安普贴治疗Ⅲ、Ⅳ期压疮效果观察

将 6 5例Ⅲ、Ⅳ期压疮病人随机分为观察组 (35例 )和对照组 (30例 )。对照组行常规处理。观察组在常规清创处理后外敷安普贴治疗。观察两组压疮愈合时间。结果压疮愈合时间观察组Ⅲ期压疮 (2 4 .6± 5 .1)d、Ⅳ期 (38.6± 6 .9)d ;对照组Ⅲ期压疮 (35 .3± 7.4 )d、Ⅳ期 (5 7.8± 8.9)d。两组比较 ,差异均有显著性意义。提示安普帖治疗Ⅲ、Ⅳ期压疮效果较好     

不同冻存液对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

观察不同冻存液对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSC)冻存复苏后生物学特性的影响,优化冻存方法.方法 脐带取自2011年1月至2011年12月在中山大学附属第三医院产科剖宫产的足月健康产妇.从脐带分离得到的hUC-MSC培养传代,取第3代细胞.根据冻存液不同分为3组,A组冻存液为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO):胎牛血清(fetal bovine serum,FBS):低糖杜氏培养基(low glucose Dulbecco's modified Eagle's medium,LG-DMEM)为1∶2∶7,B组为DMSO:FBS:LG-DMEM为1∶5∶4,C组为DMSO∶ FBS为1∶9,不含LG-DMEM.经冻存12个月,复苏细胞,以第3代未冻存细胞悬液作为对照组,采用台盼蓝染色法比较hUC-MSC的细胞存活率,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法比较细胞的生长情况绘制生长曲线,倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用流式细胞仪检测各组细胞的表面标记.结果 A、B、C三组的细胞存活率分别为(20±4)%、(71±8)%和(85±7)%.与C组比较,A组和B组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(均为P <0.05).细胞生长曲线显示,与对照组相比,C组hUC-MSC在各时间点细胞生长迅速,但差异无统计学意义(P>0.05);B组hUC-MSC在24 h、48 h、72 h细胞生长差异无统计学意义(P>0.05),在96 h时间点生长速率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而A组hUC-MSC在各个时间点细胞生长减慢,差异有统计学意义(均为P<0.05).形态学观察显示,A组细胞胞体宽大多角,并且较多分支,B组和C组细胞饱满,折光性好,呈长梭形、纺锤形或多角形.A组细胞复苏后细胞数目过少无法进行表面标记,B组和C组hUC-MSC表面标记物CD31、CD34、CD45、人类白细胞抗原(HLA)-DR表达阴性,CD105、CD90、CD44表达阳性.结论 含高浓度血清的冻存液适合hUC-MSC的长期保存,含90% FBS的冻存液为hUC-MSC的最佳冻存保护液.     

脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究现状

脊髓是神经功能的中介通路,脊髓损伤后,神经元和神经胶质细胞凋亡,脊髓空洞和胶质瘢痕的形成使脊髓功能永久性障碍[1-2].脊髓损伤后神经再生困难主要有如下几个因素:(1)神经细胞的坏死和凋亡,神经轴突的崩解失去传导功能;(2)神经细胞内源性的再生能力有限;(3)损伤局部微环境存在再生抑制因素.     

人脐带间充质干细胞应用研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的一种具有自我更新多向分化潜能的成体干细胞,存在于全身结缔组织和器官间质中.人脐带间充质干细胞成功克服了骨髓间充质干细胞含量低、受年龄影响大等诸多限制,而且具有来源广泛、免疫原性低等优点.Mitchell[1]首次自脐带华尔通氏胶中成功地分离出成纤维样细胞并证实其具有多能干细胞的分化潜能以后,对于脐带来源的MSCs便引起了人们的广泛关注.近年来实验研究表明脐带间充质干细胞在组织工程、神经系统、肝脏疾病、心血管系统、免疫疾病、肿瘤疾病等方面取得了巨大的进展.本文主要在脐带间充质干细胞应用方面予以综述.     

