PCR提取DNA方法的改进

们改进了聚合酶键反应（PCR）提取DNA的方法，并用于骨髓增生异常综合征（MDS）P53基因和降钙素基因（CT基因）甲基化的研究，获得满意的PCR扩增效果。步骤如下：将组织培养细胞收集于试管中，用缓冲液（145mmol／LNaCl、66mmol／LNa3PO4、pH7．0）充分洗涤2～3次后，置于Ep管中，将0．5ml骨髓（血）和0．5ml裂解缓冲液（0．32mol／L蔗糖10mmol／LTris－HClpH7．5，5mmol／LMgCl2、1％TritonX－100）在1．5mlEp管中充分混匀，13000g离心去上清，重复3～4欢。用无菌手术刀剖净骨髓涂片上的血膜，置于1．5mlEp管中。然后向Ep…     

陈旧性牙根折断一次性治愈1例

患者，男，25岁，1991年因外伤，左侧中切牙冠折断1／2，三年后，因根尖处粘膜破溃不愈合，而来我院就诊。局部检查，上上桩冠修复·桩冠近龈缘处与牙体分离，致使龈缘水肿，充血，并有唇侧疾管，牙体松动卜叩珍（＋），X线片显示：牙龈近根尖1／3处折断，显游离状态，根尖部约有－0．2×0．2mm的密度减低区。根管内未见根尖药物。牙槽骨呈水平吸收至近牙颈部1／3，牙周膜及硬骨板消失。1治疗方法1．1先将原桩冠破坏，取出桩钉，用3－6号扩大针逐号扩大根管，确保引流通畅。用棉捻洁1％甲硝吐生理盐水溶液，清说根管，清洗时将针尽量深插，…     

核糖体蛋白S29与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶的关系

目的：探讨核糖体蛋白S29（ RPS29）与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶（5－FU ）的关系。方法采用大剂量冲击法和逐渐增加剂量法构建人肝癌Bel－7402／5－FU耐药细胞系；用荧光定量PCR和West－ern blot检测RPS29基因和蛋白在敏感和耐药细胞中的表达；用siRNA干涉耐药细胞的RPS29，CCK－8法检测细胞存活率变化。用肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株验证阻断RPS29表达与5－FU耐药的关系。结果 Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的IC50为62μmol／L，耐药指数为22．7。 RPS29基因和蛋白在耐药细胞中高表达，分别为敏感细胞的（2．21±0．19）倍和（1．79±0．28）倍（P＜0．01）。干涉RPS29后，耐药细胞在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（15．1±6．5）％、（24．3±4．2）％、（19．2±5．1）％、（16．3±6．8）％（ P ＜0．05）。干涉RPS29表达后，肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（8．4±1．2）％、（13．0±2．3）％、（17．1±3．1）％和（12．2±1．5）％（P＜0．05）。结论 RPS29基因和蛋白均在Bel－7402／5－FU耐药细胞高表达；低表达RPS29可提高Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。低表达RPS29可提高Hep G2／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。 RPS29与肝癌细胞对5－FU的耐药性有关。     

钙通道、钙调蛋白拮抗剂对内康素-1分泌的影响

观察钙通道、钙调蛋白拮抗剂对人脐带静脉内皮细胞分泌内皮素-1（ET－1）的作用，结果表明钙通道拮抗剂异搏定（5．5×10－6及5．5×10-5mol／L）、硫氮办公酮（2．4×10-4mol／L）和钙调蛋白拮抗剂氯丙嗪（3．1×10-5及3．1×10-4mol/L）、小檗胺（1．6×10-5及1．6×10-4mol／L）均能明显抑制内皮细胞分泌ET－1，提示ET－1的分泌或释放受钙通道及细胞内钙调蛋白的调节。此外，硝酸甘油也明显抑制ET－1的分泌，提示一氧化氮有抑制ET－1分泌的作用。     

大鼠延髓腹外侧区给予红藻氨酸对呼吸和血压的影响

在延髓表面贴敷药物观察分巨细胞外侧核（PGCL）腹外测表面区对呼吸和血压的影响。1材料和方法SD大鼠12只，250－350g，雄雌不限，用20％氨基甲酸乙酯（1.0－1．2g／kg体重）腹腔麻醉。将动物固定于定位仪上（Narishige，SN－1型），行气管、股动脉、股静脉插管，分离并切断双侧迷走神经。分离隔神经，用铂电极引导膈神经放电。保温动物在37－38．5℃。膈神经放电及积分、动脉血压和直肠温度均由RM－6000型多导生理记录仪（NihonKonhdenRMG－5304）记录或监视。剪断气管和食管，分离颅底部肌肉，暴露颅底骨，钻开枕骨，扩大创口：吻…     

