转染FcγRⅡb1基因纠正SLE患者B细胞的过度活化

目的观察转染FcγRⅡb1基因能否纠正SLE患者B细胞的过度活化。方法构建人FcγRⅡb1基因真核载体,通过电穿孔转染SLE患者B细胞。分别采用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]和抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)2种抗体刺激B细胞,同时以正常人B细胞作对照。采用分光光度计检测激活B细胞胞内[Ca2+]i反应,3H-TdR掺入法检测B细胞的增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌抗体的功能。结果分别以F(ab’)2anti-μ和IgG anti-μ激活SLE患者B细胞后,细胞内[Ca2+]i反应、cmp值及IgG分泌量的比值均显著低于正常人(P0.01),通过转染FcγRⅡb1基因后,这些比值均显著提高(P0.01或P0.05)。结论转染FcγRⅡb1基因能有效纠正SLE患者B细胞过度的活化、增殖及抗体分泌。     

类风湿关节炎患者血清IgG-IgM型类风湿因子免疫复合物检测的临床意义

目的 探讨血清IgM型类风湿因子与变性IgG抗原形成的复合物定量检测对类风湿关节炎诊断的临床意义.方法 收集类风湿关节炎(RA)患者36例、非RA患者41例和体检健康者40名作为研究对象.用包被有鼠抗人μ链抗体的ELISA孔板及HRP标记的兔抗人IgG对血清中IgM型类风湿因子(RF)与变性IgG抗原形成的免疫复合物水平进行检测,同时用胶乳凝集法检测RF,并对二者结果进行相关性分析;用ELISA试剂盒进行抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)的定性检测,并比较其与IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA诊断的敏感性和特异性.结果 待检血清最佳稀释倍数为100倍.IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA的敏感性为72.2％,特异性为95.3％.IgG-IgM型RF免疫复合物OD值与RF阳性程度相关系数为0.687(P ＜0.01).结论 血清IgG-IgM型RF免疫复合物水平对RA具有较高的敏感性和特异性,可作为RA诊断的参考指标.     

FcγRⅡB1介导的信号传导异常与SLE患者B细胞的过度活化

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态,评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC),并以免疫磁珠法(MACS)分离纯化B细胞。采用荧光分光光度法检测B细胞受不同激活物刺激后细胞内钙([Ca2 ]i)的反应。用ELISA法检测B细胞与刺激物共同培养后所分泌IgG的量。采用流式细胞术及间接免疫荧光染色法,检测B细胞膜表面CD32、CD19及IgM的表达水平。结果:(1)以羊抗人μ链的F(ab′)2片段及完整IgG分别刺激SLE患者B细胞时,其[Ca2 ]i反应的比值显著低于类风湿性关节炎(RA)患者(P<0.05)及正常人对照(P<0.01)。(2)分别用葡萄球菌A蛋白(SPA)单独刺激与SPA和羊抗人μ链的完整IgG抗体共同刺激SLE患者的B细胞所分泌的IgG的比值,明显低于RA患者及正常人对照组(P<0.05)。(3)SLE患者与RA患者及正常对照组B细胞上CD19、CD32及IgM的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:SLE患者B细胞上CD32抑制性信号传导的异常,可能是导致B细胞过度活化的重要机制。     

抗ABCA1自身抗体在SLE患者动脉粥样硬化发病机制中的意义

检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)抗体及探讨其致SLE早发动脉粥样硬化(AS)的机制。采用免疫印迹法检测75份SLE患者血清中抗ABCA1自身抗体。75份性别年龄匹配正常人血清为对照。观察抗ABCA1抗体阳性患者血清IgG对细胞胆固醇流出的影响。结果显示,SLE患者血清中存在抗ABCA1抗体,阳性率为29.3%,正常人中无一阳性(P<0.05)。SLE有斑块组的抗ABCA1抗体阳性率高于SLE无斑块组(43.8%和16.3%,P<0.05)。纯化的抗ABCA1抗体阳性SLE患者IgG体外可抑制THP-1细胞内胆固醇的流出,抑制率最高可达28.7%,正常人IgG抑制率相比有显著性差异。实验表明,SLE患者血清中抗ABCA1抗体阳性率明显高于正常人,且纯化的抗AB-CA1抗体阳性患者IgG在体外能抑制细胞内胆固醇的流出,从而促进SLE患者早发动脉粥样硬化的发生。     

