肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的：观察肺岩宁（Feiyanning,FYN）方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。 方法：建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组（肺岩宁加化疗组）。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果：肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组（P〈0．05）,而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）． 结论：肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。     

趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达

目的:观察趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)肺高、低转移细胞株中的表达,探讨趋化因子受体CXCR4表达在ACC肺侵袭转移中的作用.方法:选取ACC肺高转移细胞株(ACC-M)和低转移细胞株(ACC-2)以及舌癌-8113细胞株(Tca-8113),分别应用单克隆抗体免疫荧光标记流式细胞术和Western印迹检测CXCR4在上述3种细胞中的表达.结果:3种细胞表面均有CXCR4受体的表达,其中ACC肺高转移细胞株ACC-M表达阳性率为(77.32±6.96)%,显著高于肺低转移细胞株ACC-2的(35.32±6.71)%和舌癌Tca-8113细胞株的(33.82±5.56)%,(P<0.05).Western印迹结果证实3种细胞株均有特征性的蛋白质表达条带,其中ACC-M的蛋白质表达条带最为显著.结论:趋化因子受体CXCR4在ACC肺高转移细胞株中高表达,提示CXCR4可能与ACC嗜肺转移的生物学特性有关.     

趋化因子受体CXCR4在肺癌及转移淋巴结中的表达及其意义

目的探讨肺癌原发灶及淋巴结转移灶中趋化因子受体CXCR4的表达特点及其与临床病理特征的关系。方法对115例肺癌手术切除标本及59例淋巴结转移灶和20例癌旁正常肺组织采用免疫组化法检测CXCR4表达。结果CXCR4在52.2％（60／115）肺癌组织中呈阳性表达,20例癌旁正常组织中仅2例表达（10.0％）。59例肺癌原发灶和淋巴结转移灶中CXCR4高表达的阳性率分别为84.7％（50／59）和83.1％（49／59）,两部位CXCR4表达具有较高的同源性。CXCR4的表达与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度和组织学类型无关（P〉0.05）,而与肺癌患者的临床分期及有无淋巴结转移密切相关（P〈0.01）。结论CXCR4表达与肺癌淋巴结转移密切相关,CXCR4在肺癌原发灶及转移淋巴结中的表达具有较高的同源性。CXCR4的表达对指导手术方式的选择及非手术治疗选择靶点具有指导价值。     

CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究

目的 探讨CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响及可能机制。方法 设计合成CXCR4特异性短发夹状RNA(shRNA)插入pSilencer载体,转染人高转移性黑色素瘤细胞株MV3、RT-PCR和Western blot法检测shRNA对靶基因CXCR4表达的影响。利用Transwell小室模型检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞体外增殖能力。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射,将转染后的细胞接种至裸鼠皮下,构建黑色素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况。结果 CXCR4-shRNA能有效下调CXCR4基因的表达,降低黑色素瘤细胞增殖、体外侵袭及转移能力。RT-PCR及细胞免疫荧光显示,转染CXCR4-shRNA的黑色素瘤瘤MV3细胞系MMP-2表达下调;免疫组化结果显示,实验组裸鼠黑色素瘤瘤体及转移灶组织MMP-2的表达低于对照组。结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默在体外实验能够显著抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖活性,减弱体外侵袭能力,且体外产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力。其机制可能与SDF-1/CXCR4信号途径阻断,进而抑制MMP-2的表达有关。     

沉默CXCR4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究

目的 利用RNAi技术构建CXCR4 shRNA表达载体,观察CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖及侵袭能力的变化.方法 在不同分化程度胰腺癌细胞株中筛选出CXCR4高表达胰腺癌细胞株,RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体,转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,Real-time PCR、Western blot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;MTT实验检测CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖,应用Transwell侵袭小室观察CXCR4干扰对胰腺癌细胞侵袭转移力的影响.结果 胰腺癌细胞株Miapaca-2 CXCR4表达异常增高,特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70％以上.特异性CXCR4 shRNA能够抑制细胞生长,细胞达到对数生长期的时间延长(P＜0.05).Transwell实验证明CXCR4基因干扰后细胞侵袭能力减低(P＜0.05),即使SDF-1的刺激也不能够使细胞侵袭能力增加.结论 成功构建了针对胰腺癌细胞CXCR4的siRNA载体;CXCR4基因沉默能抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和成瘤能力.     