大山楂咀嚼片的药理实验研究

大山楂咀嚼片是我所在《中国药典》（１９９５年版）介绍的大山楂丸的基础上，改丸剂为咀嚼片。它便于携带，服用方便，并且增加了制剂的品种。为证实其药效，我们将大山楂咀嚼片与其传统剂型──大山楂丸进行药理作用的对比研究，并且进行了急性毒性实验。１ 材料与方法１．１ 药物：大山楂咀嚼片：由河南省平顶山市药品检验所新药开发部提供，批号 ９６０８１８，每片相当于原生药１．０６ｇ，临床用量为４～２４片／日。１．２ 试剂：大山楂丸：阳性对照药，市售，批号９６１１１７，河南省禹州市中药厂产品，规格９ｇ／丸（相当于原生药…     

氢化可的松琥珀酸钠治疗婴儿毛细支气管炎的疗效

目的观察氢化可的松琥珀酸钠治疗婴幼儿毛细支气管炎的疗效。方法将65例毛细支气管炎（毛支）惠儿随机分为2组，均采用常规抗感染对症、吸氧等综合治疗，治疗组在此基础上加用氢化可的松琥珀酸钠注射液1-2mg／kg次，1次／d；对照组加用地塞米松针0．5mg／kg，1次／d治疗。结果治疗组患儿喘弊、肺部哮鸣音和湿哆音消失，住院天数与对照组相比明显缩短，差异有显著性意义（P〈0．05）。治疗组治愈32例，好转3例，治愈率91．43％；对照组治愈21例，好转9例，治愈率70％，治疗组治愈率显著高于对照组（X^2=4．93、P〈0．05）。结论氢化可的松琥珀酸钠治疗毛支疗效显著。     

冠心安一号临床疗效观察

冠心安一号动物奖验显示能增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，在临床试用中对冠心病的绞痛症状的缓解，心电图的改善有相当疗效，现将结果报告如下：1一般资料本组采用双盲随机抽样共150例，均系我院住院、门诊病人，其中冠心安一号组（治疗组）110例，男61例，女49例。最高年龄79岁，最低年龄38岁，平均56．7岁。冠心苏台丸组（对照组）40例，男22例，女18例。最高年龄74岁，最低年龄39岁，平均59．1岁．2观条方法本组150例中治疗组正10例，投予冠心安一号口服，2粒／次，3次月；对照组40例，投予冠心苏台丸口服，1丸／次，l～3次用，4周为…     

LPS、PLA_2及氧自由基对线粒体跨膜质子转运和H~+ -ATPase的影响

目的：研究细菌内毒素（LPS）、磷脂酶A2（PLA2）及自由基对质子跨膜转运及H+－ATP酶的影响。方法：采用正常大鼠，制备线粒体、亚线粒体（SMP），用SMP与LPS（100μg／ml）、PLA2（10u／ml）、FeSO4；／VitC（30／900μmol／L）分别共同温育（30C，30min），用ACMA荧光淬灭法测定质子跨膜转运能力。线粒体与不同浓度LPS、PLA2和FeSO4／VitC共同孵育，测定H+－ATP酶、PLA2、MDA。结果：LPS、PLA2、FeSO4／VitC可致亚线粒体ACMA荧光淬灭显著改变，LPS可引起线粒体膜PLA2活性、MDA含量升高（P＜0．05），LPS、PLA2可引起H+－ATP酶的活性进行性下降，小剂量FeSO4／VitC引起H+－ATP酶活性升高，大剂量FeSO4／VitC引起H+－ATP酶活性降低。结论：LPS、PLA2、LPO是造成质子转运能力下降的重要原因．自由基与H+－ATP酶损伤密切相关。     

喉癌及癌旁组织中P53蛋白的表达

应用枸橼酸－LSAB－微波免疫组化技术，用P53单克隆抗体检测了30例喉鳞癌、癌旁交界处及癌旁0．5、1．0、1．5、2．0cm处粘膜和4例正常喉粘膜中P53蛋白的表达。结果显示：①P53在喉癌组织中的阳性表达率为63．3％（19／30）；在癌旁交界处、癌旁0．5、1．0、1．5、2．0cm处的阳性表达率分别为60％（18／30）、36．7％（11／30）、10％（3／30）、0．0％（0／30）、0．0％（0／30）；4例正常喉粘膜中无阳性表达，其间差异显著（P＜0．01）。②P53蛋白阳性表达强度以喉癌组织中最强，随着远离肿瘤距离的增加，表达强度逐渐减弱。③P53蛋白的表达与喉癌部位、临床分期及肿瘤分级无关。结果提示：P53基因突变参与了喉癌的发生，P53过度表达是喉癌发生中的早期事件；距肿离0．5cm以内的癌旁组织，应视为危险区域。     