FcγR Ⅱ a基因多态性、中性粒细胞胞浆抗体、循环免疫复合物在系统性红斑狼疮发病肿饔玫难芯靠

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)病人FcγR Ⅱ a受体的基因型及其分布情况,检测了血清中的中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、循环免疫复合物(CIC).分析三者之间的关系和其与SLE的关系,从基因表达、转录及表达产物的作用三个层次探讨了SLE的发病机制.方法 收集69例SLE病人与48例健康人的标本,采用巢式PCR对FcγRⅡa基因进行分型,RT-PCR检测该基因的转录,采用ELISA方法对血清中的ANCA和CIC进行检测.结果 FcγR Ⅱ a-R131纯和子的分布在SLE患者组与正常对照组之间有统计学意义(P<0.02).三种基因型在狼疮病人中(分别为45%Fcγ/RⅡa-R/R131、30%H/R 131和25%H/H131)与正常对照组(21%FcγR Ⅱ a-R/R131、52%H/R131和27%H/H131)之间不同.FcγRⅡ a-R/R131基因型转录产物在SLE患者组与正常对照组之间有有统计学意义(P<0.02),此结果与分型结果一致.在FcγR Ⅱ a-R/R131基因型中抗ANCA阳性率为67.9%,CIC阳性率67.4%,与FcγRⅡ a-H/R131和FcγRⅡ a-H/H131两个基因型(ANCA:21.4%H/R131和10.7%H/H131;CIC:18.4%H/R131;14.0%H/H131)之间有统计学意义(P<0.05).ANCA与CIC的阳性率在H/R131与H/H131基因型之间无统计学意义(P0.2).结论 FcγR Ⅱ a-R/R基因型可能是云南汉族SLE病人的遗传易感因素,其在体内的过度表达可能是造成SLE患者血清中ANCA和CIC含量增高进而导致SLE发生的一个重要原因.     

银屑病与皮肌炎患者血清中3种抗磷脂抗体的检测

目的检测银屑病和皮肌炎患者血清中3种抗磷脂抗体的水平。方法应用ELISA检测银屑病和皮肌炎患者血清中的抗磷脂抗体,并分析与患者临床病理特征的关系。结果与正常人相比,银屑病和皮肌炎患者3种IgG型抗磷脂抗体的吸光度(A值)均显著升高;而银屑病的3种IgM型抗磷脂抗体的A值均显著降低,皮肌炎患者的3种IgM型抗磷脂抗体的A值均显著升高。结论红斑鳞屑性疾病银屑病与自身免疫性疾病皮肌炎在IgG型抗磷脂抗体表达上趋势相同,推测二者在发病机制上可能存在共同之处。     

活化淋巴细胞与慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型的比较

目的 :将本室建立的用活化淋巴细胞诱导的系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型与国际上公认的用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型进行比较 ,进一步探索SLE的发病机理。方法 :分别将亲代Balb c小鼠淋巴细胞经静脉和用ConA活化的(Balb c×C5 7BL 6 )F1代小鼠淋巴细胞经皮下途径输入F1代小鼠 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)荧光核型和肾小球内免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法检测抗可溶性核抗原 (ENA)抗体。结果 :亲代淋巴细胞免疫F1代小鼠所致的慢性GVHR和活化F1代小鼠淋巴细胞均可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等ANA ,并且肾脏都有明显的IgG类免疫复合物沉积。但亲代淋巴细胞免疫组ANA核型以颗粒型、核仁型为主 ,ENA多肽谱多在 32、47、6 7kD处显色 ;而活化淋巴细胞免疫组以胞浆型、周边型、均质型为主 ,ENA多肽谱在 2 8、47、6 7kD处显色。结论 :这 2种方法均可诱导出SLE样综合征 ,但其抗核抗体谱有所不同。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心法和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS病人血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清,102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的确是HFRS病毒特异性抗体。对ELISA的某些试验条件作了讨论,并认为,McAb-ELISA在帮助临床早期诊断及血清流行病学调查等方面均有实用价值。     

