脂多糖介导的血管平滑肌细胞血红素

目的:研究脂多糖(LPS)作用下的血管平滑肌细胞血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,并探讨HO/一氧化碳(CO)调节通路在内毒素性血管调节功能障碍中的作用。方法:10mg/L、30mg/L及50mg/L的LPS与培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)共同孵育6h,以及10mg/LLPS与VSMC共同孵育9h和18h。分别观察细胞丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法记录VSMC蓝染率的变化;Northern杂交测HO-1mRNA表达。结果:VSMCHO-1mRNA表达随LPS浓度的增大而增加,LPS50mg/L时HO-1mRNA表达比对照高176.7%;低剂量LPS(10mg/L)诱导VSMCHO-1mRNA的表达量随诱导时间的延长而增加,18h组HO-1mRNA的表达量比对照高195.6%。只有当LPS浓度增加至50mg/L及10mg/L孵育18h时,细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH活性明显增加、细胞出现损伤。结论:LPS可诱导VSMCHO-1mRNA的表达且具有浓度依赖性和时间依赖性,HO/CO可能为介导内毒素性血管平滑肌功能调节障碍的重要通路。     

大鼠钙化血管平滑肌细胞血红素加氧酶-CO-cGMP通路的变化

本文旨在观察钙化细胞血红素加氧酶 (HO) -一氧化碳 (CO) -环磷酸鸟苷 (cGMP)系统的改变 ,以探讨血管钙化发生的细胞分子机理。利用 β 甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性及4 5Ca沉积 ;观察HO 1免疫细胞化学染色 ;测定VSMCsHO 1活性、碳氧血红蛋白 (HbCO)的生成及cGMP含量。发现钙化细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性及4 5Ca沉积均比正常组显著升高。钙化细胞HO 1的表达不均匀 ,钙化结节中HO 1表达强于正常细胞。与正常平滑肌细胞相比 ,钙化细胞的HO 1活性低 4 2 7% [36 4± 2 8pmol (mgprotein·h)vs 6 3 5± 5 3pmol (mgprotein·h) ,P <0 0 1];CO含量低 39 2 % (3 38± 0 39μmol mgproteinvs 5 5 6± 0 4 8μmol mgprotein ,P <0 0 5 ) ;cGMP含量比正常细胞低 78 1% (4 3± 0 5vs 19 6± 1 2pmol mgprotein ,P <0 0 1)。提示钙化血管血红素 HO CO cGMP途径功能下调     

CO/HO体系影响缺氧性肺动脉高压幼年大鼠肺动脉超微结构的研究

目的 探讨血红素加氧酶，一氧化碳(HO/CO)体系对缺氧性肺动脉高压幼年大鼠肺动脉超微结构的影响。方法 将26只Wistar大鼠随机分为4组：对照组、低氧组、低氧 锌原卟啉(ZnPP)组和低氧 一氧化碳(CO)组。以右心导管法测定肺动脉压力，并对大鼠肺动脉进行超微结构观察。结果 低氧组大鼠肺动脉超微结构发生明显改变：内皮细胞呈柱状，部分核突入管腔，排列呈栅状，内皮细胞肿胀，胞浆内可见大量空泡，线粒体肿胀，内质网扩张；平滑肌细胞胞体肥大，胞浆中肌丝和致密斑减少。线粒体、粗面内质网和游离核糖体等三田胞器增多。约半数平滑肌细胞处于收缩表型，余呈过渡表型或合成表型，有肺血管结构重构形成。低氧 ZnPP组肺血管结构重建程度较低氧组加重：内皮细胞呈柱状，呈栅状排列，部分脱落致管腔，胞浆内可见大量空泡，线粒体肿胀，内质网扩张；平滑肌细胞形态不规则，胞体肥大，胞浆中肌丝和致密斑明显减少，粗面内质网和游离核糖体等细胞器明显增多。低氧组 CO组肺血管结构重建程度较低氧组减轻；内皮细胞胞体扁平，内衬血管内壁，其肿胀程度较低氧组减轻，空泡明显减少；平滑肌细胞改变较低氧组为轻，约半数平滑肌细胞处于收缩表型，余呈合成表型或过渡表型。结论 HO/CO系统对缺氧性肺动脉高压的形成以及缺氧性肺血管结构重建有重要的调节作用。     

HO/CO系统对血管内皮细胞保护作用的研究进展

血红素加氧酶是催化血红素氧化降解的起始酶和限速酶,HO催化血红素生成CO、胆绿素及铁,胆绿素及其代谢物胆红素均为强氧化剂.CO是一种新的气体信息分子和血管舒张因子.HO/CO系统对血管内皮细胞有强大的保护作用.     