克瘤丸对Lewis肺癌生长转移及VEGF、MVD表达的影响

目的 研究中药复方克瘤丸对Lewis肺癌生长转移及VEGF、MVD表达的影响,进一步探讨克瘤丸的抑瘤、抗转移作用及部分机理.方法 建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,观察克瘤丸对Lewis肺癌生长、转移及VEGF、MVD表达的影响.结果 克瘤丸大、中、小剂量组及联合用药组抑瘤率和NS组相比差异有统计学意义(P<0.01);克瘤丸大剂量、中剂量组能抑制Lewis肺转移灶数,与NS组相比差异有统计学意义(P<0.01);克瘤丸大、中、小剂量组及联合组的MVD表达与NS组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);克瘤丸大剂量组、联合组对VEGF表达较NS组显著下调,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 克瘤丸能抑制Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长及肺转移;下调Lewis肺癌小鼠瘤体MVD、VEGF的表达.     

趋化因子受体CXCR4核定位表达与肾癌转移及预后的相关性

目的 探讨肾癌组织趋化因子受体CXCR4核定位表达与肾癌转移及预后的相关性。 方法 采用免疫荧光染色法检测413例肾癌组织CXCR4的亚细胞定位表达,根据染色结果分为核定位阳性表达组及核定位阴性表达组,对比分析两组患者的临床资料及预后。 结果 413例肾癌组织中170例CXCR4核定位阳性表达,243例CXCR4核定位阴性表达,两组基线资料差异无统计学意义。统计分析结果表明:与核定位阴性表达组相比,核定位阳性表达组Robson分期高、癌栓发生率高、淋巴结转移率高、远处转移率高,差异均有统计学意义(P <0.01)。核定位阳性表达组生存率为86.5%(147/170),低于核定位阴性表达组97.1%(236/243),差异有统计学意义(P <0.001) 。 结论 肾癌组织中CXCR4核定位表达与Robson分期高、癌栓形成、淋巴结转移、远处转移及患者预后差相关。     

转移力不同的肺癌细胞株对表皮生长因子和受体的表达

通过单细胞克隆技术及裸鼠接种从人肺巨细胞癌和腺癌细胞中筛选出高低转移力的克隆株（Ｊ１，Ｊ６，Ｘ１，Ｘ７），观察并比较其生物学特性，结果表明：转移力不同的细胞株形态学特征不同，且细胞的生长速度和移动能力和体内转移力不存在必然的联系。     

CXCL12和CXCR4在肾透明细胞癌转移淋巴结中的表达及意义

目的探讨趋化因子CXCL12和CXCR4在肾透明细胞癌和其转移淋巴结中的表达及其在淋巴结转移过程中的作用和可能机制。方法应用免疫组织化学SP法检测53例肾透明细胞癌原发灶及26例转移淋巴结中CXCL12和CXCR4表达的情况,并进行相关性分析。结果肾透明细胞癌转移淋巴结中的CXCL12的表达显著高于肾透明细胞癌原发灶,分别为76.9%(20/26)和35.8%(19/53),P<0.05。肾透明细胞癌转移淋巴结中的CXCR4的表达也高于肾透明细胞癌原发灶,分别为69.2%(18/26)和62.2%(33/53),但P>0.05。相关性分析发现CXCL12和CXCR4在肾透明细胞癌转移淋巴结组织中表达具有正相关性。结论 CXCL12和CXCR4在肾透明细胞癌转移淋巴结中高表达,两者在肾透明细胞癌的器官特异性转移中可能起协同作用,共同促进肾透明细胞癌的淋巴转移。     

AMD3100 对 Lewis 肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞积聚的影响

目的 观察趋化因子受体CXCR4拮抗剂AMD3100对Lewis肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells ,MDSCs)积聚的影响. 方法 60只荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠分为2组:PBS组(腹腔只注射PBS液,0.2 ml/只)、AMD3100组[腹腔注射溶解有2 mg/(kg*d) AMD3100的PBS液,0.2 ml/只,1次/d,共26 d],每组30只.隔日测2组小鼠体质量,记录成瘤时间.26 d随机处死2组荷瘤鼠各15只,剥离瘤体称量,观察肺转移灶数目,用免疫组化法计数瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD),流式细胞仪测小鼠脾脏MDSCs比例;统计2组剩余小鼠自然生存天数. 结果 PBS组、AMD3100组小鼠Lewis肺癌成瘤时间分别为(8.03±1.47)、(9.97±1.50) d,接种瘤细胞后26 d瘤质量分别为(3.54±0.93)、(2.09±0.66)g,MVD值分别为(41.40±6.44)、(32.47± 5.33)个/HP,肺癌肺转移灶数目分别为(18.27±9.78)、(7.40± 5.83)个/只,MDSCs比例分别为(19.57±3.59)%、(31.42±5.04)%,中位生存时间分别是第29、34天,2组各项指标比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 AMD3100可延缓Lewis肺癌进展,但可能对荷Lewis 肺癌小鼠免疫产生一定的抑制作用.     