肺结核患者血清sE-选择素的水平及临床意义

目的:探讨血清可溶性E-选择素(sE-selectin)在肺结核的变化及其临床意义。方法:应用双抗体夹心ELISA法分别检测40例未治疗及20例治疗2月后肺结核患者、20例健康正常人血清sE-选择素水平。结果:肺结核血清sE-选择素水平明显高于正常对照(P<0.01),其中血行播散型肺结核(Ⅱ型)组明显高于继发型肺结核(Ⅲ型)(P<0.01)。抗结核治疗2月后血清中的sE-选择素水平明显下降(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:研究表明血清sE-选择素作为重要的免疫分子可能参与肺结核发病及免疫机制,可作为肺结核患者病情判断及治疗预后的参考指标。     

FcγR基因多态性与系统性红斑狼疮发病相关性研究进展

FcγR家族属于免疫球蛋白超家族，分三群，其中FcγRⅡa、 IIb 、IIIa 和 IIIb存在基因多态性，并因此影响FcγR和IgG各亚型的亲和力，被认为与SLE发病过程中免疫复合物清除有关，导致SLE和狼疮肾炎的发生。FcγR基因多态性与SLE发病关系在不同种族人群中的研究结果不一致，但仍可认为FcγR基因是某些种群SLE发病的易感基因。     

抗磷脂抗体与狼疮性肾炎的相关性研究北大核心CSCD

目的:探讨抗心磷脂抗体(aCL)IgG、IgM、抗β2-糖蛋白1(β2-GP1)抗体IgG、IgM及其他指标与狼疮性肾炎(LN)和系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法:检测LN及无肾脏累及的SLE患者aCL(IgG、IgM)、抗β2-GP1抗体(IgG、IgM)、C3、C4、抗ds-DNA抗体、肌酐、尿蛋白等指标,判断其与LN和SLE疾病相关程度。结果:LN组与无肾脏累及的SLE组患者肌酐、尿蛋白定量和IgG型抗β2-GP1差异有统计学意义(P=0.005、P=0.000、P=0.003);IgG、IgM型aCL、IgM型抗β2-GP1抗体阳性率、抗ds-DNA抗体、C3、C4水平差异无统计学意义(P>0.05)。进一步对SLEDAI评分分组,LN组IgG型aCL(P=0.048,r=0.318)与LN疾病活动呈弱正相关,而C3(P=0.005,r=-0.439)与LN疾病活动呈中等程度的负相关;LN组IgM型aCL、IgG、IgM型抗β2-GP1抗体浓度、尿蛋白定量、抗ds-DNA抗体、C4、肌酐水平与疾病活动程度无相关性(P>0.05)。无肾脏累及的SLE组以上各项指标与疾病活动程度均无相关性(P>0.05)。结论:LN患者血清中C3、IgG型aCL与疾病进展相关,可作为LN疾病诊治过程中的辅助诊断指标。     

FcγR基因多态性与系统性红斑狼疮相关性研究进展

FcγR家族有三群 (CD6 4、CD32、CD16 ) ,其中FcγRIIa、IIIa、IIIb存在基因多态性 ,并因此影响FcγR对抗体的亲和力 ,被认为与SLE发病过程中免疫复合物清除障碍有关 ,导致SLE和狼疮肾炎的发生。在不同种族人群中的研究存在不同的结果 ,但仍然可以认为 ,FcγR基因多态性在某些种群的SLE发病过程中起到重要作用     

免疫复合物检查法之一——Clq结合试验

免疫复合物主要是由 IgG、IgM 构成的,它能在这些抗体的 Fc 部位与补体 Clq结合。另外,向免疫复合物中加入2.5%聚乙烯乙二醇(PEG)时,它可形成沉淀物。     