骨髓间充质干细胞构建组织工程化小口径血管

目的采用在动物体外构建初级组织工程化血管、体内强化的方法,探讨构建小口径组织工程化血管的可能性.方法体外培养骨髓间充质干细胞(BMSC),用含全反式维甲酸(AT-RA)、双丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)的DMEM-LG培养液和含血管内皮细胞生长因子(VEGF)的培养液诱导BMSC分别向血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞分化.免疫荧光观察平滑肌样细胞β肌动蛋白的表达和内皮样细胞vWF的表达.电镜观察超微结构的改变.诱导的血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞,分层种植于胶原包埋聚乙醇酸(PGA)的复合支架表面,将细胞和支架复合体种植于动物皮下,于植入后第4、8周再次麻醉动物,取出植入皮下的组织工程化血管,行组织学检查、压力实验及免疫荧光检查.结果诱导14 d后,BMSC能够分化为血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞:β肌动蛋白和vWF呈阳性表达,电镜证实细胞出现了相应的形态学改变.人工血管组织学观察见管壁结构清晰.单纯支架组可承受100～150 mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)的血管腔内压力,实验组则均可承受200mm Hg的血管腔内压力不破裂.实验组皮下培养8周Brdu标记细胞的免疫荧光结果显示部分细胞核呈现明亮的黄绿色荧光.结论以动物皮下为生物反应器可构建出组织工程化血管,其大体结构和天然血管相似.     

HO-1表达增多对心肌重构的阻抑作用

心肌重构是许多心血管疾病如高血压等共同的重要病理改变 ,也是这些疾病的难治性所在。心肌重构是在局部氧化应激反应和机械刺激等因素的长期作用下所发生的局部细胞的过度增生与肥大 ,同时伴有细胞表型的改变。一般认为 ,自由基损伤和长期负荷过重可导致心肌重构 ,而抗氧化物和扩血管物质具有阻抑作用。血红素加氧酶 - 1(hemeoxygenase - 1,HO -1)除其本身的细胞保护作用外 ,其催化产物胆绿素、胆红素和一氧化碳 (carbonmonoxide,CO)分别具有抗氧化损伤、抑制心肌细胞肥大、抑制血小板聚集和扩张血管等作用。HO - 1/CO通路可能是抵御心…     

败血症休克大鼠肾脏血红素加氧酶的变化及作用

血红素加氧酶(hemeoxygenase,HO)是血红素代谢过程中的起始、限速酶,其生理功能为催化血红素降解,生成胆绿素、一氧化碳(carbonmonoxide,CO)和亚铁.近年来的研究结果表明,HO的生物学效应并不局限于此,其催化产物同样具有重要的生物学功能,如胆绿素及其还原产物胆红素是目前已知体内最强的抗氧化物质.可诱导型血红素加氧酶(HO-1)除受血红素调节外,在许多病理情况下均可被诱导产生.败血症休克系由革兰氏阴性菌感染所致,通过细菌壁释放的内毒素引起细胞因子及血管活性物质的产生,导致包括肾脏在内的重要器官功能的损伤.调动内源性保护机制、改善重要器官功能已成为败血症休克领域的研究重点.本研究以盲肠结扎穿孔法复制大鼠败血症休克模型,系统地观察肾脏HO活性和HO-1mRNA表达的动态变化,以探讨HO在脓毒血症器官损伤病理演变过程中的作用.目的探讨脓毒血症时肾脏血红素加氧酶(HO)的变化及作用.方法盲肠结扎穿孔法复制大鼠败血症休克模型,术后9h和18h测心功能指标及血压,取肾脏测HO活性和MDA含量,Northenblot测HO-1mRNA表达.腹腔注射锌原卟啉IX(ZnPPIX)抑制HO活性.结果9h组心功能指标及血压无明显变化,MDA含量增加43.2%(P＜0.05);18h组血压下降、心功能降低,MDA含量升高139.6%(P＜0.01).9h组与18h组HO-1mRNA表达分别比对照组增加86.2%与97.3%,HO活性分别比对照组升高128.6%(P＜0.01)与139.9%(P＜0.01);应用ZnPPIX后,9h组与18h组HO活性分别比未用抑制剂组降低57.4%(P＜0.01)与62.0%(P＜0.01),MDA含量分别比未用抑制剂组增高43.5%与51.8%.讨论与结论[HTSS〗败血症休克时肾脏HO-1mRNA表达增加、HO活性增强,在此病理过程中HO具有抗氧化损伤作用.HO/CO通路被激活可能在延缓或阻止败血症休克时肾脏受损的内源性保护机制中占重要地位.     

