蜂毒素的研究新进展

蜂毒素是一种昆虫抗菌肽,具有抗菌、消炎、抗辐射,抗关节炎及对心血管方面等作用,论述了近年来在研究蜂毒素的结构、构效关系及抗肿瘤、抗病毒作用等诸方面的最新进展。     

蜂毒素的研究进展

目的：综述近年来国外对蜂毒素（melittin）的研究进展情况。方法：根据文献归纳,总结了蜂毒素的作用机理、生物学活性、临床应用方面的研究进展情况。结果：蜂毒素以膜结合的方式干扰细胞功能,影响蛋白激酶C、酪氨酸蛋白磷酸化及NFkB信号传导系统,并可诱导神经酰胺合成及细胞凋亡;具有肮炎、抗菌、抗病毒等多种生物学作用;并且对于治疗类风湿性关节炎等疾病亦展示出较好的治疗效果。结论：蜂毒素具有进一步研究、应用价值。     

蜂毒素的体内外抗肿瘤研究

目的 研究蜂毒素(melittin)在体内、外对H22细胞的增殖抑制作用,初步探讨其机制.方法 通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测melittin对H22细胞的增殖抑制情况;腹腔注射浓度为1、2、4 mg/(kg·d)的melittin,给药10 d,观察melittin对荷瘤小鼠的肿瘤抑制以及机体免疫变化情况.结果 melittin在体外对H22细胞有明显的抑制作用;体内实验表明浓度为2、4 mg/(kg·d)的melittin能够增强机体免疫力,对荷瘤小鼠肿瘤有着较强的抑制作用,且效果随剂量的增大而增强.结论 melittin在体外、体内均对H22细胞有着较强的抑制作用,可能通过增强机体免疫而产生作用.     

蜂毒素的SDS-PAGE质控方法研究

目的　建立以 SDS- PAGE进行蜂毒素质量控制的方法。方法　将通过凝胶色谱法从蜜蜂毒中分离纯化所得到的蜂毒素 ,以 SDS- PAGE法测定其相对分子质量 ,并通过凝胶成像扫描测定蜂毒素纯度。结果　蜂毒素样品电泳后在凝胶块上显示为均一条带 ,相对分子质量约为 2 80 0 ,含量为 (90 .5 9± 0 .85 ) % ,与 HPL C测定结果平行。结论　 SDS- PAGE法作为蜂毒素的质控方法 ,结果准确、可靠、简便     

蜂毒素的研究进展

目的 :综述近年来国外对蜂毒素 ( melittin)的研究进展情况。方法 :根据文献归纳 ,总结了蜂毒素的作用机理、生物学活性、临床应用方面的研究进展情况。结果 :蜂毒素以膜结合的方式干扰细胞功能 ,影响蛋白激酶 c、酪氨酸蛋白磷酸化及 NFκB信号传导系统 ,并可诱导神经酰胺合成及细胞凋亡 ;具有抗炎、抗菌、抗病毒等多种生物学作用 ;并且对于治疗类风湿性关节炎等疾病亦展示出较好的治疗效果。结论 :蜂毒素具有进一步研究、应用价值。     

蜂毒素的心血管药理作用

采用农学院分离提纯的蜂毒素(melittin),用大鼠乳头肌观察其对心肌电生理特性的影响。蜂毒素引起大鼠乳头肌收缩力减少,并产生挛缩作用,延长不应期,降低兴奋性,降低自律性。心房收缩力下降,使在心房出现负性阶梯现象及抑制休息后增强作用。提示抑制了快反应非自律性细胞钙通道第二组分Ⅰca.s钙的内流,也可能抑制了工作细胞细胞内钙的释     

生物活性肽与抗肿瘤免疫

抗肿瘤免疫反应在肿瘤的综合治疗中起重要作用,它有助于消除传统疗法无法杀死的残余癌细胞。在抗肿瘤免疫治疗中,抗肿瘤肽的研究及应用日益引起人们的重视。研究业已表明,抗肿瘤活性肽可以通过多层次,多途径激发机体自身免疫反应,使肿瘤重新回到机体的免疫监视之下,从而发挥抗肿瘤效果。     