人脐带间充质干细胞用于衰老相关疾病治疗的研究进展

随着干细胞移植技术的发展,通过输入干细胞进行抗衰老治疗或治疗退行性疾病成为人们研究的热点。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)是一种存在于脐带沃顿胶以及血管周围组织中的独特前体细胞,具有自我更新和多向分化潜能。目前大量科学研究显示HUCMSCs通过再生和修复衰老的细胞、组织和器官达到抗衰老作用。该文对HUCMSCs的生物学特性、组织再生修复作用和抗衰老治疗机制的研究进展进行了详细回顾,并对目前HUCMSCs临床前研究现况进行了总结,提示HUCMSCs是一种具有良好应用潜力和价值的干细胞类型。     

人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种十分严重的综合性损伤,病情恢复十分困难。对病人的身心健康造成严重伤害,已成为新的影响人类生命质量的重要原因之一。SCI目前治疗方法很多,但干细胞移植最受大家宠爱。MSC最初的临床研究是1995年由Lazarus等     

脐带间充质干细胞在小鼠体内的示踪研究

目的:比较通过卵巢局部注射和尾静脉注射两种不同的移植方式,脐带间充质干细胞(UCMSCs)在卵巢损伤小鼠体内的分布、迁移和增殖,探讨最佳移植途径。方法:取8周龄ICR雌性小鼠12只,采用环磷酰胺(CTX)200 mg/kg+白消安(BUS)30 mg/kg一次性腹腔注射方式建立卵巢损伤小鼠模型;采用慢病毒转染途径构建标...     

人脐带间充质干细胞移植治疗晚期外伤性癫痫

目的探讨人脐带间充质干细胞移植治疗晚期外伤性癫痫的临床价值。方法对31例晚期外伤性癫痫患者进行人脐带间充质干细胞移植,观察临床效果。结果癫痫发作完全消失或仅有先兆者21例,极少发作(≤3次/年)者5例,发作明显改善(减少≥75%)者4例,无明显改善(减少<75%)者1例,满意率83.87%。结论人脐带间充质干细胞移植对治疗外伤性癫痫具有较好的效果。     

人脐带Wharton胶间充质干细胞的生物学特性及雪旺细胞分化研究

[目的]研究人脐带Wharton胶间充质干细胞(WJMSCs)的生物学特性及向雪旺细胞诱导分化的可能性,为神经组织工程提供新的种子细胞.[方法]去除新鲜人脐带动、静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,采用组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,免疫荧光鉴定WJMSCs的细胞表面特异标记CD44,CD105,CD34,CD45,Stro-1,Vimentin和Nestin,评价干细胞的生物学特性;采用b-FGF和Forskolin等诱导WJMSCs向雪旺细胞分化,光镜观察诱导后细胞形态的变化;免疫荧光染色鉴定雪旺细胞特异性标记物p75和GFAP的表达;Western分析诱导前后雪旺细胞特异性标记物GFAP的表达.[结果]分离培养的WJMSCs免疫荧光染色CD44、CD105、Stro-1和Vimentin表达阳性,而CD34、CD45和Nestin表达阴性,具有间充质干细胞的生物学特性;WJMSCs经过胶质细胞生长因子的作用,光镜下发现诱导的细胞形态与雪旺细胞相似;免疫荧光染色p75和GFAP阳性;Western结果显示诱导的雪旺细胞标记物GFAP表达阳性.[结论]人脐带Wharton胶间充质干细胞可诱导分化成为雪旺样细胞,其表型和分子特征与雪旺细胞相似,诱导分化的人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种理想的神经组织工程的种子细胞.     

血小板裂解液对人脐带间充质干细胞体外成软骨分化的影响

目的探讨血小板裂解液(platelet lysate,PL)在体外定向诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs)分化成软骨细胞中的作用。方法取健康产妇自愿捐赠脐带,采用胶原酶消化法分离hUCMSCs,体外培养扩增,流式细胞仪进行细胞表型鉴定。根据加入诱导培养基成分不同将实验分为以下3组:A组为H-DMEM培养基、10%FBS及10%PL,B组为H-DMEM培养基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β1、1×10-7 mol/L地塞米松、50μg/mL维生素C及1%胰岛素铁硒传递蛋白(insulin-transferrin-selenium,ITS),C组为H-DMEM培养基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β1、1×10-7 mol/L地塞米松、50μg/mL维生素C、1%ITS及10%PL。诱导培养2周,甲苯胺蓝染色检测各组软骨细胞基质的分泌,免疫荧光检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达,半定量RT-PCR检测蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原表达。结果分离得到的hUCMSCs不表达造血细胞的表面标记CD45、CD34和HLA-DR,而表达黏附分子和MSCs表面标记CD44、CD105和CD146。甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色示C组呈阳性,B组呈弱阳性,而A组均呈阴性。半定量RT-PCR检测示Aggrecan和Ⅱ型胶原在B、C组中均有表达,A组中未见表达;C组Aggrecan mRNA和Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论单纯10%PL不能诱导hUCMSCs成软骨分化,但它可当作成软骨诱导培养基的辅助添加剂,对hUCMSCs成软骨分化有明显促进作用,为构建组织工程软骨提供了新的可利用条件。     