Angiotensin-(1-7)对血管平滑肌细胞钙化的影响及信号转导通路

目的:在钙化大鼠主动脉血管平滑肌细胞上观察血管紧张素-(1-7)[Angiotensin-(1-7)]对钙化的影响及其信号通道。方法:用β-磷酸甘油制备钙化的大鼠血管平滑肌细胞,再以血管紧张素-(1-7)、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅱ 血管紧张素-(1-7)、选择性蛋白激酶A(PKA)或蛋白激酶C(PKC)抑制剂等干预,通过Von Kossa染色及检测钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达来探讨血管紧张素Ⅱ对钙化的影响及其信号通道。结果:血管紧张素-(1-7)抑制钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性(P>0.05)、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达(P<0.05),也抑制血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达的促进作用(P<0.05);血管紧张素-(1-7)提高血管平滑肌细胞内cAMP浓度(P<0.05),PKA抑制剂可阻断血管紧张素-(1-7)对钙化血管平滑肌细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性、骨钙素浓度和Cbfa1 mRNA表达的抑制作用(P<0.05)。结论:血管紧张素-(1-7)可抑制β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,并拮抗血管紧张素Ⅱ促进的血管平滑肌细胞钙化;这些效应与cAMP-PKA-Cbfa1信号途径有关。     

安石榴苷通过miR-132-5p/TRAF6途径调控oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的分子机制

目的:探讨安石榴苷(PUN)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞凋亡、炎症反应的影响及分子机制.方法:oxLDL诱导人主动脉血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型,不同浓度(5、10、20μg/ml)的PUN处理oxLDL诱导的血管平滑肌细胞.ELISA检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平....     

血红素加氧酶系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨血红素加氧酶(HO)系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其机制.方法采用倒置显微镜和MTT法观察VSMC生长状况;检测VSMC中cAMP/cGMP的水平、c-fos和c-myc mRNA及其蛋白质和HO-1蛋白质的表达.结果HO特异性抑制剂锌原卟啉-9(ZnPP-9)组在6、12 h的VSMCs生长曲线与ox-LDL组(C组)间无明显差异(P＞0.05);然而,48 h明显高于C组(P＜0.01);24、72 h与ox-LDL组重合,在终点(96h)略高于ox-LDL组(P＞0.05);ZnPP9组与ox-LDL组c-myc、c-fosmRNA及其蛋白和HO-1蛋白的表达均较强.尽管HO分解的代谢产物三价铁(Fe )螯合剂(去铁胺)组生长曲线高于ZnPP-9组(48h时与ZnPP-9组重合)和ox-LDL组(P＜0.01),但VSMCs体积明显增大,数量减少.结论锌原卟啉-9抑制血红素加氧酶活性而促进ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖效应,去铁胺螯合Fe 能抑制VSMCs数量增加.其机制可能与HO-1活性和c-myc、c-fosmRNA及其蛋白表达有关,而与HO-1蛋白表达和cAMP/cGMP水平无明显关系.