蜂珍膏的稳定性研究

目的：考察蜂珍膏的稳定性。方法：用高效液相色谱法测定蜂珍膏中白杨素的含量,结合薄层鉴别、粒度检查、装量差异及微生物限度等检测,进行长期稳定性试验。结果：试验结果表明,蜂珍膏白杨素的含量,装量差异及微生物限度等检测各项指标均达到要求。结论：该制剂稳定性好,有效期可暂定为1.5年。     

金环蛇毒细胞毒素抗肿瘤研究现状的分析

恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病。肿瘤的防治工作一直是我国医药卫生领域的重点,寻找安全有效的药物是肿瘤治疗中的重要课题。本文将目前国内外有关金环蛇毒细胞毒素抗肿瘤的报道作简要综述。     

蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 研究蜂毒肽对体外培养的入神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 MTT法检测蜂毒肽对两种人神经胶质瘤细胞(U87、U251)的增殖抑制率;流式细胞仪和凝胶电泳法检测蜂毒肽对两种肿瘤细胞的凋亡诱导作用.结果 蜂毒肽能够明显抑制两种细胞的生长(P＜0.05);浓度为1、10、20、40、80、160、200 mg/L的蜂毒肽诱导U87和U251细胞的凋亡率分别达到12.80%、16.92%、22.69%、34.05%、41.82%、59.87%、80.25%和11.61%、16.21%、22.03%、30.57%、41.10%、58.33%、79.12%,其诱导凋亡作用与剂量呈正相关.结论 蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用.     

蜂毒素对豚鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的测定蜂毒素引起的豚鼠心肌细胞内游离钙浓度变化。方法分离成年豚鼠心肌细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光试剂，测定蜂毒素引起的心肌细胞内钙浓度变化。结果蜂毒素３．５×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ，使心肌细胞内钙浓度增加，维拉帕米（１０－６ｍｏｌ／Ｌ作用５ｍｉｎ），未明显拮抗蜂毒素引起的细胞内钙增加。结论蜂毒素可促进细胞内钙浓度增加，可能与维拉帕米所阻断的钙通道无关。     

融合蛋白AnxB1-MLT的表达、纯化及其对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用

目的 以膜联蛋白B1(AnxB1)为导向分子,与蜂毒素(MLT)基因融合,制备AnxB1-MLT融合蛋白,探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法 利用重叠延伸PCR技术构建AnxB1和MLT的融合基因AnxB1-MLT,克隆至原核表达载体pGEX-5T,转化至宿主菌K802,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导AnxB1-MLT融合蛋白表达,优化表达条件,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白。采用磷脂结合实验验证AnxB1-MLT融合蛋白的钙依赖性磷脂结合活性,采用CCK-8方法分别检测AnxB1-MLT融合蛋白对肝癌细胞系SMMC7721和HepG2细胞增殖的影响。结果 AnxB1-MLT融合蛋白在宿主菌K802中能够表达,在菌液生长至D₆₀₀为0.6时,加入诱导剂IPTG至终浓度0.2 mmol/L,低温(22～24℃)诱导表达4 h,可使蛋白表达量较高且在上清有表达。通过GST亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE结果显示在63 000处可见单一目的条带,纯度>95%。AnxB1-MLT融合蛋白保留了AnxB1的钙依赖性磷脂结合活性,并能显著抑制肝癌细胞系SMMC7721和HepG2的增殖。结论 成功制备了AnxB1-MLT融合蛋白,该融合蛋白具有AnxB1的钙依赖性磷脂结合活性,可抑制肝癌细胞SMMC7721和HepG2的增殖,为进一步利用动物实验研究AnxB1-MLT的抗肿瘤效果奠定了基础。     

薏苡仁生物转化条件优化及其抗肿瘤活性研究

目的:优化薏苡仁生物转化条件及比较其转化前后甲醇总提取物对A549肺癌细胞株的细胞毒活性.方法:采用L16(45)正交表,以甲醇总提取物得率为指标进行正交优选;用MTT法测定和比较转化前后薏苡仁甲醇总提取物对A549细胞的细胞毒活性.结果:薏苡仁的最佳转化条件为:5%的转化物含量,转化时间为10 h,转化温度为60℃;通过转化能明显提高甲醇总提取物对A549肺癌细胞的细胞毒作用.结论:本研究对薏苡仁的进一步研究及其它中药的生物转化具有一定的参考价值.     