低氧对人脐带间充质干细胞成脂肪分化的影响

目的：研究低氧（2%O2）对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）成脂肪分化的影响,为脂肪组织工程种子细胞的筛选提供实验依据。方法：培养条件有低氧（2%O2）、常氧（20%O2）、10%FBS完全培养基（GM）、10%FBS成脂培养基（DM）;将第3代hUCMSCs根据培养条件分为3组,对照组（常氧＋GM5天,常氧＋DM2周）、实验组1（低氧＋GM5天,低氧＋DM2周）、实验组2（低氧＋GM5天,常氧＋DM2周）;在诱导后2周分别进行油红O染色并观察其成脂效率。结果：与对照组相比,实验组1脂肪样细胞数量明显减少,实验组2脂肪样细胞数量明显增加。结论：将hUCMSCs预先进行低氧处理再转换为常氧培养可显著提高其成脂分化能力。     

黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的:探讨黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向神经细胞分化的作用。方法:体外对hUMSCs进行培养,以不同浓度黄连素(分4组：对照组即0 mg/L组、50 mg/L组、100 mg/L组和200 mg/L组)诱导其向神经样细胞分化,显微镜下观察细胞形态改变并记录,并通过细胞免疫化学及免疫荧光技术检测细胞表...     

局部移植人脐带间充质干细胞治疗大鼠皮瓣缺血再灌注损伤

目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUGMSCs)在受体内分化为血管内皮细胞、治疗皮瓣缺血再灌注损伤从而促进皮瓣成活的可能性.方法 体外增殖培养HUC-MSCs,并用流式细胞技术鉴定,以5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记HUC-MSCs后,移植于皮瓣缺血再灌注损伤的大鼠腹部皮瓣术区局部(治疗组),设PBS为对照组.术后每天观察皮瓣的颜色、皮纹、厚度、毛发生长、坏死范围及针刺出血情况等,并于术后7d处死大鼠,比较2组皮瓣的成活率,切取皮瓣组织行常规病理组织切片,分别进行免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,EdU染色检测供体细胞在受体皮瓣组织内的分布或分化.结果 术后7d治疗组大鼠皮瓣成活率为(97.58±3.41)％,对照组为(54.37±8.78)％,治疗组高于对照组(P＜0.05).治疗组大鼠VEGF的表达密度为138.27±8.67,明显高于对照组的56.17±14.13(P＜0.05).在成活皮瓣的部分小血管内皮可见EdU阳性细胞连续分布.结论 HUC-MSCs在体内可以分化为血管内皮细胞,直接参与生成新血管,建立新的微循环,并能增加皮瓣局部VEGF的表达,促进血管形成,修复缺血再灌注损伤的皮瓣,减轻皮瓣坏死,促进皮瓣成活.     

神经干细胞与BMSCs移植治疗脊髓损伤的研究进展

目的综述神经干细胞(neural stem cells,NSCs)与BMSCs的免疫学特性及治疗脊髓损伤(spinal cordinjury,SCI)的新进展。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对NSCs与BMSCs的免疫学特性、移植治疗SCI的实验研究与可能存在的问题进行分析。结果动物实验表明NSCs与BMSCs移植可促进SCI动物行为学改善,但由于两种干细胞的免疫学特性,同种异体干细胞移植后将产生免疫排斥反应。结论 NSCs与BMSCs对SCI有很好的治疗效果,但是免疫排斥问题值得考虑。     