豚鼠、兔气管壁淋巴管的分布

为观察豚鼠和兔气管淋巴管的分布特征及超微结构，本文应用淋巴管间接注射、光镜和电镜观察及计算机图像分析的方法进行了研究。结果表明，两种动物气管淋巴管结构、分布相似。粘膜层仅存在丰富的毛细淋巴管，粘膜下层、肌层、外膜层有毛细淋巴管和淋巴管分布。在320张组织切片中，淋巴管检出李豚鼠为36％；兔为23％（P＜0．01）。淋巴管的平均最大直径豚鼠为22．6±14．1μm（x±s）；兔为23．7±14．9μm（x±s）。体密度豚鼠为2．05±0．49μm3／μm3×10－3（x±Sx）；兔为1．29±0．40μm3／μm3×10－3（x±Sx）。截面密度豚鼠为5．89±1．20Ly／mm2（x±Sx）；兔为2．32±0．58Ly／mm2（x±Sx）。豚鼠气管淋巴管比兔的丰富。超微结构，毛细淋巴管的壁均由一层内皮细胞围成，基膜不完整或缺乏，无周细胞和孔窗。内皮细胞间连接形式可分为端端、重叠和嵌合连接。内皮细胞胞质内有大量囊泡。     

骨痹通天丸抗炎镇痛免疫作用研究

实验动物口服骨痹通天丸5．58g／kg．2．79g／kg，观察本品对炎症反应，局部疼痛和免疫功能的影响。结果表明，骨痹通天丸的两个剂量组对大鼠蛋清性关节肿具有不同程度的抑制作用（P＜0．01或0．05）；对二甲苯性耳廓肿仅大剂量组具有明显抑制作用（P＜0．01）；对小鼠热刺激所致的疼痛反应具有不同程度的抑制作用（P＜0．01或0．05）；对化学刺性疼痛两个剂量组均有明显抑制作用（P＜0．01）；并可抑制小鼠重要免疫器官的增长和巨噬细胞的吞噬功能（P＜0．05），对血清溶血素未显示其效应。     

超微量加热法与双缩脲法测定纤维蛋白原比较

纤维蛋白原（FibringenFibg）测定在血液流变学测定的各项指标中具有一定的重要作用。Fibg的测定方法很多，有定性法，半定量法和定量法，各类方法均有利弊。我们对超微量加热法与双缩豚比色法进行了比较，现将结果报告如下。1材料与方法1．1材料来源54例标本来自我院门诊，住院病人的晨血，同时进行两种方法测定Pibg。1．2方法1．2．1对缩脲比色法；常规采血，用肝素抗凝。血浆加12．5％无水亚硫酸钠沉淀Fibg洗涤后用双缩脲显色，540mm比色。1．22超微量加热法：肝素（10－20μ／m）抗凝血，吸入毛细离心管中（利用毛细现象），一端用橡…     

胆汁淤积时肝细胞膜转运蛋白转录及其转录后的调控

正常生理情况下，胆汁的形成有赖于肝细胞血窦面基底膜上的Na^＋-牛磺酸共转运多肽[sodium-taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP／Ntcp（按国际统一标准NTCP为人类种属转运蛋白，Ntcp为啮齿类动物种属转运蛋白，下同）]，有机阴离子转运蛋白（organic anion transporting protein，OATP／Oatp），多耐药相关蛋白3（muhidrug resistance-associated protein3，MRP3／Mrp3），多耐药相关蛋白4（multidrug resistance-associated protein4，MRP4／Mrp4）和小胆管侧肝细胞毛细胆管膜上分布的胆盐输出泵（canalicular bile salt-export pump，BSEP／Bsep），多耐药相关蛋白2（muhidrug resistance-associated protein，MRP2／Mrp2），多耐药糖蛋白1（muhidrug resistance-1P-glycoprotein，MDR1／Mdr1），多耐药糖蛋白2（muhidrug resistance-2P-glycoprotein，MDR2／Mdr2），多耐药糖蛋白3（multidrug resistance-3P-glycoprotein，MDR3／Mdr3）等多种转运体来完成。转录、转录后调控失常引发的上述转运蛋白在胞膜上表达、定位的异常在胆汁淤积的发生中起了关键作用。     