蜂毒肽对新生大鼠心肌细胞Na^＋,K^＋—ATP酶基因表达的影响

目的　观察蜂毒肽对新生大鼠培养心肌细胞Na ,K ATP酶α1和 β1亚基mRNA的表达。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术。药物与培养的心肌细胞温育 1h后 ,观察蜂毒肽对Na ,K ATP酶基因表达的影响。用GAPDHmRNA作为内参照。　结果　蜂毒肽对α1亚基mRNA表达有显著促进作用。经GAPDH校正 ,光密度值对照组为 0 .47± 0 .14(n =5 ) ,蜂毒肽 0 .0 1mmol/L组为 0 .6 6± 0 .10 (n =6 ,P <0 .0 5 ) ,哇巴因 1mmol/L组为 0 .6 7± 0 .0 9(n =6 ,P <0 .0 5 )。蜂毒肽 0 .0 1mmol/L组和哇巴因 1mmol/L组对Na ,K ATP酶β1亚基mRNA表达无显著影响。结论　蜂毒肽 0 .0 1mmol/L对Na ,K ATP酶α1亚基mRNA表达有促进作用 ,但对 β1亚基mRNA的表达无促进作用     

洋地黄毒甙体内抗肿瘤活性及其增效作用

目的探讨洋地黄毒甙（ＤＴ）体内抗肿瘤活性及时常用化疗药５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）和环磷酰胺（ＣＴＸ）的增效作用。方法　　应用小鼠移植性肿瘤模型，观察药物对小鼠生命延长率或肿瘤抑制率的影响。在可耐受的剂量（０．１ｍｇ／ｋｇ·ｄ－１，ｉｐ）下治疗小鼠腹水瘤ＥＡＣ，Ｈ２２，Ｐ３８８及实体瘤Ｓ１８０，Ｕ１４。结果　　对腹水瘤无对抗作用，对实体瘤有一定抑制作用，抑瘤率分别为３４．６％，３５．１％。ＤＴ与５－ＦＵ（２００ｍｇ／ｋｇ·ｄ－１×１，ｉｐ）合用能显著提高５－ＦＵ对腹水瘤小鼠的生命延长率，分别达到５９．３％，７７．４％和９３．２％；与轻度抑瘤作用剂量（２０ｍｇ／ｋｇ·ｄ－１×２，ｉｐ）的ＣＴＸ合用，对实体瘤的抑瘤活性高于单独给药组，抑瘤率分别为７８．８％，８０．８％。结论　ＤＴ和５－ＦＵ或ＣＴＸ合用具有增强疗效的作用，毒性无明显相加。     

新生霉素结构单元合成与抗肿瘤活性

目的 研究新生霉素的结构单元诺维糖和香豆素的抗肿瘤活性. 方法 合成新生霉索的结构单元3-O-氨基甲酰基诺维糖(化合物2)和3-乙酰氨基-7-羟基香豆素(化合物3).MTT法测定两化合物与新生霉素抗K562细胞的活性. 结果 化合物2的IC50为2.287 mmol,化合物3的IC50为2.165 mmol,新生霉素的IC50为0.350 mmol. 结论 化合物2和化合物3具有抗肿瘤活性.但比新生霉素弱.     

γδ表型T淋巴细胞的抗肿瘤效应研究

目的：研究小鼠脾脏中的γδT淋巴细胞体外抗肿瘤活性。方法：用固相抗体体外扩增获γδT淋巴细胞,体外观察γδT淋巴细胞的抗肿瘤作用。结果：经γδT淋巴细胞免疫的小鼠肿瘤体积明显缩小,存活时间明显延长。结论：γδT淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答。     

蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响

目的 观察蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用环节。方法 以MTT法测定蜂毒素体外对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，运用流式细胞术分析增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并观察iv蜂毒素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果蜂毒素对H22细胞的抑制作用随药物浓度增加而增强；蜂毒素作用于H22细胞后，细胞PCNA平均荧光强度低于对照组；iv蜂毒素对小鼠皮下H22肝癌细胞具有明显的抑制作用，抑瘤作用随浓度增加而增强。结论蜂毒素在体内外对小鼠肝癌H22细胞增殖均有明显的抑制作用，下调细胞PCNA表达可能是其作用环节之一。     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。