miR-223在CXCR4~+Lewis肺癌细胞中的显著低表达及其靶基因预测

目的 分析miR-146a、miR-206、miR-223、let-7c-1等细胞分化相关miRNAs,在小鼠Lewis肺癌细胞株(theLewis lung cancer cell lines,LLC)CXCR4~+与CXCR4~-亚群间的差异表达.方法 免疫磁珠分选CXCR4~+和CXCR4~-LLC细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,实时荧光定量PCR(TaqMan探针)检测miRNAs表达,对表达差异最为显著的miRNAs进行潜在靶基因预测,应用免疫组化方法 初步分析具有研究价值的关键分子在两个不同亚群小鼠种植瘤组织中的表达情况,并通过BLAST对其3'非翻译端(untranslated region,UTR)进行直向同源基因序列比对分析.结果 CXCR4~+与CXCR4~-LLC比较,各检测mirna表达均较低,其中以miR-223差异最为显著(Fold Change=8.26),通过软件分析预测,miR-223与IGFIR、IGFBP5、Pik3cb、ELK-1和E2F1等基因均具有可能靶位点,免疫组化检测发现CXCR4~+亚群种植瘤组织IGFIR表达显著高于CXCR4~-亚群,IGF1R 3'UTR的238～244 nt和688～695 nt两个结合位点具有高度的进化保守性.结论 miR-223在CXCR4~+LLC中显著低表达,可能与肺腺癌细胞IGFIR信号通路调控有关.     

CXCR4阳性Lewis肺癌细胞具有促发新生血管形成的特征

目的 研究CXCR4阳性Lewis肺癌细胞(LLC)在新生血管形成时的始动作用.方法 激光共聚焦检测LLC细胞系中CXCR4抗原表达情况,观察小鼠移植瘤组织内CXCR4阳性LLC与新生血管的毗邻关系;以CXCR4作为磁珠分选细胞的表面标志,检测CXCR4阳性和阴性LLC中VEGF、MMP9 mRNA表达情况,同时免疫组化检测两亚群细胞移植瘤中VEGF、MMP9以及CD31表达情况.结果 CXCR4阳性LLC多毗邻内皮细胞,周围形成血管样结构;CXCR4阳性LLC的VEGF mRNA表达(0.439 8±0.059)明显高于CXCR4阴性LLC (0.289 9±0.003 1)(P＜0.01);CXCR4阳性LLC的MMP9 mRNA表达(0.622 3±0.013 6)明显高于CXCR4阴性LLC(0.579 2±0.017 4)(P＜0.05);CXCR4阳性LLC移植瘤组织MVD(56.87±4.83)明显高于CXCR4阴性LLC移植瘤(43.52±4.91)(P＜0.01). 结论 LLC中的CXCR4阳性亚群具有更强上调VEGF、MMP9表达的能力,具有促发新生血管形成的特征.     

VEGF真核双表达载体构建及对Lewis肺癌体外侵袭能力的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)基因转染后对Lewis肺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法利用基因重组技术构建了含全长 VEGF cDNA的真核双表达载体,脂质体法转染Lewis肺癌细胞株.借助Boyden小室膜侵袭培养系统观察转染后Lewis肺癌细胞对基底膜侵袭能力的改变.结果转染后下室浸润的癌细胞数为(48±1.0),显著高于空载体转染对照组(27±0.4)(P<0.05), 表明转染pEGFP-VEGF表达载体的Lewis细胞系侵袭能力增强.结论 VEGF诱导Lewis肺癌转移的机制可能与增强肿瘤细胞的迁移能力有关.     

芪加合剂对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的　研究芪加合剂对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌的影响。方法　观察 Ｌｅｗｉｓ 肺癌小鼠的生存时间和瘤重。结果　芪加合剂（１３７５ ～２７５０ ｇ·ｋｇ － １） 治疗或预防给药均能延长 Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠平均生存时间；对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌瘤重增长有明显抑制作用，并可抑制其自发性肺转移。结论　芪加合剂对肺癌可能具有明显抑制作用。     

CXCR4和MMP-13在非小细胞肺癌中的表达

目的 检测趋化生长因子受体4（CXCR4）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在非小细胞肺癌中的表达,探讨二者与非小细胞肺癌临床病理特征的关系,以期为临床工作提供理论支持。方法 应用免疫组织化学技术检测75例非小细胞肺癌及50例正常肺组织中CXCR4和MMP-13的表达,探讨二者与肿瘤分化程度及淋巴结转移的关系。结果 非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13表达的阳性率明显高于正常肺组织。CXCR4和MMP-13的表达与非小细胞肺癌的胸膜侵犯、分化程度及有无淋巴结转移密切相关,非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13的表达呈正相关。生存分析显示,CXCR4和MMP一13高表达患者的预后差。结论 非小细胞肺癌中CXCR4和MMP-13高表达,二者共同促进肿瘤的发生发展,联合检测CXCR4和MMP-13可能与患者的预后有关。     

