阿魏酸对酪氨酸酶具有上调激活作用。结论 :香草酸为良好的混合型酪氨酸酶抑制剂。     

Nalidixic acid prodrugs: Amides from amino acid ester and nalidixic acid

Amides from amino acid ester and nalidixic acid were synthesized. The solubility characteristics and partition coefficient of the compounds were studied. The hydrolysis of the compounds was studied in the simulated gastric fluid and simulated intestinal fluid. Some compounds showed better antibacterial activity than nalidixic acid.     

Oral antipyretic therapy: Evaluation of the N-aryl-anthranilic acid derivatives mefenamic acid,tolfenamic acid and flufenamic acid

Summary The antipyretic activity of three N-aryl-anthranilic acid derivatives, mefenamic acid, tolfenamic acid and flufenamic acid, was compared and their optimal antipyretic dose determined in a trial in 87 children (aged 5 months to 15 years), who suffered from infections and fever exceeding 38.5°C. Tolfenamic acid proved to be the most potent antipyretic agent of the three drugs; it was eight times more powerful than mefenamic acid and three times more powerful than flufenamic acid. The optimal antipyretic doses were: mefenamic acid 4 mg/kg, tolfenamic acid 0.5 mg/kg and flufenamic acid 1.5 mg/kg. It is evident that the antipyretic activity of these anthranilic acid derivatives is even greater than their antirheumatic effect, the difference being most noticeable in the case of tolfenamic acid.     

高效液相色谱法测定鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量

目的:探讨用反相高效液相色谱法测定鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量。方法:采用Symetry Shield RP18(5μm 4.6mm×250mm)Columm色谱柱;以0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH2.6)-乙腈(50∶50)为流动相;检测波长233nm。结果:水杨酸在20.4～61.2μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.0%。结论:本法简便、准确、快速,适用于鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量测定。     

高效液相色谱法测定复方苯甲酸乳膏中苯甲酸和水杨酸的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定复方苯甲酸乳膏中苯甲酸和水杨酸的含量。方法:色谱柱为Hypersil C_(18)柱(4.6nm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(44:56),流速0.8mL·min~(-1),检测波长为226nm。结果:苯甲酸和水杨酸分别在15.20～76.00mg·L~(-1)和7.64～38.20mg·L~(-1)范围内线性良好(r=0.9999);日内、日间RSD在0.030～4.79％,高、中、低浓度回收率在98.54％～101.20％。分析了3批样品,结果满意。结论:本方法简便,快速,准确,可作为复方苯甲酸乳膏的质量控制方法。     

双波长薄层扫描法测定苯甲酸复方制剂的含量

本文采用硅胶HF_(254 366)薄层板,以氯仿—丙酮—异丙醇—甲醇—浓氨水(30:30:15:15:10)为展开剂,直接分离苯甲酸复方制剂中的苯甲酸与水杨酸。在CS-930型双波长薄层扫描仪上,采用反射式锯齿扫描,分别对苯甲酸和水杨酸进行扫描测定。结果:苯甲酸与水杨酸的线性关系、精度及回收率都比较满意。     

Methylated eicosapentaenoic acid and tetradecylthioacetic acid: effects on fatty acid metabolism.

We introduced methyl or ethyl groups to the 2- or 3-position of the eicosapentaenoic acid (EPA) molecule to investigate whether the branching of EPA could influence its hypolipidemic effect in rats. The most effective branching involved two methyl groups in the 2-position and one methyl group in the 3-position. These EPA derivatives increased hepatic mitochondrial and peroxisomal beta-oxidation and decreased plasma lipids concomitant with suppressed acetyl-coenzyme A (CoA) carboxylase (EC 6.4.1.2) and fatty acid synthase (EC 2.3.1.85) activities. This was followed by elevated activities of camitine O-palmitoyltransferase (EC 2.3.1.21) and possibly 2,4-dienoyl-CoA reductase (EC 1.3.1.34), as well as induced mRNA levels of these enzymes and fatty acyl-CoA oxidase. The fatty acid composition in liver changed, with an increased 18:1 n-9 content, whereas the expression of delta9-desaturase remained unchanged. We investigated the flux of fatty acids in cultured hepatocytes, and found that oxidation of [1-14C]-labeled palmitic acid increased but the secretion of palmitic acid-labeled triglycerides decreased after addition of 2-methyl-EPA. The fatty acyl-CoA oxidase (EC 1.3.3.6) activity in these cells remained unchanged. A significant negative correlation was obtained between palmitic acid oxidation and palmitic acid-labeled synthesized triglycerides. To investigate whether the hypolipidemic effect occurred independently of induced peroxisomal beta-oxidation, we fed rats 2-methyl-tetradecylthioacetic acid. This compound increased the peroxisomal but not the mitochondrial beta-oxidation, and the plasma lipid levels were unchanged. In conclusion, EPA methylated in the 2- or 3-position renders it more potent as a hypolipidemic agent. Furthermore, this study supports the hypothesis that the mitochondrion is the primary site for the hypolipidemic effect.