支气管肺炎患儿机体免疫功能变化的分析

目的通过对支气管肺炎患儿T细胞亚群、血清免疫球蛋白、血清补体及细胞因子变化的分析,探讨小儿支气管肺炎机体免疫功能状态及免疫学发病机制,为临床了解病情、选择适当的治疗方案提供理论依据。方法支气管肺炎组65例,男39例,女26例,年龄2个月～13岁,平均年龄4.1岁。对照组20例,男12例,女8例,年龄1～12岁,平均年龄4.3岁。应用多色流式细胞术检测T细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Ts、CD3+CD4+Th/CD3+CD8+Ts)、应用免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、血清补体(C3、C4)、应用ELISA法检测血清细胞因子(IFN-γ、IL-4)。结果支气管肺炎组T细胞亚群改变明显,CD3+、CD3+CD4+Th显著低于对照组,有统计学意义(P<0.01);CD3+CD8+Ts显著高于对照组,有统计学意义(P<0.01);CD3+CD4+Th/CD3+CD8+Ts比值降低,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05)。支气管肺炎组血清IgA、IgG水平显著低于对照组,有统计学意义(P<0.01);支气管肺炎组血清补体C3低于对照组,有统计学意义(P<0.05)。支气管肺炎组血清细胞因子IFN-γ浓度及Th1/Th2比值高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论支气管肺炎患儿存在细胞免疫和体液免疫功能紊乱,对支气管肺炎患儿检测免疫功能有助于判断病情、指导治疗。     

高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究

目的 通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果.方法 以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HA inhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其lgG和slgA抗体效价.结果 H5NI+MF59组血清抗体效价较H5NI组有显著升高(P＜0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势.12μg腭后抗体效价呈下降趋势,以HSNI+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IrA、IsG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主.结论 灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IsG,为高致病人禽流感病毒I-15N1黏膜疫苗的研制奠定了基础.     

自身免疫性疾病患者血清抗bFGF自身抗体的检测及对疾病诊断价值的临床分析

为探讨自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)患者血清中抗碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)自身抗体水平及对患者的诊断价值,回顾性收集2015年3月至2017年5月医院收治的AID患者80例为观察组,取同期入院健康体检者80例为对照组。采用ELISA检测2组患者血清中抗bFGF抗体IgM和IgG水平。结果显示80例AID患者经过检测血清中抗bFGF自身抗体均得到确诊,排在前3位的分别为SLE、RA及慢性肾炎,分别占28.75%、22.50%和18.75%;观察组bFGF水平高于对照组(t=7.572,P0.05);观察组中SLE、不明原因发热患者抗bFGF IgM抗体与对照组比较差异无统计学意义;观察组RA、皮肌炎及特发性血小板减少性紫癜患者抗bFGF IgG抗体阳性率高于对照组(P0.05);观察组RA、慢性肾炎、皮肌炎、特发性血小板减少性紫癜患者抗bFGF IgM抗体水平高于对照组(P0.05)。由此AID患者血清中存在bFGF自身抗体水平升高现象,加强抗bFGF自身抗体水平测定有助于AID的诊断,值得推广应用。     

应用FITC-SPA菌体检测人外周血中SmIgG的B淋巴细胞

SPA具有与人IgG的Fc段结合的特性,将荧光素标记在含有SPA的金黄色葡萄球菌菌体上,直接和人的B淋巴细胞混和,FITC-SPA菌体能粘附在SmIgG+的细胞表面,便于计数。我们用该方法共检测正常人、SLE病人、PSS病人等67例的B淋巴细胞标本,同时用FITC-抗IgG作为对照组,两组在统计学上无显著差别(P>0.05)。     