促红细胞生成素和羊膜间充质干细胞协同治疗促进脊髓损伤再生

目的 观察促红细胞生成素和羊膜间充质干细胞对脊髓损伤(SCI)的综合治疗效应.方法 60只SD大鼠在T11水平进行脊髓半切术,形成2mm缺损.羊膜间充质干细胞(促红细胞生成素协同治疗为Ⅳ组,无促红细胞生成素协同治疗为Ⅲ组),生理盐水(促红细胞生成素协同治疗为Ⅱ组,无促红细胞生成素的为Ⅰ组)移植入缺损处.用损伤后3个月内的临床运动评分,8周时的细胞增殖、免疫组织化学结果 评价脊髓的修复.结果 临床运动评分,Ⅳ组(12.01±0.62)恢复优于Ⅲ组(9.47±0.36)、Ⅱ组(7.57±0.28),差异有统计学意义(P<0.01).并且Ⅳ组损伤区具有更高密度的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞(25.34±3.51),损伤脊髓远端有更高水平的抗微管相关蛋白-2(MAP-2)表达(8.47±0.87),其差异有统计学意义(P<0.01).结论 促红细胞生成素和羊膜间充质干细胞对于脊髓损伤有协同治疗作用.

Abstract：

Objective To evaluate the combined effects of erythropoietin and amnion-derived mesenchymal stem cells on spinal cord injury (SCI).Methods In 60 SD rats (n=15 in each group) transverse hemi-section at the T11 level was carried out, leaving an approximately 2-mm gap between the distal and proximal ends of the cord. Amnion-derived mesenchymal stem cells embedded in fibrin glue treated with or without erythropoietin (groups Ⅲ and Ⅳ) or fibrin glue with or without erythropoietin (groups Ⅰ and Ⅱ) were transplanted into the gap in the injured spinal cord. Spinal cord regeneration was assessed using a clinical locomotor rating scale scores (BBB scores) every week after injury, and immunohistochemistry 8 weeks after injury.Results Regeneration was more advanced in group Ⅳ (12.01±0.62) than in groups Ⅲ (9.47±0.36) or Ⅱ (7.57±0.28) according to the clinical motor score (P<0.01). Higher densities of bromodeoxyuridine (25.34±3.51) in the injured area and higher expression levels of MAP-2 (8.47±0.87) over the distal end of the injured spinal cord were observed in group Ⅳ than in groups Ⅱ or Ⅲ (P<0.01).Conclusion This synergy between erythropoietin and amnion-derived mesenchymal stem cells may be due to increased proliferation of progenitor cells in the injured area and increased expression of neuronal stem cell markers in the distal end of the injured cord.     

脐带间充质干细胞移植治疗急性脊髓损伤的临床价值

目的:探讨脐带间充质干细胞移植(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)治疗急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)的临床价值。方法:选择2017年1月～2018年1月我院收治的50例ASCI患者作为研究组,同时以同期的50例ASCI患者作为对照组。所有患者在受伤后72h内进行减压内固定术,对照组患者给予抗炎、脱水、抗感染及神经营养等常规治疗,研究组患者在对照组的基础上采用腰穿鞘内注射脐带间充质干细胞。比较治疗前及治疗后3、6、12个月两组的功能指标恢复情况,包括ASIA分级与评分、Botsford及脊髓损伤独立量表Ⅲ(spinal cord independence measureⅢ,SCIM-Ⅲ)评分、T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、免疫球蛋白(Ig G、Ig A、Ig M),观察不良反应(头痛、发热、胃肠功能紊乱、尿路感染等)发生情况。结果:治疗后3、6、12个月,两组的ASIA等级改善率、ASIA运动评分、ASIA感觉评分、Botsford评分及SCIM-Ⅲ评分均呈不断增高趋势(P0.05),CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平呈不断降低趋势(P0.05),CD8+、Ig G、Ig A、Ig M水平均无明显变化(P0.05),研究组的ASIA等级改善率、ASIA运动评分、ASI感觉评分、Botsford评分及SCIM-Ⅲ评分均明显高于对照组(P0.05),两组之间的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Ig G、Ig A、Ig M水平比较差异无统计学意义(P0.05);研究组与对照组的不良反应发生率分别为18.0%、14.0%,两组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:间充质干细胞能够明显促进ASCI患者的神经功能恢复,不影响体液免疫且不增加不良反应发生率。     