锅炉灰粉对大鼠支气管肺泡灌洗液成分的影响

目的：探讨石英尘和二热电厂（甲厂、乙厂）锅炉灰粉对大鼠支气管泡灌洗液（BALF）中乳酸脱氢酶活性、总蛋白和磷脂含量的影响。方法：Wistar大鼠生分生理盐水组（对照组）、石英组、甲厂组和乙厂组，一次性气管内注和染尘，取BALF，分别用2，4－二硝基苯肼比色法、Folin-酚式剂法和钼蓝法测定乳酸脱氢酶活性、总蛋白和磷脂注和染尘，取BALF，分别用2，4－二硝基苯肼比色法、Folin－酚试剂法和钼蓝法测定乳酸脱氢酶活性、总蛋白和磷脂含量。结果：与对照组相比，石英组、甲厂组和乙厂组大鼠BALF乳酸脱氢酶活性和总蛋白含量明显增加（P＜0．01），石英组、甲厂组磷脂的含量高于对照组（P＜0．01），而乙厂组与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）。甲厂组大鼠BALF乳酸脱氢酶活性和总蛋白、磷脂含量明显高于乙厂组（P＜0．01或P＜0．05）。结论：在动物染尘早期，大鼠BALF中乳酸脱氢酶活性有总蛋白和磷脂含量的变化号粉尘的致病潜力一致。     

补肾祛湿活血中药对模拟体外骨重塑作用的细胞特征的影响

目的探讨补肾活血中药（珍骨丸）与祛湿活血中药（骨刺风湿丸）对体外骨重塑作用的影响。方法将MC3T3－E1细胞、 RAW264．7细胞分别诱导为成骨细胞（osteoblasts， OB）与破骨细胞（osteoclasts， OC），并将两者共培养。通过免疫细胞化学染色鉴定该共培养体系构建成功与否；以灌胃的方法分别将双醋瑞因、珍骨丸及骨刺风湿丸制备成含药血清；运用含药血清处理共培养细胞并进行Western blotting和Real－time PCR分析。结果珍骨丸与骨刺风湿丸处理共培养细胞后骨保护素（osteoprotegerin， OPG）表达显著上升（P＜0．05），糖蛋白130（glycoprotein 130， gp 130）表达显著下降（P＜0．05）。结论珍骨丸、骨刺风湿丸通过抑制gp130来抑制OC的骨吸收，并通过RANKL－RANK－OPG系统促进骨形成，增加骨密度达到治疗骨关节炎的作用。     

血浆和血清用作乙肝标志物检测标本的比较

当前酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝“两对半”常选用血清标本，很少选用血浆标本，有关血浆乙肝“两对半”的报道不多。本文用血浆标本检测乙肝“两对半”，并将结果与其相应的血清结果比较。1材料和方法1．1检测对象：我院门诊及住院病人125人，男性88人，女性37人，年龄17－58岁。1．2试剂：乙肝“两对半”试剂由中山生物工程公司提供；肝素钠抗凝管由广州阳普公司提供，规格为YPSH-75。1．3主要仪器：美国BIO－RAD3350－UV酶标仪和英国WILL－Ⅱ洗板机。1．4方法：抽取每个病人早晨空腹的静脉血置于抗凝管1支作为血浆组（Ⅰ…     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。     

转基因小鼠生化标志基因检测

用电泳法对中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司引进饲育的专利转基因IL－4T和IL－10T小鼠（各10只）进行了生化标志基因的检测。结果，IL－10T小鼠的10个位点和IL－4T小鼠的9个位点为纯合基因型，IL－4T小鼠的第9号染色体上的苹果酸酶位点有a和b两型．它们在第1号染色体上的异柠檬酸脱氢酶位点不同型，分别为b（IL－4T）、a（IL－10T）型。此外，IL-4T有5个位点不同于背景品系C57BL／6，IL－10T有3个位点不同于C57BL／6。     

地黄优良品种"85-5"脱毒苗的快速繁殖研究

目的 探索“85－5”脱毒苗的快速繁殖技术。方法 将脱毒苗接种在不同培养基（单位：mg／L）（1．MS）（1．MS＋BA＋0．5．MS＋BA0．5＋NAA0．02；3．MS＋BA0．5＋NAA0．02＋GA30．1；4．1／2MS＋BA0．1；5．1／2MS＋BA0．1＋GA20．1；6．1／2MS＋GA30．1）上，30d后统计新生叶片数、根数以及苗高等。然后选用2号培养基，在不同的培养条件下培养，同上记录有关数据。结果 在1，2和3号培养基上，具茎尖苗主茎发育良好，基部具1－3个腑芽；无茎尖苗腋芽发育， 芽长0．5－1．5cm。4，5和6号培养基上脱毒弱，叶少根多。在相同光照条件下，28℃时，各项测量均显著高于23℃时的值，在相同温度与，低光照培养，叶小苗高，强光则相反。此外，还发现BA和GA3之间存在拮抗作用。结论 在28℃，1000－2000lx培养条件下，采用2号培养基适于“85－5”脱毒苗的快速繁殖。