ICAM-1 参与系统性红斑狼疮中免疫球蛋白产生的实验研究

目的:探讨ICAM-1在系统性红斑狼疮(SLE)免疫球蛋白产生中的作用。方法:流式细胞术检测分析SLE患者、健康者、anti-CD3 Ab/IFN-α刺激健康者CD4~+T细胞及Pristane诱导的狼疮样小鼠及对照鼠中CD4~+T细胞的活化表型;分选获得Pristane处理小鼠来源的CD4~+T细胞和B细胞,并于体外交叉共培养,加入ICAM-1阻断抗体或同型对照抗体,ELISA检测培养上清中IgG和IgM水平。结果:SLE患者及anti-CD3 Ab/IFN-α刺激健康者CD4~+T细胞表达HLA-DR,CD69和ICOS等分子的细胞比例明显高于对照组。Pristane诱导的狼疮样小鼠CD4~+T细胞的活化程度也显著高于对照;Pristane诱导的狼疮样小鼠血清中抗snRNP和抗dsDNA自身抗体水平显著高于对照组;Pristane处理小鼠来源的活化CD4~+T细胞与B细胞共培养可以促进B细胞产生IgM和IgG。而经抗ICAM-1抗体阻断处理的培养上清中IgM含量低于对照组,而IgG含量显著高于对照组。结论:Pristane来源的活化CD4~+T细胞可促进B细胞分化,ICAM-1分子可能在B细胞分化早期发挥作用,但不利于IgM型向IgG型的类别转换,为ICAM-1在SLE中抗体类别转化的分子机制提供新的理论依据。     

系统性红斑狼疮患者抗β2-糖蛋白Ⅰ抗体检测及其临床意义

目的 探求抗β2-糖蛋白Ⅰ(β2glyeoprotein Ⅰ,β2-GP Ⅰ抗体IgG、IgA、IgM在系统性红斑狼疮(SLE)临床的测定.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100例SLE患者、39例疾病对照组(包括类风湿关节炎、硬化症、干燥综合征、自身免疫性肝病和混合性结缔组织病)和30例正常人群血清抗β2-GP 1抗体、抗心磷脂抗体(ACL)IgC、IgA、IgM等指标,分析其与临床特点(如血栓、流产)的关系.结果 SLE组抗β2-GP Ⅰ抗体(IgG、IgA、IgM)浓度高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为17.2%、95.7%、85.0%、44.6%.β2-GPⅠ抗体(IgG、IgA、IgM)与ACL抗体(IgG、IgA、IgM)两者呈正相关(r值分别为0.418、0.624、0.518、0.583,P<0.01).以SLE DAI为因变量对β2-GPⅠ抗体、ACL抗体、dsDNA、u1-RNP、Sm、SSA、SSB、Sc1-70、Jo-1、P.蛋白、PT、APTT进行Logistic回归统计分析,入选的自变量有β2-GPⅠ·IgC和dsDNA.结论 抗β2GP Ⅰ抗体在SLE中具有一定敏感性和较高的特异性,与SLE的血栓形成相关,且抗β2-CPⅠ抗体IgG是SLE疾病活动性危险因素之一.检测抗β2-GPⅠ抗体在SLE中存在一定临床应用价值.     

抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β_2糖蛋白1抗体在系统性红斑狼疮患者中的意义

目的探讨抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中的意义。方法分别采用化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附法检测372例SLE患者、80例其他结缔组织病患者及60例健康体检者血清中抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体。同时分析这4个指标与SLE及其病情严重程度的相关性。结果在检测的372例SLE患者组中,抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体的阳性率分别为31.45%、14.52%、10.22%和29.03%,其表达水平分别为(90.39±35.43)U/ml、(41.25±23.16)U/ml、(32.27±15.77)U/ml、(61.42±21.69)U/ml,与SLEDAI积分呈正相关(P0.05)。在80例疾病对照组中,抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体的阳性率分别为7.50%、2.50%、0和1.25%。而在60例正常对照组中,4项检测结果均为阴性。抗IgG型心磷脂抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、血栓形成、习惯性流产和肾脏病变有关;抗IgM型心磷脂抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、血栓形成和肾脏病变有关;抗IgA型心磷脂抗体阳性与血小板减少、血栓形成和肾脏病变有关;抗β_2糖蛋白1抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、溶血性贫血、血栓形成、习惯性流产和肾脏病变有关。结论抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β_2糖蛋白1抗体在SLE的发病及病情发展中起到了非常重要的作用,定量和联合检测对SLE的诊断、病情严重程度的评价、判断预后及疗效观察等均有重要的临床意义。