CXCR4 和CXCR7 在肾透明细胞癌 组织中的表达及其临床意义

目的 探讨趋化因子受体4（CXCR4）蛋白和趋化因子受体7（CXCR7）蛋白在肾透明细胞癌 （ccRCC）组织中的表达及其相关性。方法 采用免疫组织化SABC 法检测50 例ccRCC 及20 例癌旁正常 组织中CXCR4 和CXCR7 蛋白的表达。结果 ccRCC 组织中CXCR4 和CXCR7 表达高于癌旁正常组织 （P <0.05）;两者表达与ccRCC 组织的临床分期、病理分级及淋巴结转移关系密切（P <0.05）,与性别、年 龄及肿瘤体积无关（P >0.05）;在ccRCC 组织中,CXCR4 与CXCR7 表达呈正相关（r s=0.467,P =0.001）。 结论 CXCR4 和CXCR7 在ccRCC 组织中呈高表达,两者对ccRCC 的发生、发展及转移有协同作用。     

人肺癌细胞系NCI-H1650中肿瘤干细胞的分离及鉴定

目的 在人肺癌细胞系NCI-H1650中分离出肺癌干细胞及鉴定.方法 将NCI-H1650细胞在含人胰岛素、重组人表皮生长因子(EGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、牛血清清蛋白(BSA)的无血清培养基中连续培养 ,用紫杉醇刺激诱导干细胞 ,通过流式细胞术、免疫荧光的方法分析肺癌干细胞标志物CD133和CD326的表达;采用RT-PCR和Western blot的方法检测干细胞相关标记物Oct4、Nanog和Sox-2的表达.结果 经无血清连续培养结合紫杉醇诱导的NCI-H1650细胞呈球形悬浮生长 ,相比于有血清培养的NCI-H1650细胞 ,其干细胞标志物CD133和CD326高表达 ,干细胞相关标志物Oct4、Nanog和Sox-2表达水平提高(P＜0 .05).结论 采用体外无血清连续培养结合紫杉醇刺激诱导 NCI-H1650细胞能有效分离出其中干细胞.     

脐带间充质干细胞对C57BL/6小鼠Lewis肺癌生长及转移的影响

目的 利用Lewis肺癌动物模型探讨脐带来源的间充质干细胞(MSC)对肺癌生长及转移的影响.方法 用16只C57BL/6小鼠分别建立Lewis肺癌模型,并随机分为对照组(NS组)和MSC组,每组8只.MSC组分别于接瘤后第7、12、17天时,尾静脉注射脐带MSC(1×106/只),在第21天时处死全部荷瘤小鼠,观察瘤体生长情况及肺转移情况.结果 NS组和MSC组的平均瘤体质量分别为(4.587 5±1.04)g、(4.155±1.13)g,两组相比差异无统计学意义(P=0.59).NS组和MSC组的平均肺转移数分别为(3.75±1.39)个、(1.13±1.13)个,两组相比差异有统计学意义(P＜0.01);抑制转移率为70.0％.结论 脐带来源的MSC对C57BL/6小鼠Lewis肺癌本身的生长无影响,但能够抑制肿瘤的转移.     

稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株的构建

目的应用RNA干扰技术降低肾癌A498细胞株的CXCR4基因表达水平,并建立稳定转染细胞株。方法针对CXCR4基因设计合成siRNA,转染肾癌A498细胞株,采用RT-PCR法检测CXCR4基因表达变化,根据有效干扰片段结果合成重组shRNA质粒,稳定转染至A498细胞系并进行G418抗性筛选细胞株。采用RT-PCR和Westen印迹法检测CXCR4mRNA及蛋白表达水平,应用流式细胞技术检测CXCR4shRNA诱导A498细胞凋亡的效应,Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变。结果将CXCR4重组shRNA质粒成功转染A498细胞后,肾癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了CXCR4基因沉默的A498细胞系,RT-PCR及Western印迹检测证实该细胞系的CXCR4水平明显低于对照组的表达水平(P<0.05)。CXCR4shRNA组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均显著高于对照组(P<0.05),Tran-swell体外侵袭实验显示CXCR4shRNA能明显抑制A498细胞的体外侵袭力(P<0.05)。结论成功构建稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株,转染后的细胞凋亡率升高,体外侵袭能力降低,为后续研究奠定了基础。