不同组织来源间充质干细胞体外成骨分化能力的比较研究

目的比较成人脂肪间充质干细胞(ASCs)、脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨能力,选择优势干细胞种类作为应用于骨组织工程治疗骨缺损的种子细胞。方法采用含10%胎牛血清的DMEM/Ham’s F-12培养液培养3种MSCs。取3种MSCs的P3代,通过CCK8方法检测其增殖能力;通过流式细胞仪进行鉴定;通过碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测骨分化蛋白ALP的分泌和矿化钙结节的沉积,并对钙结节进行定量分析;通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法检测骨再生相关基因的表达。结果 3种P3代MSCs在3~5d之间增殖均处于对数生长期;流式鉴定3种细胞的表面标志物阳性率:CD44、CD90和CD105均高于97%,阴性率:CD14、CD34和CD45均低于1%;ALP染色结果显示3种MSCs成骨诱导9d时,细胞内均表达ALP,茜素红染色结果显示成骨诱导18d时,均呈现较好的矿化能力,BMSCs和UC-MSCs成骨诱导后形成的钙结节无显著性差异;RT-q PCR结果显示3种MSCs成骨诱导组相比较于对照组,成骨再生相关基因Osterix、ALP、I型胶原(COL1)和骨钙素(OCN)均显著性高表达;3种MSCs成骨诱导9d时,UC-MSCs实验组的COLI基因表达显著性高于BMSCs,成骨诱导18d时,ASCs实验组的Osterix基因表达显著性高于BMSCs。结论 ASCs和UC-MSCs具有一定的成骨矿化能力,有望成为骨组织工程治疗骨缺损的种子细胞。     

脐血间充质干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究

目的：分离培养人脐血间充质干细胞（human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells,hUCB-MSC）,体外观察其生长特性,并在特定条件下诱导分化,探讨其成脂成骨分化能力.方法：采用沉降法和密度梯度离心结合贴壁培养法自脐血中分离间充质干细胞,倒置显微镜下观察其形态及生长情况;流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞表面标志物;用茜素红染色和油红0染色分别鉴定其成骨成脂分化能力.结果：纯化的hUCB-MSC贴壁生长,呈均一梭形,具有较强的增值能力,流式细胞仪分析P3代hUCB-MSC稳定表达间充质干细胞表面抗原标志CD73,CD105和CD90等,不表达造血标志CD34和CD45;成骨诱导后3周后细胞茜素红染色阳性;成脂诱导3周后细胞油红0染色阳性.结论：本实验分离的hUCB-MSC具有较强的增殖能力,表达间充质干细胞的表面标记,具有成骨成脂分化潜能.     

Distribution of infused umbilical cord mesenchymal stem cells in a rat model of renal interstitial fibrosis

Abstract

Aims: Stem cell transplantation for the treatment of kidney diseases is dependent on choice of transplant pathway. We evaluated the safety of human umbilical cord mesenchymal stem cells through peripheral infusion and their distribution in a rat model of renal interstitial fibrosis (RIF). Method: Cryopreserved umbilical cord mesenchymal stem cells were infused via tail vein injection into rats with unilateral ureteral obstruction and Sham-operated. Blood, kidney, heart, liver, spleen and lung were collected at 14, 21, and 28 days after infusion. Testing included microscopic observation of kidney morphological changes and immunohistochemical testing to identify and count the number of MAB1281 (labeled human cells) positive cells in the heart, liver, spleen, lungs, and kidneys of different treatment groups. Results: There was no significant difference in the Sham-operated group and Sham-operated?+?cell transplantation group at different time points. Human cells were identified mainly in the lungs, spleen, and kidney. The number of human umbilical cord mesenchymal stem cells in the kidney was greater in the unilateral ureteral obstruction?+?cell transplantation group, compared to the Sham-operated?+?cell transplantation group. human umbilical cord mesenchymal stem cells were mainly located in the interstitium of the left kidney. These results suggest that infused mesenchymal stem cells were primed to engraft a damaged kidney, especially damaged renal interstitium. Conclusions: Intravenous infusion of exogenous umbilical cord mesenchymal stem cells is feasible and safe. Infused mesenchymal stem cells can reach damaged kidney tissues with obstructive RIF after a vein graft.